Способ определения регенерационной способности костной ткани Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕГЕНЕРАЩЮННОЙ СПОСОБНОСТИ КОСТНОЙ ТКАНИ

Изобретение относится к медишше, а имеи ир к ортопедии, В медицинской практике степень зрелости регеиерата обычио оценивают при помощи рентгенографии. Сущность способа заключается в том, что через определенные промежутки времени осуществл}пот динами юский контроль и по появлению кальциевых включений (костной ткани) судят о степени зрелости регеиерата между костными отломками в процессе дистракциоиного остеосиитеза по методу Г. А. Илизарова 1. Однако данный способ оценки интенсивности регенерации костной ткани не позволяет часто проводить динамический коитропь, так как создает повыщенную лучевую нагрузку, рентгеновские лучи при этом могут угнетать митотическую активность растущей костной ткани. Целью изобретения является определение интенсивности регенерации костной ткани. Цель достигается тем, гго при осуществлении способа определения ретенерационной спос ности костной ткани, в эритроцитах крови onределяют содержание дезоксирибонуклеиновой кислоты и при ее содержании от 11,6±2,5 до 31,7±3,4 нг/млн эритроцитов определяют интенсивн)гю регенерацию костной ткани, а при содержании дезока1рибонуклеиновой KHcnofbi от 7,8±0,5 нг/млн.эритроцитов и меньше определяют завершенную регенерацню костной тканк. Способ осуществляется следующим образом. Кровь из вены берут в охлажденные поля этиленовые пробирки, содержащие 3,В%-яьт раствор цитрата натрия. Центрифугируют при 1500 об/мнн, плазму, лейкоциты и тромбо циты удаляют и еще раз цромьшают 3,8%-ным раствором цитрата натрия. количество отмытых эртроцнтов подсчитывают в МЬланжерах в миллионах на один микрометр. После этого 0,09-0,11 мл эритроцитарной массы наносят на два диска фильтровальной бумаги н фиксируют в 10 15 МП смеси 0,2 н. раствора хлорной кислоты с 0,05 М . хлористого магния в течение 10- 15 мин при 4-5 с. Смесь сливают, н процесс повторяют. После этого к обеим пробам при3986

ливают ацетон в количестве 10-15 мл, нагревают до кипения, ацетон сливают, и процесс повторяют еще раз . После того как слили ацетон, к эритроцитам добавляют 10-15 мл смеси этилового спирта и диэтйлового эфира, взятях в соотношении 3:1, нагревают до кипения, смесь сливают. Процесс повторяют.

. К одному диску фильтровальной, бумаги,, содержащему пробу эритроцитарной массы добавляют 4 мл 0,3 н. раствора едкого калия и проводят гидролиз 50-70 мин при 36 -

37°С, при этом вьщеляется РНК.

Далее ко второму диску, содержащему пробу эритроцитарной массы, приливают 2 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты, гидролизуют 18-22 мин на кипящей водяной бане и выделяют таким образом дезоксирибонуклеиновую кислоту. Гидролизат охлаждают и приливают 2 мл 1,2 н.раствора хлорной кислоты, затем фильтруют,

На спектрофотометре замеряют оптическую плотность фильтрата в кювете 1 см при длине волны 270 Нм и 290 нм и проводят расчет концентрации дезоксирибонуклеиновой кислоты по формуле

32Ь4х Е 210-790

иг/млн.

С

п

где С - концентрация ДНК;

п - количесвто эритроцитов;

Е - разница оптической плотности при

длине волны 270 нм и 290 нм. При этом концентрация дезоксирибонуклеиновой кислоты в пределах 11,6+2,56 - 31,78+ 3,48 нг/мдн. эритроцитов и более свидетельствует о том, что процесс регенерации костной ткани идет интенсивно, а при содержании 7, иг/млн, эритроцитов и меньше проИзменение концентрации ДНК в эритроцитах при компрессионнодистракционном остеосшггезе по Илнзарову.

20 6,9 0,36 22,9

цесс интенсивной регенерации костной ткани завершен.

Пример. Исследуя кровь больного, вьювляют, что количество эритроцитов 5,7 млн/мм.

Контроль.

Е270 0,32;

Е 290 0,295;

Д Е 0,32-0,295 0,025

Опыт.

Е„о 0,375;

Е290 0,270;

Д Е 0,375-0,270 0,105;

Д Е 0,105-0,025 0,08;

САКК. 3264 X 0,08/5,7 46,9 нг/млн.

Следовательно, из эритроцитов крови человека вьщеляют 46,9 нг/млн. эритроцитов дезоксирибонуклеиновой кислоты, что говорит о интенсивной регенерации костной ткани.

Способ применен на 20 больных, результаты исследования которых представлены в таблице и показьгеают возможность определения интенсивности регенерации костной ткани.

Описываемый способ имеет преимущества в том, что при прюведении обследования больные не подвертаются воздействию рентгеновски лучей и радиоактивных изотопов. Способ дает возможность оценить интенсивность регенерации костной ткани и степень зрелости регенерата без использования дорогостоящих реактивов и оборудования.

Кроме того, способ дает возможность проследить динамику регенераторного процесса, что очень важно в профилактике клинических осложнений в виде образования ложных суета

ВОВ.

20

20 7,8

36,9 0,4

1,9 2,1

59863966

Формула изобрет я януклеиновой кислоты от 7,8tO нг/млн« эритСпособ определения регенерационной способ-регенерацию костной ткани, ности костной ткани, отличаюший-Источники информации,

с я тем, что, с целью определения интенсив- 5 принятые во внимание при зкспертнзе ноет регенерации костюй ткани, в зрятроци-1. Чрескостный компрессионный, дистрактах крови определяют содержание дезоксири-ционный и компрессионно-дистракфонный

бонуклеиновой кислоты и пря ее содержа-остеосинтеЭ в травматологии и ортопедии.

НИИ от 11,6±2,5 до 31,713,4 иг/млн, эритрощс-Под. ред. Илизарова Г. А. Челябинск,

тов определяют интенсивную регенерацию Южно-Уральское книжное издательство, 1976,

костной ткани, а при содержании дезоксирибо-р. 10-77. роцитов и меньше определяют завершенную