Способ оценки состояния симпатоадреналовой системы человека Советский патент 1988 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в медицин С5с.их исследованиях для уточнения механизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением обмена катехоламинов S например адре калина (А), норадреналина (НА),,и по- вьшения эффективности лечения, : Цель изобретения - повышение точ ности и специфичности способа.

Способ осуществляют следующим об- - .разоме

: Берут 3 - 5 мл крови из вены в ;предварительно охлажденные пробиркиц содержа1 ще капель 6%«° ного раствора этилендиаминтетраацетата натрия (ЭДТА), Отделяют плазму от эритрощг тов путем центрифугирования ( при количестве оборотов равных 1000 ; об/НИН в течение 5 мин). Проводят трехкратную промывку эритроцитов ох лажденным физиологическим раствором Добавляют мг ЭДТА к мл зрит роцитарной взвеси н эксч рагируют кате холамнны (А я НА) из мембраны эритро- - цитов в мл н -надхлорной кис лоте при 0°С в течение 30 мин, Фильт р лот полученный раствор добавляют при постоянном перемешивании охлаж ценный 5 Нэраствор углекислого калия до значения рН среды

Отделяют образовавшийся белый хлопьевидный осадок путем центрифуги рования на холоде в течение 5 мин при 3000 об/минс Сливают полученный супар натант к доводят с помош;ью 1 вора аммиака до рН Проводят ад- сорбционную колоночную хроматографию G использованием в качестве сорбен- та окиси алюминия полученного супер натанта в количестве 10 мл Проводят элюцию катехоламинов путем двукрат него добавления 3,5 мл н.уксус ной кислоты для получения уксусно - кислого элюата и дальнейшего окисле кия катехоланинов в Доводят уксусно- кислый элюат до рН 4,2 с помощью 1 Нв раствора и окисляют ферроци - анидом калия в фосфатном буфере рН

для получения продукта окисшения

50

адреналина. Доводят уксусно кисдый элюат до рН б„2 с помощью 1 н,раство« ра аммиака и окисляют ферроцианидом иалия в фосфатном буфере рН 6,2 ддя получения продуктов окисления А и НАв 55 Измерят флюоресценцию А на флюори метре Speed.-10 в уксусно« кислом эгдаа- те рН при длине волны возбужде

ния 436 им и длине волны флюоресценции 550 нм Измеряют суммарную флюоресценцию А и НА в уксусно-кислом элюате при рН 6,2. Регистрируют разницу опытных и контрольных проб. Определяют содержание А и НА по формулам

А , Е-1-1000

НА

SLj;,2j fjiS lufcll Е,- 1 1000

S 0 5 п

-

0

0

где А содержание адреналина,

нмоль/л; НА - содержание НА норадреналина

нмоль/л;

а флюоресценция адреналина и . норадреналина соответственно в 1 мл измеряемой пробы (в условиях измерения показания опытной пробы отнять контрольную);

- флюоресценция 1 нг адреналина (Е) и норадреналина (Е) в 1 кп пробы (в условиях измерения выводится при калибровке прибора);

10 - количество супернатанта, пошедшее на адсорбенту 7 ° количество эл юата;, количество элюата при окис-

лении| 1000 - коэффициент перевода нано

грамм в ми-крограммьц 5,458 и 5,91 коэффициенты пересчета в МСИ

В норме средние значения А и НА в эритроцитах равны 1, нмоль/л H.0574 t05l6 нноль/л соответственно. У больных гипертонической болезнью И-й степени содержание А в три раза больше и равно 4,58t0538, НА - в 4,5 раза больше относительно Hop№.i и равно 3j31rO,32 нмоль/л. У больных ИБС содержание А в эритроцитах в 4j4 раза больше относительно нормы и равно 6,-68t0577j а ИА - в 15 раз больше и равно Il,35i3s09 нмоль/л

Пример 1. Обследован практически здоровый мужчина Б,, 21 г, о направленный на профилактический осмотр в рамках эпидемиологического обследования. После исследования пред- лагаемым способом катехоламинов(А и НА) в эритроцитах получены значения А Ij62 нмоль/лJ НА 0,59 нмоль/л, а при исследовании базовым способом в

31422158

плазме - А 2,10 нмоль/л; НА 4,72вые лица) и группы больных погранич-нмоль/л. Заключение: в плазме резуль- ной гипертонией (15 больных). Результаты представлены в таблице, (

Таким образом, совпадение с доверительными границами нормы и определяемой патологии предлагаемым способом

таты показателей для НА не укладываются в границы, определяемые как нормальные. В эритроцитах показатели находятся в границах, определяемых как нормальные.

Прим ер 2, Больной Б,, 19 лет поступил в клинику с диагнозом погра- ю ничная гипертония. После обследования больного предлагаемым способом получены значения А 1,81 нмоль/л; НА 3il2 нмоль/л, а при обследовании больного базовым способом А 1,72 нмоль/л, 15 крови, экстракции катехолами- НА 4,96 нмоль/л,нов хлорной кислотой, отделения бел-

по сравнению с базовым повьшает точность исследования на 20%,

Формула изобретения

Способ оценки состояния симпато- адреналовой системы человека путем

Заключение: в плазме результаты показателей откладываются в границы, определяемые как нормальные, увеличено лишь содержание НА в эритроцитах показатели отличаются от нормальных значений и укладьшаются в границы, установленные для группы больных (15 больных) с диагнозом пограничная гипертония.

Осуществлена сравнительная оценка базового и предлагаемого способов

путем обследования 25 доноров (здоро1

крови, экстракции катехолами- нов хлорной кислотой, отделения бел-

по сравнению с базовым повьшает точность исследования на 20%,

Формула изобретения

Способ оценки состояния симпато- адреналовой системы человека путем

кя, нейтрализации, адсорбции на окиси алюминия, элюции уксусной кислотой с последующим окислением катехол-

аминов и флюориметрическим определе- нием их содержания,отличаю- щ и и с я тем, что, с целью повьппе- НИЛ точности и специфичности способа, в качестве биологического материала

используют эритроциты, трехкратно отмытые физиологическим раствором, а экстракцию катехоламинов проводят 0,4 н,хлорной кислотой.

Изобретение относится к биохимии, касается медицинских исследований для уточнения механизмов развития сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушением обмена кате- холаминов, например адреналина (А), норадреналина (НА), и повышения эффективности лечения. Цель изобретения - повышение точности и специфичности способаа Для этого из пробы крови пациента отделяют эритроциты. трехкратно их отмьгеают в охлажденном, физиологическом растворе, добавляют 8-10 мг ЭДТА к 1-2 мл эритроцитарной взвеси и экстрагируют катехоламины (А и НА) в 0,4 н.надхлорной кислоте при 3Q мин. После отделения белого хлопьевидного осадка путем центрифугирования сливают полученный супер- натант доводят рН до 8,5. Проводят адсорбционную колоночную хроматогра- , в качестве сорбента используя окись алюминия. Проводят элюцию кате- холаминов, двукратно добавляя 3,5 мл 0,25 Иоуксусной кислоты для получения уксусно-кислого элюата и дальнейшегое окисления катехоламинов. Элюат окисляют ферроцианидом калия в фосфатном буфере рН 4,2-6,2 для получения продуктов окисления А и НА. Измеряют флюоресценцию А и .НА, регистрируют разницу опытных и контрольных проб и по их значениям судят о тяжести заболевания. 1 табл. (Л ю СП 00

Здоровые

25 1,61-2,59 2,00-3,24

Больные пограничной гипертонией15 2,08-3,91 3,70-6,05

70 1,30-1,76 0,58-0,90 90

56 1,48-2,22 2,,80 76