Штамм вIFIDовастеRIUм LоNGUм ДК-100,N2168,используемый для изучения приживления экзогенных бифидобактерий в макроорганизме Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 C12R1/00 

Ь-10 ч, время генерации 2,,75 урожай клеток (5,91+1,22)х1.0. Пос лиофильнрго высушивания -культуры продолжительность лаг-фазы и время генерации могут увеличиваться. Пиг ментов не образуют. Физиологические признаки. Облигатиый анаэроб, растет в высоком столбике агара или ж.идкой среды. Максимум pdcTa при 37,5С. Биохимические свойства. Сбражив ет арабинозу, ксилозу, лактозу, ва риабельно-маннозу. Чувствительность к антибиотикам (минимальные ингибирующие концентр ции в мкг/мл или ЕД/мл). Антибиотик ДК-100 Стрептомицин 200 Мономицин 200 Канамицин 100 200 Гентамицин 40 Пеницилин 0,2-1,0 Ампициллин 0,5-1,0 2 Тетрациклин Рифампицин i 10 0,8 Хлорамфеникол Линкомицин 0,1 7100 Нистатин Антагонистические свойства. При совместном культивировании в количе венном соотношении 1:1 в жидкой ср де Блэурокка подавляет рост 92,03% Eseherichia coli (штамм III) , 100,00% Eseherichia coji Ory ( штамм 122) , 99,90% Shidella flexneri (штамм 170) и 84,51% Proteqs morgan (штамм 12), обладающих энтеропатогенными свойствами. Штамм ДК-100 с приобретением устойчивости к 100 мг/мл канамицина сохранил антагонистические свойства Лабораторная проверка показала его непатогенносты для...экспериментальн животных (мьашей, крыс, морских свинок;, а также для людей (в опытах на добровольцах). Примеры практического использова ния. При ме р 1. Изучали влияние совместного применения антибиотикоустойчивых бифидобактерий и канамиц на на выживаемость мышей при лучевой болезни. Беспородных мышей весом 16-18 г облучают на установке ТУБЭ-1200 в д зе 700 р (мощность дозы - 140 р/мин После облучения животных разделяют на 4 равные группы по 20 мьлшей в каждой. Первая группа животных полу чала перорально канамицин и бифидобактерий ДК-100 с 1 по 21 день посл облучения с интервалом в 48 ч. Вторая группа животных получала только антибиотики в те же сроки, что им ши 1-ой группы, третьей группе животных вводили только бифидобактери по аналогичной схеме, а четвертая группа животных получила физиологи ческий раствор хлористого натрия. Суточная доза канамицина составляла 1 мг на ифошь, бифидобактерий вводили в количестве 1 х 10 клеток на мышь. Антибиотик и бактерии вводили интрагастрально в объеме 0,25 мл. Опыт повторяли 4 раза. Резульаты опыта показали, что совместное применение устойчивых к 100 мг/мп канамицина бифидобактерий В. longura ДК-100 и канамицина оказывает выраженное влияние на увеличение процента выживаемости облученных мышей. Это выявляется с 12-13 дня после облучения и в последующие сроки наблюдения разница в количестве выживших шцей в группах леченых и нелеченых животных постоянно увеличивается. На 13 день после облучения процент выживаемости в 1,2, 3 и 4 группах составлял 56,6; 50,0; 46,6 и 13,3 соответственно.На 30 день выживаемость составляла 33,3; 26,6; 20,0 и 3,3 процента соответственно.-, Устойчивость бифидобактерийк антибиотикам позволяет начинать бактериотерапию одновременно с антибиотиками, способствуя предотвращению развития дисбактериоза у облученных мышей и увеличению за счет этого продолжительности их.жизни. П р и м е р 2. Определяли приживляемость бифидобактерий, устойчивых к 100 мг/мл канамицина, в желудочнокишечном тракте крыс-гнотобионТов и распределение этих микроорганизмов на слизистой различных отделов кишечника. В опыте используют 10 крыс-гнотобионтов в возрасте 6 недель. Животные получают бифидобактерий в течение 3 дней в дозе 1 х 10 клеток на крысу. Спустя 5,7, 15, 30 и 60 дней после окончания введения бифидобактерий делают высевы на 0,7%-ный агар Блэурокка от всех животных, а на 60 день животных забивают и из различных отделов кишечника выделяют отт резки по 4-6 см в длину. -Выделенные участки кишечника разрезаютв длину и тшательно промывают в физиологическом растворе хлористого натрия. После этого отрезки кишечника взвешивают, гомогенизируют с соответствующим количеством физиологического раствора и из различных разведений гомогената делают высев на 0,7% агар. Соответственно каждому отделу кишечника делают аналогичные посевы содержимого его ПОЛОСТИ. Применявшийся штамм хорошо прижился в кишечнике крыс и высевался в течение 2 мес наблюдения из испражнений в количестве 10-10 клеток на 1 г материала. Через 2 tf.ec количество бифидобактерий в полости и на слизистой различных отделов кишечника составило: тонкий кишечник - (1,0+ + 2,J)xlO и (2,0±2,4)xlO бактерий на 1 г материала соответственно; слепая кишка - (2,OiO,8)х10 и (1,7+ +0,6)х10 соответственно; поперечноободочная кишка - (1,9tO ,7) х10 и : (2,0+1,8)х10 соответственно. Воздействие детергентами и фермен ;тами на отрезки толстого кишечника, выделенные из моноконтаминированных крыс, не приводило к уменьшению/коли чества бифидоб.актерий на слизистой. П р и м е р 3. Определяли приживляемссть В. longum ДК-100 в желудочно-кишечном тракте конвенционных крыс и возможность их выделения в чистой культуре из кишечника конвенционных животных на среде с канамицином. Животных разделяют на 3 группы по 10 особей в каждой: первая группа жи вотных получает бифидобактерии в дозе Ixio клеток на крысу в течение 3 дней, вторая группа животных получает канамицин (50 мг/мг веса) од- новременно с бифидобактериями (1x10 клеток, на крысу), животные третьей группы не получают бифидобактерии. Через 5,7,15 дней гог югенаты слизистых и содержимого полости кишечника опытных и контрольных животных засевают на 0,7% агар Блэурокка с 80 мг/мл-канамицина. Результаты показали, что экзогенные антиби|отикоустойчивые штаммы успешно колонизировали кишечник конвенционных крыс и были обнаружены практически во всех отделах кишечника, высеваясь в чистой Культуре на среде с канамицином: 10 -10 в полости и на слизистой тощей кишки, 10 - на слизист полости подвздошной кишки, 10-10. - на слизистой и 10 в ПОЛОСТИ , слепой кишки, 10 - на слизистой и - в полости поперечноободочной кишки. Это ненамного меньше обычного популяционного уровнябифидобактерий у крыс и свидетедьствует о хорошем приживлении экзогенных бифидобактерии в кишечнике. Необходимо отметить, что одновременное введение. канамиЦина не снижает приживляемости данного штамма бифидобактерии в кишечнике. У контрольных животных ансшогичные бактерии не обна ружены. Предложенный штамм обладает действием, позволяющим вьвделять его в чистой культуре среди других представителей микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Штамм может найти применение дня изучения механизмов адгезии и вз&имоотношений бактерий желудочно-кишечного тракта, что позйолит усовершенствовать бактёриотерапию кишечных . заболеваний человека и животных. Формула изобретения Штамм Bifidobacterlmn longum ДК-100, В-2168 (Коллекция ЗНИИгенетика), используемый для изу- . чения приживления экзогенных бифидобактерии в макроорганизме. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Гончарова Г.И. с соавг. Культуральная, морфологическая и биохимическая характеристика Bacterium Ыfidum. Труды МНИИЭМ, М., 1969, т.XIII, с. 415-42.6.