Способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам Советский патент 1990 года по МПК C12Q1/00 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения чувствительности микроорганизмов к лекарственным препаратам.

Известен способ определения чувствительности микроорганизмов к лекарственным препаратам путем добавления последних в питательные среды, на которых растут микроорганизмы.

К недостаткам способа относится его низкая чувствительность.

Ближайшим техническим решением по технической сущности и достигаемому эффекту является способ определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при сепсисе, предусматривающий посев материала или чистой культуры микроорганизмов, взятых от больного, на плотную питательСО

ную среду и наложение на нее стандартных бумажных дисков, пропитанных

to раствором антибиотиков.

СД

Согласно известному способу создается лабораторная система: плотная питательная среда + микроорганизм +

+ бумажный диск, пропитанньй антибиотиком. Чувствительность микробов к лекарствам определяют через 18-24 ч инкубации при 37°С по ширине зоны задержки роста микроорганизмов вокруг диска.

Недостатками способа являются частое несовпадение данных по чувствительности микробов к лекарствам с

клиническими наблюдениями; лабораторная система: питательная среда + 4 микроорганизм + антибиотик - не отражает естественных взаимодействий системы: органи- -т С3оль и)го -i- м;;кг;,ми 4- лек аре ТВ о« Це.чыо изобретения является гкиЛ)шелие точности исслел.ования. Поставленная цель достигается тем, что в способе определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам при сепсисе, предусматрнвающе:- иосев материала или -п-тстой культуры микроорганизмов, взятых от больного, на плотную Г11- тательиую сре ду и наложение на нее стандартных бумажных дисков 5 пропитанных раство-ром антибнотиков J. предложено вводртть н питательную среду 40-60% крови тог Же болрзного и оротовую кислоту или ее соль, или уридин-5-монофосфа1ч Сущность предлагаемого способа заключается с следующем. На лекарст венный препарат в организме больного действуют ферменты патогетгы. мнкро бон (;ки;мтт,иллаза и 7ф .), продукты обмена микробов J рН внутреннего средь организма антитела больного если он раньпе лечи; ся этим препаратом и име ет к нему аллергическую реакцию, мне гочислеьные ферменты макроорганизма и т.д. На возбудителя снойнон ияфекп,;ги в организме больргого влияют: система комплемент-пропердин, антитела (и Г-мунные гаммаглобулины) ,. фагоциты другие ферменты гчакроорганизма ::т,д Таким образом в естественно /- ус-ловиях система организм больного - -г микроб + лекггрсгво имео чногО1; с- ленные реакции взаимог(ействия ее к-ом понентов, В предлагаемом: изобретении иеполь зуется новая система определения y-B ствительности микробов к лекарствам, которая полностью имитирует естественную систему, Готовят питательную среду: мясо-пептонный агар с добавле:иием 50% цтп ратной крови бо1П:|Ного npi -t-37 . На эту среду засевают гной или другой материал, содержащий возбудите.г/е от того же больного. Посев вьтолмяют сплошным газоном и после этого ка поверхкостт. агара накладывают .диски, пропитаР1ные антиби(1тиками или други ми антимикробными препаратами. Чавгк.и инкубируют при -i-J С н течение 18--2u и результат учитывают по ширине зоны за;1ержки роста микроорганизмов вокр у Г и н д и к а Торн о i о л f-i с к а , , и,елыо исключения связывания лекарственного препарата альбуминами кропи в момент при1Ч)товления кровяHoio агара в него ;;обавляют оротовую кислоту ИоЧИ ее соли (нанример, оротат калия) или ур /Г1-ги-5-монофосфат, так как эти соединения по.лностью инг-:1бируют связывание лекарспв альбумин.ами: крови, На одну -чашку Петри берут 1 M:I O SI-Horo раствора оротата калия, Цозу его расчитывагс-т следующим образом. Берут максимальную разовую дозу, у-чт.;ть:зают среднее ко.пичество крови у человека весом 70 кг и рассчитывают, -СКОЛЬКО приходится оротата калпп на -о количество крови, которое идет на приготовление кровяного агара (п/м мерно 10 мл крови). ели определение микромето- дом на мален л их чашках или на пластинках, то цозу оротата уменьшают в соответствии с умепьше ием взятогс; Д1Ш опыта объема крови, лаборатории лапный метод может поименяться в одном варианте (1а фимер5 10 мл 50% кровяного агара) :;. поэтому можрю пользоваться одной рассчитанной дозой оротата калия. Предложенный способ является стро о индивидуальнь м для каж;иго конк Т1 е т н о г о больного. С.пособ поясняется конкретным примером, П р и м е р. Посев гноя больного лрозодг-ши на 50% кровяной агар. Для приготовления после;,, ;-i его и с ноль зов а.ии цитратную кровь больнсио (па 10,м.кровк 1 мл pacTBojia .гптноннокиелого ьатрия) с добавлением оротата калия (1 мл 055%-пого рас-т.чора сзротата KajrHH на 10 мл крови). После н.акла;дывания Д55сков посев инкубировали. при +37°С в течение 24 ч. ()пред,елепие с -т е п е н и ч у в с т в и т е л ь i i ости микроорганизмов к антибиотикам произ в(;ли:п-1 путем измерепия диаметра задержки роста., В кoнтpoльiioм варианте на мясопегггонный агщт 8 чайке Петри засевали cojioiuHf-iM газоном гной от больного и накладь вали станл.арт1(1е диски, проHHTaiiHHe антибиотиками , Учет Б опыте и контро-ц- прор), измеряя ;; ирину зо)1- заде11жкя рсдта микробов вокруг ntiCKoB с л;тибиотиками. Полученные резулг тагм пмпел.ены в таблиг е. 59 Различия в двух методах иллюстрируются графиками (фиг. 1, фиг. 2), Полученные результаты по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам предлагаемым методом сообщались в клиники, где эти данные применялись при лечении больных, т.е. врачи назначили больным антибиотики, которые оказывались активными в отношении микробов по предлагаемому способу. Клинические наблюдения за 38 боль ными с гнойной инфекцией показали, что лабораторные рекомендации, получинные на основе предлагаемого метоСравнение чувствительности микроорг да, не расходились с клиникой, т.е. во всех случаях рекомендованные антибиотики больным оказались эффекттиБяыми при лечении. Таким образом, предложенный спо- соб дает результаты, не совпадающие со стандартным методом, отражает реальные взаимоотношения в организме больного между ассоциацией гноеродных микробов и лекарственным препаратом, позволяет надежно определить те антибиотики, которые дадут лечебный эффект у конкретного больного, а также назначить эффективное лечение больному через 18-24 ч, что имеет особое значение при сепсисе. ов к антибиотикам по двум методам

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБИОТИКАМ при сепсисе, предусматриваюгций посев материала или чистой культуры микроорганизмов, взятых от больного на плотную питательную среду и наложение на нее стандартных бумажных дисковS пропитанных раствором антибиотиков, отличающнйся тем, что, с целью повышения точности исследования, в питательную среду вводят 40-60% крови того же больного и оротовую кислоту или ее соль или iS уридин-5-монофосфат.

5

t

W

20ЮО

НечддстВительные Чдд тбительные шгпаммы штаммы10 2Qfif cSoiLue

Фиъ.1

01

60 50

40

штаммы

ЦддстВитемные штаммы €6ijiLue 20мм