Штамм вIFIDовастеRIUм LоNGUм Д4а200,NB-2170,используемый для изучения экзогенных бифидобактерий в макроорганизме Советский патент 1982 года по МПК C12N1/00 C12R1/01 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и ь/ржет быть испсльзовано для приготовления бакт ериальньах лечебных препаратов, а также в исследоЕаниях по изучению взаимодействия и возможности приживления экзогенных бифидобактерий в макроорганиэме.

Известен штамм Bifidobacterimn longum 1.

Однако известный штамм не обладает достаточно высокой устойчивостью к антибиотикам и не предоставляется возможным выделить его среди других бактерий, заселяющих кишечник, после кнокуляции в микроорганизм и судить о приживлении экзогенных бактерий в различных отделах кишечника.

Целью изобретения являе- ся штамм бифидобактерий, обладающий антагонистической активностью, а также множественной устойчивостью к антибиотикам, позволяющей применять его в качестве лечебного бактерийного препарата для лечения кишечных инфекций одновременно с антибиотиками.

Для получения предложенного штамма использован исходный штамм Bifidor bacterium lonqum ДВА-13, обладающий , более высокой, по сравнению с произ-.

водственным штаммом, кислотообразующей и антогонистической активностью; выделенный из кишечника здорового 5 человека.

Из этого штамма селекционным путем получен штамм Bifidobacterium longum D4a200.

Штамм Bifidobacterivim longura

10 D4a200, испольэуеьмй.для изучения приживления экзогенных бифидобактерий в макроорганизме, хранится в коллекции ВНИИгенетика под номером В-2170.

Штамм бифиДовактерий Bifidobacte rium longum D4a200.имеет следующие морфологическую и физиологическую характеристики. Морфологические признаки. Клетки палочковидные, с утолщениями или У-образными раздвоениями,

20 в мазке располагаются беспорядочно, неподвижные, грамположительные (иногда грамвариабельные), внутри клеток выявляется зернистость. Культуральные признаки. В 0,7%-ом агаре Блзу25 рркка образуют колонии в виде пирамидок или дисков размером до 3-5 мм . в дис1метре в течение 3-5 сут. В жидкой среде Блэурокка растут по всей пробирке, кроме зоны аэробиоза, при

30 малой посевной дозе образуют гвоздики, на 3-5 сутки оседают на дно пробирки. На плотной и жидкой среде растут также в присутствии 50 мг/мл канамицина, 2 мг/мл гентамицина, 2 мг/мл мономицина и 200 мкг/мп ампициллина. Продолжитеность лагфазы 16-20 ч, время генерации 1,6 iO,75 ч, урожай клеток (1,27+iO , 19Гх X 10. После лиофильного высушивани лаг-фаза и время генерации могут удлиняться. Физиологические признаки облигатный анаэроб,растет в высоком столбике агара в пробирке или чашках Петри с плотной средой. Максимум рос та при 37 ,. Биохимические признаки Сбраживает арабинозу, ксилозу, лакто зу, вариабельно маннозу. Чувствительность к антибиотикам (минимальные ингибирующие концентра,11ии в мкг/мп или ED/МЛ) . Атибиотик . известный штамм D4a200 Стрептомицин200 Мономицин2200 Канамицин50200 Гентамицин2200 Пенициллин , 0,2-1,0 Ампициллин.220 Тетрациклин,2 Рифампицин10 Хлорамфеникол 0,8 Липкомицин0,1 . Нистатин100 Антагонистические свойства. При сов местном культивировании в количественном соотношении 1:1 в жидкой сре де Блэурокка подавляет рост 99,99% Escherichia coli (штамм 111), 98,88 Escherichia coli 05.5 (штамм 12 99,94% Shigella f1ехпег1(штамм 170) 98,50+ Proteus morgani(штамм 12), обладающих энтеропатогенными свойст вами . Штамм 4а200 обладает антагонисти ч еской активностью. Лабораторная пр верка показывает его непатогенность для экспериментальных животных (мышей, крыс, морских свинок), а также для людей (в опытах на добровольцах Примерьа практического использования. Пример. Изучают влияние комплексного применения антибиотико устойчивых бифидобактерий и ампициллина на выживаемость мышей при лучевой болезни. Беспородных мышей весом 16-18 г облучают на установке ГУБ 31-200 в дозе 700 р (мощность дозы - . 140 р/мин.). После облучения животных разделяют на 4 равные группы по 20 мышей в каждой. Первая группа жи вотных получает перорально ампициллин и бифидобактерий В longum D4a20 с 1 по 21 день после облучения с ин тервалом в 48 ч. Вторая группа животных получает только антибиотики в те же сроки , что и мьоши 1-ой груп яы, третьей группе животных вводят только бифидобактерий по аналогичной схеме, а четвертая группа животйых получает физиологический раствор хлористого натрия. Суточная доза ампициллина составляет 1 мг, бифидобактерий вводят в количестве 1 х. 10- клеток. Антибиотик и бактерии вводят интрагастрально в объеме 0,25 мл. Опыт повторяют 4 раза. Результаты опытов показывают, что комплексное применение устойчивых к антибиотикам бифидобактерий В. longmn D4a200 и ампициллина оказывает враженное влияние на увеличение процента выживаемости у облученных лмшей. Это выявляется с 13-16 дня после облучения и в последующие сроки наблюдения разница в количестве выживших мышей в группах леченых и нелеченых животных постоянно увеличивается. На 13 день аосле облучения процент выживаемости вД, 2, 3 и 4 группах составляет 50,bv2,2; 48,0±2,1; 54,0+1,7 и 32,Ov +1,9 соответственно. На 30 ейь выживаемость составляет 32,0+1,7; 23,0+.tl/9;29,0tl,5 и 4,6±1,2 процента соответственно. П р и м е р 2. Изучают влияние комплексного применения антибиотикоустойчивых бифидобактерий . и гентамицина на выживаемость мдцхей при лучевой болезни. Методика проведения опытов и группы животных аналогичны в примере 1, но вместо ампициллина для лечения, животных применяют генматицин в дозе 20 мкг на мышь. Применение устойчивых к антибиотикам бифидобактерий В. 1опдшп D4a200 и гентамицина также способствует увеличению выживаемости облученных мышей. Процент выживших мышей в 1,2,3 и 4 группах на 25 день после облучения составил 41,6+1,6; 20,0+1,9; 40,042,5 и 4,3+1,1 соответственно. Таким образом, устойчивость бифидобактерий к антибиотикам позволяет начинать бактериотерапию одновременно с антибиотиками, способствуя предотвращению развития дисбактериоза у облученных мышей и увеличение за счет этого продолжительности их жизни. П р и м е р 3. Штамм В. longum 4а200 используют для лечения новорожденных и грудных детей с энтероколитами и дисбактериозами кишечника совместно с антибиотиками(гёнтамицин, ампициллин,МОНОМИЦИН,нистатин).Группа больных (iCi чел.) получала бифидобактерий одновременно с антибиотиками 7 дней.Контрольная группа больных в этот период получала только антибиотики. В результате проведенного лечения в кишечнике опытной группы больных к 9 дню увеличивалось количество антибиотико-резистентных бифидобактерий (от О до 1x104- клеток/г) ,в связи с

чем общий уровень бифидобактериЯ увеличивался в 3 раза, количество стафилококков и стрептококков уменьшалось более, чем в 100 раз, общее количестро энтеробактерий снижалось Б 2 раза. У больных, получавших только антибиотики, на 9 день от начала лечения общее количество бифидобактерий уменьшалось в 10 раз по сравнению с исходным уровнем, антибиотикорезистентные бифйдобактерии не выявлялись, количество стафилакокков и стрептококков уменьшалось в 5 раз, уровень энтеробактерийГ увеличился в 2 раза .

Совместное введение антибиотиков и антибиотико-устойчивых бифйдобактерии при энтероколитах и дисбактвриозах кишечника способствует более быстрому и эффективному восстановлению номофлоры кишечника, чем лечение только антибиотиками.

Штамм может применяться также для изучения механизмов приживления в кишечнике экзогенных бифйдобактерии.

Таким образом, штамм бифйдобактерии В. iongum D4a;200 обладает новыми Свойствами, эффективен при использовании для лечения кишечных инфекций и дисбактериозов У людей и кспериментальных животных, безвреден, может использоваться в здравоохранении....

Формула изобретения

Штс1мм Bifidobacterium Iongum D4a200, В-2170 (коллекция ВНИИ-генетика), используемый для изучения приживления экзогенных бифйдобактерии в макроорганизме.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Гончарова Г.И. с соавт. Культуральная, морфологическая и биохит-ическая характеристика Bacterimn bifidum, Труды МНИИЭМ, М. , 1969, т, XIII, с. 415-426.