Способ получения полипептидов Советский патент 1985 года по МПК A61K38/08 

;О

СО Ji

СП

00

со 1 . Изобретение относится к химикофармацевтической промьшшенности и касается получения физиологически активных препаратов для лечения иммунодефицитных состояний. Известен способ получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией ш. Однако указанный способ является трудоемким, имеет сложную многостадийную технологию производства и не позволяет получать ряд биологически активных веществ, содержащихся в тимусе. Цель изобретения - упрощение способа и вьщеление полипептидов основной природы. Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, цен трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ац тоном с последующей фильтрацией, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии хлорида цин ка в течение 48-72 ч, далее экстра центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном. Способ поясняется следующим при мереям. Пример 1. Исходное количество тимуса 500 г. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови жировой клетчатки, промьшают водой затем ацетоном и помещают в соотно нии 1:4 при 4-1 ОС. Через 24 ч аце тон сливают., а ткань тим,уса взвеши вают и гомогенизируют. Гомогенат помещают в 3%-ный раствор уксусной кислоты Из расчета 1 часть гомоген та на 6 частей раствора кислоты (,5-4,0). К раствору кислоты д бавляют ZhClj из расчета 1 г ZnCl. на 1л 3% раствора кислоты. Экстра цию проводят Втечение 72 ч. По ок чании экстракции субстрат центрифу руют при 3000 сб../мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1,5 (1 часть супернатанта и 5 частей ацетона). Осадок промывают ацетоном и высуши вают на фильтре. Получают 5,0-5,5 белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) получе.нный порошок растворяют в 550 мл 5% уксусной кислоты. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в-стерильные флаконы по 1 ил, затем лиофилизируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. В результате в одном флаконе содержится 10 мг веществ, вьщеляемых из тимуса. Пример 2, Исходное количество тимуса Ю кг. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой ткани, промывают водой, затем ацетоном и помещают в ацетон в соотношении 1:4 при 4-10 С. Перед экстракцией ацетон сливают, а ткань тимуса взвешивают и гомогенизируют. Гомогенат ткани тимуса помещают в 3%-ный раствор уксусной кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты (,5-4,0). К раствору кислоты добавляют ZnClj из расчета 1 г ZnCl на 1 л 3%-ного раствора кислоты. Экстракцию проводят в течение 72 ч в емкости с ме- шалкой для периодического перемешивания субстрата. По окончании экстрак-. ции субстрат центрифугируют при 3000 об /мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1:5. Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают 100-110 г белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Дпя получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученньц порошок растворяют в 11% и 5%-ной уксусной кислоте. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофилизируют и закрывают стерильными резинов з1ми пробками. Один флакон препарата содержит 10 мг веществ, вьщеленных из тимуса. Полученный тималин представляет собой комплекс веществ (нуклеопептидов и полипептидов) со следующими характеристиками. При изучении в эксперименте установлена высокая биологическая активность препарата (стимуляция клеточного иммунитета, процессов регенерации и гомопоэза). В терапевтических дозах препарат не обладает токсичес-

кими свойствами и не вызывает аллергических реакций.

Результаты экспериментального и клинического изучения показали, что препарат обладает выраженной биологической активностью, которая вьфажается в усилении иммунологической реактивности (увеличение количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, антителообразующих клеток в селезенке в

Состав тималина

ответ на введение тимусзависимого антигена) и сможет найти широкое применение в медицинской практике для лечения и преду11реядения ряда заболеваний человека.

Способ получения тималина позволяет выделять нуклеопротеиды и пептиды основной природы отличается простотой, содержит меньшее количество опера1щй 6 стадий).

Иэоэлектрическая

точка

(to.2 ед.рН)

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОПИПЕПТИДОВ путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, ценШ :ттщ |ЗГ::,,::,13 трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией,отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и вьвделения полипептидов основной природы, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном.

Нуклеопептиды 75-85 Кислые полипеп10-20 t5 Основные полипептиды660 sSOOO 5000