Штамм энтерококков SтRертососсUS FаесIUм, используемый для приготовления бактерийных препаратов Советский патент 1989 года по МПК C12N1/20 A61K39/09 C12N1/20 C12R1/46 

I Изобретение относится к микробио- логии и может быть использовано при изготовлении бактерийных лечебных ;препаратов, применяющихся для профи- ;лактики и лечения дисбактериозов ки-i ;шеЧника.

Целью изобретения является штамм Streptococcus faecium УДС-86, обла- дающий высокой антагонистической, кислотообразующей активностью, естественной не плазмидной устойчивостью; к антибиотикам, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры.

Штамм Streptococcus faecium УДС-86 выделен из кишечника здорового человека и депонирован в коллекции

культур промьшшенных микроорганизмов ВНИИгенетика под номером В-4054.

Штамм Streptococcus faecium ВКПМ .В-4054 характеризуется следующими свойствами,

Культурально-морфологические свойства. Клетки КОККОВ1-ЩНОЙ формы, располагаются в мазке попарно или короткими цепочками, граьтоложителькы,спор и капсул не образуют.

При росте в мясо-пептонном бульоне с глюкозой и дрожжевым экстрактом . (МПБ) дают равномерное помутнение и осадок. На плотной среде (кровяной агар, мясо-пептонный агар) растут в виденепрозрачных сероватых колонний

UU

ю

3149

с ровными краями диаметром 1-2 мм. Колонии легко снимаются с агара, равномерно эмульгируются в физиологическом растворе хлористого натрия. На среде Калины растут в виде голубых непрозрачных колоний с равными краями.

Физиологические свойства. Аэробы, при культивировании в МПБ при через 18-20 ч после посева в 1 мл среды вырастает 5 х 10 - 1 х 10 живых клеток. По мере роста культуры снижается рН среды} кислотность по Тернеру за 24 ч культивирования дос- тигает 250-2704.

Биохимические свойства. Сбраживает мальтозу, целлобиозу, сахарозу, лактозу, маннит, салицин, маннозу, 1-арабинозу} не сбраживает Д-араби- нозу, сорбит, рафинозу, рамнозу, глицерин, ксилозу, инозит, дульцит.

Штамм хорошо растет на средах с добавлением желчи.

Не дает гемолиза при росте на кро вяном агаре.

Устойчивость штамма Streptococcus faecium ВКПМ NB-4054 к антибиотикам. Минимальная ингибирующая концентрация, мкг/мл: линкомицин 1,0 левоми- цетин 10,0, нитроксолин 100,0, ген- .тамицин 4,0} нистатин 100,0-, олеандо мицин 1000,0; полимиксин 5000,ОJ канамицин 10000,0, клафоран 1000,0, ампициллин 1,0.

Штамм обладает антагонистической . активностью по отношению к стафило- ,кокку, К. lebsiella, Е. coli 0, ) ;S. dublini Sh. Zonnae, Pr. mirab.

Состав сред для вьфащивания . Str. faecium ВКПМ NB-4054:

Мясо-пептонньш

бульон1л :

Глюкоза10 г :

45

Дрожжевой экстракт 20 г рН 7,0-7,4 Стерилизация 30 мин при 0,5 атм. ; i Среда Brain Heart Jnfusion (Difcb) Среда Brain Heart Jnfusion (Difco) добавлением 2% агара. Мясо-пептонньш бульон1л

Глюкоза10 г

Дрожжевой экстракт20 г с добавлением 2% агата.

Среда Калины, Кровяной агар.

55

o 5

0

5

0 5

о

5

5

Лабораторная проверка показала непатогенность Str. faeciura ВКПМ NB-4054 для экспериментальных животных (мышей, крыс, морских свинок)., а также для людей.

Пример 1. Получение бактерийного препарата на основе Streptococcus faecium ВКПМ NB-4054.

Штамм засевают на жидкую среду Калины. Вьфосшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин при 4°С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой и остуженной до комнатной температуры воде или физиологическом растворе хлористого натрия до концентрации 1 х Ю кл/мл. 0,5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека при использовании его для коррекции микрофлоры.

Препарат из энтерококков может быть получен в лиофилизированном виде .(ампулы, флаконы, таблетки) .

Пример 2. Изучение влияния Str. faecium ВКПМ NB-4054 на микрофлору кишечника мьш1ей при химиотера- певтическом дисбактеризе.

Мыши линии СВА были разделены на две группы: опытную и контрольную. Животным обеих групп вводят интра- гастрально ампиокс в дозе 4 мг/мышь в течение 5 дней. Опытной группе с 1-го по 10-й день от начала эксперимента вводят интрагастрально энтерококк (штамм ВКПМ NB-4054) в количестве 5 X 10.клеток на мьшь. Животные контрольной группы вместо штамма энтерококков получают физиологический раствор в соответствующем объеме. I.

В результате изучения микрофлоры толстого кишечника на 1-й и 6-й день после отмены антибиотика было отмечено, .что пероральное введение жи- вотным штамма энтерококков обеспечивает эффективную нормализацию микрофлоры: уровень энтеробактерий на 6-й день составил Ig 8,573j:0,452 кл/г материала, в контрольной группе - ig10,028+,0,111 кл/г, в то же время у животных опытной группы увеличивается содержание лактобактерий в толстом кишечнике - Ig 8,176 + +. 0,048 кл/г, в то время как у животных контрольной их число в 9С.НОВНОМ не превьш1ает Ig 6,948 + +0,054 кл/г..

Результаты представлены в табл.1.

Пример 3., Влияние препарата энтерококков Streptococcus faecium на восстановление микрофлоры кишечника при химиотерапевтическом дис- бактериозе, обусловленном применение высоких терапевтических доз ампиокса

Две группы мышей линии СВА (опыт- ная и контрольная в течение 5 дней интрагастрально получают антибиотик в дозе 20 мг/мьш1ь в сутки. Х(ивотным опытпой группы с 1-го по 10-й день от начала эксперимента интрагастраль но вводят штамм энтерококков BKIIM NB-4054 В количестве 5x10 клеток на мышь. Животные контрольной группы вместо энтерококка получают физиологический раствор.

На 1-й и 6-й день после отмены ампиокса изучают микрофлору толстого кишечника. Полученные результаты свидетельствуют, что пероральное вве :дение животным штамма энтерококков ВКПМ NB-4054 также обеспечивает нормализацию микрофлоры: уровень энте- робактерий в толстом кишечнике на 6-й день после отмены антибиотика у опытных лшвотных составил Ig 8,874+ +0,111 кл/г, в контрольной группе - Ig 9,702+0,167 кл/г, увеличивается содержание лактобактерий в толстом кишечнике у животных опытной группы Ig 8,018+0,121 кл/г, у животных конт рольной группы их число снижается и не превышает Ig 6,932+.0,286 кл/г.

Количество энтерококков у животных опытной группы на 6-ой день после отмены антибиотика составляет Ig 8,013+;0,092 кл/г, что в 10 раз превышает количество энтеробакте- рий у животных контрольной группы Ig 7,430±0,191 кл/г.

Результаты представлены в табл.2.

Пример 4. Влияние энтерококков на микрофлору кишечника при постлучевом дисбактериозе.

Беспородных мышей облучают.в дозе 700 Р. После облучения животных разделяют на две группы. Животные опытной группы получают взвесь антерокок- ков интрагастрально через день в количестве 5 X 10 клеток на мьшь на

протяжении 15 дней. Животные контрольной группы вместо бактерийной взвеси получают физраствор.

На.10-й день после облучения излучают микрофлору тонкого и толстог кишечника, опытной и контрольной группы животных.

Результаты приведены в табл.3.

Применение штамма энтерококка у облученных животных приводит к коррекции дисбиотических изменений, равившихся у животных после облучения снижению количества энтеробактерий и стафилококков по сравнению с животными контрольной группы и увеличению у них количества лактобактерий. На 10-й день после облучения у животных контрольной группы в толстом кишечнике количеслгво энтеробактерий, энтерококков, стафилококков, лактобактерий составляет 10 , Ю - Ю - Ю - соответственно; у животных опытной группы количество энтеробактерий снижается до 10-10 кл/г , стафилококков до кл/г (что соответствует показателям нормо шоры), количество энтерококков увеличивается до 10°- Ю кл/г: лактобактерий до 10 кл/г

Б тонком, кишечнике у животных, получавших энтерококки, на 10-й ден не определяются стафилококки (с10 кл/г) снижается количество энтеробактерий (до кл/г против 10 кл/г в контрольной группе), увеличивается (до 10-10 кг/л) колчество лактобактерий.

Таким образом, штамм энтерококков Streptococcus faecium ВКПМ NB- 4054 обладает полезными свойствами, эффективен при использоваш-ги для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактернозах, безвреден и может быть использован в практическом здравоохранении в качестве бактерийного препарата.

Формула изобретени

Штамм энтерококков Streptococcus faecium ВКПМ NB-4054, используемый для изготовления бактерийных препаратов.

« а ч о | н

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для изготовления бактерийных лечебных препаратов, применяющихся с целью профилактики и лечения дисбактериозов кишечника. Целью изобретения является штамм STREPTOCOCCUS FAECIUM ВКПМ NB-4054 , обладающий высокой антагонистической активностью, эффективный для коррекции кишечной микрофлоры. Штамм обладает естественной не плазмидной устойчивостью к антибиотикам. Для получения препарата штамм засевают на жидкую среду Калины. Выросшую 1-суточную культуру энтерококков центрифугируют при 3,5 тыс. об/мин при 4°С в течение 20 мин. Осадок ресуспендируют в кипяченой воде или физиологическом растворе до концентрации 1^.10⁹ клеток в¹/мл. 0,5 мл такой суспензии составляет 1 дозу препарата для взрослого человека. Штамм безвреден, эффективен при использовании для коррекции микрофлоры кишечника при дисбактериозах. 3 табл.