СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕМОКУЛЬТУРЫ Российский патент 1997 года по МПК C12N1/04 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии и может быть использовано как способ выделения микроорганизмов в диагностических целях, например, при диагностике сепсиса.

Известен способ выделения гемокультуры при подозрении на сепсис, для чего стерильно взятую кровь в объеме 4-10 мл засевают в колбу с 50-100 мл сахарного бульона, содержащего 2% глюкозы. Посевы помещают в термостат и культивируют в оптимальных температурных условиях. Наличие бактерий выявляют микроскопией и бактериологическим исследованием [1] Недостатком известного способа является его низкая диагностическая чувствительность, обусловленная малым объемом используемой крови. Даже при наличии сепсиса, особенно вялотекущего, в 10 мл крови микробов может не оказаться.

Известен способ выделения и концентрации микроорганизмов из воды, включающий пропускание ее через сорбционные колонки с ионообменными смолами, десорбцию микроорганизмов растворами солей определенной концентрации и индикацию микроорганизмов в концентрате [2] Данный способ не обеспечивает роста микроорганизмов в концентрате из-за высокого содержания в нем десорбирующих солей. Для выделения микробов из крови этот способ не применялся.

Известна питательная среда с гемолизированной кровью для выделения гемокультуры полужидкий агар Хоттингера с предварительным гемолизом крови, содержащий 0,15% агара, 2% глюкозы, хлористого натрия и воду [3] Для выделения гемокультуры на этой среде используют 5 мл крови больного. Среда считается одной из лучших для выделения гемокультуры и наиболее близка к предлагаемой среде. Недостатком данной среды является отсутствие в ее составе веществ, способных нейтрализовать антибиотики, которые используются при лечении сепсиса и попадают вместе с кровью в питательную среду, подавляя рост микробов.

Известен способ выделения гемокультуры путем удаления микробных клеток из крови, фильтрации плазмы и концентрирования микробов на фильтре с последующей инкубацией фильтра на поверхности плотной питательной среды [4] Чувствительность этого способа повышается пропорционально увеличению объема используемой крови. Этот способ является наиболее близким техническим решением к предлагаемому. Недостатком известного способа является то, что применяемые для достижения высокой чувствительности большие объемы крови необратимо теряются для больного. Кроме того, извлечение клеток крови перед фильтрацией ведет к потере микробов, так как часть их адсорбируется на мембранах эритроцитов.

Целью предлагаемого изобретения является повышение чувствительного способа выделения гемокультуры и усовершенствование питательной среды для обеспечения десорбции микробов и нейтрализации содержащихся в крови антибиотиков.

Поставленная цель достигается тем, что фильтрацию крови и концентрирование микробов ведут в процессе экстракорпоральной гемоперфузии на твердых сорбентах; затем отработанную колонку с сорбентом заполняют жидкой питательной средой, которая обеспечивает десорбцию микробов и инактивирование антибиотиков и состоит из стандартного лечебного препарата "Гемодез" и равного количества стерильного 2% раствора глюкозы на 0,9 водном растворе хлористого натрия; заполненную питательной средой колонку с сорбентом инкубируют в оптимальных условиях роста микробов, после чего подвергают культуру бактериоскопическому и бактериологическому исследованию.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Больному производят экстракорпоральную гемоперфузию /гемосорбцию/ на твердых сорбентах, напрмиер, на угле СКТ-6. После сеанса гемосорбции колонку отключают от сосудистой системы человека, например, венозной, и отработанную колонку 3 с сорбентом, пропитанным кровью, заполняют жидкой питательной средой указанного состава. После этого колонку встряхивают в течение 15-20 мин и инкубируют при оптимальной температуре до помутнения среды, а затем исследуют содержимое посева. Для приготовления питательной среды смешивают равные объемы лечебного препарата "Гемодез" и стерильного 2% раствора глюкозы на 0,9% водном растворе хлористого натрия. Лечебный препарат "Гемодез" представляет собой водно-солевой раствор, содержащий 6% низкомолекулярного поливинилпирролидона с молекулярной массой 12600±2 700 и ионы натрия, калия, кальция, магния и хлора, и применяется для дезинтоксикации организма [5]
Эффективность способа проверена в ряде опытов. Результаты хорошо воспроизводимы. Рост микробов не предлагаемой среде отмечается, как правило, через 24-48 ч, тогда как при использовании известных питательных сред /сахарный бульон/ рост микробов в колонке наблюдается на 7-е сутки. Сравнительные с аналогом результаты представлены в таблице.

Из приведенных 15 случаев до гемосорбции положительный результат при использовании стандартного метода / аналога/ получен в 2 случаях, тогда как применение предложенного способа дало положительные результаты в 14 случаях. Из 8 случаев параллельного использования при гемосорбции прототипа питательной среды положительный результат отмечен лишь в 1 случае.

Преимуществом предлагаемого способа является то, что фильтрации во время сеанса гемосорбции подвергается значительный объем крови /около 5-10 л/, что создает реальные условия для выделения предельно малого количества микробов из крови. Адсорбции микробов на мембранах эритроцитов не происходит, так как адсорбционная способность у угля значительно выше, чем у эритроцитов. Микробы можно выделять из лимфы, спинномозговой жидкости, асцита и плазмы.

Использование: микробиология. Сущность изобретения: проводят фильтрацию крови, концентрирование микроорганизмов на твердых сорбентах, обработку сорбентов жидкой питательной средой, обеспечивающих десорбцию микроорганизмов и инактивацию антибиотиков, с последующей инкубацией и исследованием. Причем фильтрацию крови и концентрирование микроорганизмов ведут во время сеанса гемадсорбции, а питательная среда содержит препарат "Гемодез", к которому добавлены равные количества 2%-ного раствора глюкозы на 0,9%-ном водном растворе хлористого натрия. 1 табл.

Способ выделения гемокультуры, включающий фильтрацию крови с последующим концентрированием бактерий и инкубацией их на сорбенте в питательной среде, отличающийся тем, что фильтрацию крови и концентрирование бактерий проводят при экстракорпоральной гемоперфузии, а инкубацию осуществляют в питательной среде, содержащей равные объемы препарата "Гемодез" и 2%-ного раствора глюкозы на 0,9%-ном водном растворе хлористого натрия.