Способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови Советский патент 1982 года по МПК G01N33/68 

(54) СПСХЮБ РАЗДЕЛЕНИЯ АРИЛЭСТЕРАЗЫ И АЛЬБУМИНА СЫВОРОТКИ КРОВИ Изобретение относится к медицине, а именно к способам выделения белков и ферментов методом электрофореза. Известен способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле ij Однако при осуществлении известного способа затруднена идентификация фракции арилэстеразы, определение ее содержания в сыворотке крови, так как фракция арилэстеразы обладает относительной электрофоретической подвижностью, близкой к подвижности альбумина, чго снижает точность получаемых результатов и не позволяет использовать электрофорез для выделения арилэстеразы в чистом виде. Цель изофетення - повышение точности способа. Указаш1ая цель достигается тем, что при осуществлении способа разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле, сыворотку предварительно эмуль гируют олеиновой кислотой, взятой до конечной концентрации 0,ОО1-0,ОО2 М. Способ осуществляется следующим образом. Перед электрофорезом к сыворотке крови Добавляют жирную кислоту, например олеиновую, в концентрации О,ОО10,002 М. При этом арилэстераза офазует комплен; с жирной кислотой, обладающей более высокой электрофоретической подвижностью, чем фракция альбумина или арилэстераза до прибавления жирной кислоты. За счет этого арилэстераза передвигается к аноду с большей скоростью., что позволяет выделять ее в первой фракции в практически чистом от других белков виде. Выявление локализации арилэстеразы на электрофореграмме и ее элюироваиие производят известным мето-цом. П р и м е р. к сьторотке крови человека добавляют олеиновую кислоту из расчета 0,5 мг/мл и тщательно перемещивают в пробирке стеклянной палочкой в те- чение 4-5 мил до получения эмульсин. Пробу получетшой Tajott-i офазом эмульсии вносят в стартовую лунку в 1,01, агаровом гепе с медшшловым фером рН 8у 2-8,4, К электродам подключают напряжение от источника постоянного тока и проводят электрофорез. По истечении времени, достаточного для оптимального разделения (1,0-1,2 ч) арилэстеразы и альбумина, электрофорез прекращают. От основного агарового бло- ка, в котором проводился электрофорез, отрезают контрольную электрофореграмму и в ней выявляют локапизацию фракций арилэстераз. С этой целью ее инкубируют в 0,01-0,02%-ом растворе 2-нафтил ацетата с 0,03-0,04% прочного синего Б в ОД: и, фосфатном буфере рН 7,07,8. Из основной части блока агарового геля вырезают участок, соответствующий локализации арилэстеразы. Этот участок помещают в центрифужную пробирку, замораживают при 2 0-3 о С, размораживают и центрифугируют при 1ООО об/мин. Надосадочную жидкость сливают, диали- зуют .в целлофановом мешке против дистиллированной воды при 4-5 С и высуплгаают лиофильной сушкой. Полученный препарат арилэстеразы является практи- чески чистым, так как при повторном электрофорезе образует одну белковую . , ,, .. зону, обладагаи то ферментативными свой ствами арилэстеразы (индекс ЗД.1.2 no Международной классификации и номенклатуре ферментов J , гидролизует 2-}1афггилацетат, активируется Са) угнетается тяжелыми металлами и комплексоо браэовате лями, Предлагаемый способ позволяет повысить точность полученных результатов за счет повьпиения электрог юретической подвижности арилэстеразы сыворотки крови при эмульгировании с олеиновой кислотой с 1,О-1Д до 1,5-1,6 по отношению к подвижности альбумина, при этом ария- эстеразу выделяют в шстом виде в первой фракции. Формула изобретения Способ разделения арилэстеразы и альбумина сыворотки крови путем проведения электрофореза в геле, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с полью повышения точности способа, сыворотку крови предварительно эмульгируют олеиновой кислотой, взятой до конечной концентрации 0 001-г... О,ОО2 М. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе l.Ur-iee D.Cliaracterisaiion des ifioEinesterases etdautres esterci es. |Cartiox. apres ef-ectropbgrese let iTYimuvioe.E.ectvopbore5e. en o ePose. JD.AppEica-tioM q Ee-tude des estev ases dU -buwiOH у огтоС. Ann UnStPa teuv, V.-101,1961, p. 104.