Штамм @ @ Г04а200,используемый для приготовления бактерийных препаратов Советский патент 1983 года по МПК C12P1/04 C12N1/00 C12R1/00 

СО 4i

СО Изобретение относится к микробио логической промышленности и касаетс производства бактерийных лечебных препаратов. Известен штамм Bacterium befundu для получения бификала и бифидум-ба терина 1 1 . Однако известный штамм не обладает устойчивостью к антибиотикам. Известен штамм Befidobacteriiim longtun 200, для приготовления бактерийных препаратов, обладающий антибиотикоустойчивостью С21 Однако бактерийные препараты, приготовленные из известного штамма эффективны только при лечении детей Целью изобретения является созда ние штамма Bifidobacteritm adolescentis rQjfia 200, обладающего антиби тикоустойчивостью эффективного для лечения взрослых. Штамм Bifidobacterium adolescentis 200 выделен из исходного штамма Bifidobacteriim adolescentis ГО-13 путем селекции. Штамм депонирован в коллеции кулцтур микроорганизмов ВНИИ-генетика номером ЦМПМ В-2169. Штамм характеризуются следующими свойствами. Культурально-морфологические признаки. Клетки палочковидной формы, иногда с утолщениями или У-образными раздвоениями на одном или двух концах. В мазках часто обнаруживаются зернистые формы. Грамположительны, иногда окрашиваются по Граму отрицательно, располагаются беспорядочно или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы. В высоком столбике полужидкого агара Блаурокка образуют колонии в виде пирамидок или дисков размером до 3-5 мм в диаметре в течение 3 5 сут. В жидкой среде Блаурокка дают крошкообразный рост по всей пробирке, кроме зоны аэробиоза. На плотной и жидкой среде растут также в присутствии 50 мг/мл канамицина, 2 мг/мл гентамицина, 2 мг/мл мономицина и 200 мкг/мл ампициллина. В жидкой среде в присутствии антибиотиков вырастают на 4-е сутки, на плотной среде - на 4-5-е сутки. После лиофильного высушивания рост штаммовможет замедляться. Физиолого-биохимические своЙ1Ст1а. Облигатный анаэроб, растет в высоком столбике 0,7 -ного агара или 10 мл жидкой среды в пробирке. Максимум роста при 37,5°С. Сбраживает арабинозу, ксилозу, целлобиозу, инулин, манниб, салицин. Антагонистические свойства. Проявляют антагонистическую активность по отношению к Proteus morgani (штамм 12), энтеротоксигенным штаммам Escherichia coll Or, (штаммы 122 и 111 соответственно), Shigel1а flexneri (штамм 170). Чувствительность к антибиотикам представлена в таблице.

Штамм Bifidobacterium adolescentis Г04а 200, ЦМПМ В-2169 (коллекция культур микроорганизмов ВИИИгенетика), используемый для приготовления бактерийных препаратов.

/ нтибиотик

Исходный штамм ГО-13

н

200 100 100 0,1 40

Антибиотикоустойчивыйштамм Г04а200

.220 2200 502000 220 2200 Минимальные ингибирующие концентрации антибиотиков, мкг/мл или ЕД/мл Как видно из приведенных данных, штамм В. adolescentis ГОАа 200 с приобретением устойчивости к антибио тикам сохраняет свои основные свойст ва, в том числе антагонистическую активность по отношению к патогенным энтеробактериям. Кроме того, лабораторная пров ерка его непатогенность для экспериментальных животных (мышей, крыс, морских свинок), а так же для людей. Штамм используют следующим образом. Пример . Изучение влияния совместного применения антибиотиксустойчивых бифидобактерий и антибиотиков на выживаемость мышей при лучевой болезни. С целью усиления лечебного эффекта антибиотиков и одновременной коло низации кишечника бифидобактериями мышам с постлучевым дисбактериозом вводили совместно два антибиотика (ампициллин и гентамицин )и антибиотикорезистентные бифидобактерий Б. adolescentis . Беспородных мышей весом 18-18,5 г облучают на установке ГУБЭ-1200 дозой 700 Р ( мощность дозы облучения 180 Р/мин ). После облучения мышей разделяют на k равные группы по 15 животных в каждой. Первая группа мышей получает ампициллин, гентамици и бифидобактерий, вторая группа животных получала только бифидобактерий, третья группа животных получала только антибиотики (.ампициллин, генпродолжение таблицы. тамицин. Животным четвертой группы вместо лечебных препаратов вводят стерильный физиологический раствор хлористого натрия. Препараты вводят интрагастрально через зонд один раз в сутки. Суточная доза ампициллина составляла 1 мг, гентамицина - 20 мкг, бифидобактерий - 1x10 жизнеспособных клеток. Препараты вводят в объеме 0,25 мл. Для лечения облученных животных используют следующую схему: антибиотики и бифидобактерий на 1,3, 5,7,9,11,13,15,17,19,21 день после облучения ( с интервалом Ц8 ц). Совместное введение ампициллина, гентамицина и бифидобактерий ( штамм ) при лечении облученных мышей обеспечивает увеличение процента выживаемости этих животных по сравнению с . мышами, получавшими только антибиотики, или нелеченными мышами. На день после облучен.ия процент выживаемости мышей в группе, получавшей аи пициллин,гентамицин и антибиотикоустойчивые бифидобактерий, в группе, получавшей только бифидобактерий, в группе, получавшей только ампициллин и гентамицин, и в группе нелеченых животных составляет соответственно 26,6;16,3; 13,3j и 10,0. На 30-й день после облучения процент выжи маемости в 1-й, 2-й, 3-й и 4-й группах составляет 26,6; 1б,3; 13,3 и 6,6 соответственно. Выживаемость в 1-й группе была выше, чем а группе в k раза.

Таким образом, для эффективного лечения постлучевого дисбактериоза наряду с антибиотиками целесообразно использовать бактериотерапию с применением антибиотикорезистентных штаммов, что позволяет начинать бак териотерапию с самого начала лечения и одновременно со стерилизацией желу дочно-кишечного тракта антибиотиками проводить заселение его представите лями нормальной микрофлоры.

П р-и м е р 2 . Определение колбнизационной активности бифидобактерии ( штамм ГОЦа200/ при введении их в желудочно-кишечный тракт.

Исследование проводят на l добровольцах (.авторах). 2-суточную культу ру бифидобактерий штамма rOka 200, выросшую на жидкой среде Блаурокка, центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин. при °С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остуженной до комнатной температуры воде, после чего с помощью оптического стандарта мутности определяют концентрацию микробных тел в исходной суспензии, а затем разводят эту суспензию кипяченой водой таким образрм, чтобы п 1мл ее содержалось 1x10 клеток бифидобактерий. Все добровольцы принимали антибиотикорезистеитные бифидобактерий через рот однократно в объёме 5,0 мл, запивая бактериальную суспензию кипяченой водой. Перед приемом бифидобактерий, а также через 3 сут после приема бактерийного препарата у всех добровольцев определяют в испражнениях общий бифидобактерий и уровень антибиотикорезистентных бифидобактерий.

В результате проведенных исследо1ваний было установлено, что до приема взвеси из бифидобактерий в ис- . пражнениях здоровых людей антибиотикоустойчивые штаммы бифидобактерий отсутствуют. На t-fi день после приема

бифидобактерий количество антибиотикоустойчивых бифидобактерий составляет в среднем 2,5x10 клеток на 1 г испражнений. Следует отметить, что. введение в кишечный тракт антибиотикрезистентных бифидобактерий приводит к повышению уровня эндогенных бифидобактерий, чувствительных к антибиотикам. Кроме того, прием I взвеси антибиотикорезистентных бифидобактерий ни в одном случае не вызывает каких-либо побочных явлений со стороны желудочно-кишечного тракта, также как и со стороны всего организма в целом.

Использование штамма Bifidobacterium adolescentis позволяет проводить лечение взрослых людей одновременно с антибиотиками.