Способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран Советский патент 1983 года по МПК A01N1/00 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОБОЛОЧКИ ДЛЯ ЗАКРЫТИЯ ОЖОГОВЫХ

1

Изобрегение огносигся к медицине, а именно к трансплантологии и может применяться при стерилизации и консервировании амниотической оболочки для закрытия ею ожоговых ран.

Известен способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран путга помещения ее в слабый раствор формалина (1 3Однако данный способ не позволяет jg достичь достаточного снижения ее иммуноспепифичности.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран пу- jj тем обработки плодных оболочек в растворах катионного детергента и антисептиков t2 .

Однако в процессе консервирования амЕШотической оболочки не происходит 20 снижения ее иммуногенных свойств, что приводит к развитию реакции отторжения в сроки 14-3 О сут. после наложения ее на ожоговую поверхность, а недостаточРАН

ная антисептичность этого способа не обеспечивает ст ильност трансплантата, на всех этапах консервирования.

Целью изобретения является снижение иммуноспецифичности амниогаческой оболочки и придание ей антибактериальной активности.

: Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран путем о абогки плодных оболочек в растворах катионного дете{)гевта н антисептиков, производят огмывку от крови плодных оболочек, полученных от роженвп в нестерильных условиях, с одновременной стерилизаций, путем встряхивания в герметичном сосуде с раствором М I, содержащем, вес. ч.:

Этанолмеркурхлорвдl,O-t,5

Цетилпирцдяний хпо-г

РИД1,0-1,5

Вода бидиствллированнаяОстальноепрн соотношении веса гкавв к объему раствора (1:15-20) при 18-25° С 6-t2 ч до прекращевия окрашивания све жей порции раствора в зеленовагый цвет, затем стерилизуют и коисервируют в герметичном сосуде с раствором, содержащим, вес. ч.: Этанолмеркурхлорид0,4-0,6 Цетилпнридиний хлорид0,4-0,6 Натрий хлористый7,2-7,8 Вода бидистиллированнаяОстальиоепри этом же соотношении веса ткани к объему раствора и той же TavinepaType 5,0-8,5 ч с продолжением хранения ее в этом же растворе 1ФИ 2-4° С 20О24О ч, затем производят отделение амниона от хорионац в кювете с раствором № I при 20-25 о С с последующей стер лизацией амниона в этом же растворе при 18-25С 6-12 ч, после чего стерилизованную амниотическую оболочку пом щают в раствор, содержащий, вес. ч: ФурацилинО,15-О,2О Магний сернокислый99,0-1О1,О Вода бадистиллированнаяОстальноепри том же соогношении веса ткани к объему раствора при 2-4°С, где храня до использования 480-48ОО ч. . Пример I, Плодную оболочку, за готовленную от роженицы в нестерильны условиях, помещают в герметичный сосу с раствором № I, содержащим, вес. ч.; Э танолмеркурхлорид1,0 Цетилпиридиний хлорид1,О Вода бидистиллированная9 97,0 при соотношении веса ткани к объему 1:15 вес. ч. Обработку трансплантата производят .при 18° С путем встряхивания с режимст восемь встряхиваний в минуту. Через 8 мин производят смену раствора. После прекращения окращивания шестой порции раствора в зеленоватый цвет аллотрансплантат продолжает храниться в этой по ции раствора № I 6ч. Затем во флаконе с аллотрансплантатом плодной оболоч производят замену раствора № I на рас твор № 2, содержащий (соотнощение веса ткани к объему раствора 1:15), вес. ч.: 3 танолмеркурхлорид0,4 Ые илпиридиний хлорид0,4 Натрий хлористый7,2 Вода бидистиллированная991,О котором он сохраняется тпря 18 С ч и последующим фаненизи в этом же растворе при 2°С 2ОО ч. После этого аллотрансплантат плодной болочки извлекают из флакона с раствором № 2 и помещают в кювету, наполненную раствором № I, где производят отделение амниона от хориона при 2О ° С, затем стерилизуют отделенную амниотическую оболочку во флаконе с раствором № I при 18 ° С 6ч. После этого производят замену раствора N I на раствор N 3, содержащий (соотношение веса ткани к объему раствора 1:15) вес. ч: Фурацилин .0,15 Магний сернокислый99,0 Вода бидисгиллированная898,80 в котором аллотрансплантат амниотической оболочки хранится при 2 С 480 ч. При исследовании экстракта из этого аллотрансплантата методом дискэлектрофореза выявляют одну белковую фракцию (до обработки предлагаемым способом в этой амниотической оболочке выявлено восемь фракций). Конденсация общего белка в экстракте из этого аллогрансплантата составляет 18% по сравнению с его содержанием в необработанной амниотической оболочке. Методом иммуноэлектррфорёза в экстракте из аллотрансплантата амниотической оболочки выявляют одну дугу преципитации (вэкстракте из этой амниотической оболочки до обработки данным способом выявлено шесть дуг преципитации) . Антимикробную активность изучают путем помещения диска диаметром I см, вырезанного из этого трансплантата, на поверхность агара, засеянного золотистым стафилококком. Зона задержки роста микробов вокруг аллотрансплантата 8 мм. Вокруг диска, вьфезанного из амниоти- ческой оболочки до обработки предлагаемым способсйм, зона задержки роста золотистого стафилококка не выявлена. П р и м е р 2. Плодную оболочку, заготовленную от роженицы в нестерильных условиях, помещают в герметичный сосуд с раствором № I, содержащим, вес.ч: Этанолмеркурхлорид1,5 Цетилпиридиний хлорид1,5

Вода дисгиллированная998,0

при соогношеяии веса к объему расгвора 1:2О, Обрабогку грансплантага пронэводвг при 25° С пугем всгряхивавия с режимом десять встряхиваний в минуту Через 5 мик производят смену раствора. После прекрашения окрашивания восьмой порции раствора в зеленоватый цвет, ал лотрансплантат продолжает храниться в порции раствора № I 12ч. Затем во флаконе с аплотрансплантатом плодной оболочки производят замену раствора N) I на раствор td 2, содержащий (coot-ношение веса ткани к раствора 1:20), вес, ч:

Этанолмеркурхлорид0,6

ЦетилпиридиниЙ хло:рид0,6

Натрий хлористый 7,8

Вода бидистихгЛированная . 992,О

в котором он хранится при 25 8,5 ч с последуюпшм хранением в этом же растворе при 4° С 240ч, После этого аллотрансплантат плодной оболочки изввлекают из флакона с раствором № 2 и помешают в кювету, наполненную раствором № I, где производят отделение амниона от хориона при 25 С, затем стерилизуют отделенную амниотическую оболоч ку во флаконе с раствором № I при 25 С 6 ч. После этого производят замену раствора № I на раствор № 3, содержащий (соотнощение веса ткани к объетлу расТвора 1:2О), вес, ч:

ФурацилинО,2О

Магний сернокислыйlOl.O

Вода бидистиллирован-.

иая899,0

в котором аллотрансплантат амниотичесIкой оболочки хранится при 4° С 48ОО ч.

При исследовании экстракта из этого аллотрансплантата методом дяскэлектро форёза выявлены две белковые фракции (до обработки предлагаемым способом в э той амниотической оболочке выявлено девять фракций). Концентрация общего белка в экстракте из этого аллотрансппан тата составляет 16% по сравнению с его содержанием в необработанной амниотическрй оболочке. Методом иммуноэяектрофореза в экстрате из аллотрансплантата амниогачесКой оболочки выявлена одна дуга преципитации (в экстракте из этой амннотической оболочки до обработки предлагаемым способомВыявлено семь: дуг преципитации). :

Антимикробная активность изучена .путем помещения диска диаметром t см, вырезаннсл о из этого адлотранспла{| тата, на поверхность агара, засеянного золотистым стафилококком. Зона задеркоси роста микробов вокруг аллотрансплантата составляет 9 мм. Эокруг диска, вырезанного из амниотической оболочки до обработки щэедлагаемым способом, зона задержки роста золотистого стафилококка не выявлена.

Полученная биологическая оболочка, стерилизованная, консервированная и насыщенная антисептиками, была применена у больного Д, Ю лет, диагноз: ожог И - HI А степени шеи, груди, спины,

площадью 10%. Ожоговая рана была о но моментно закрыта на площади около ,5ОО см 2 . Лечение больного завфшилось :выздоровлением с полной эпителизацией ожоговой поверхности через одиннадцать суток после наложения на нее биологической оболочки, обработанной предлагаёмьм способом.

Предложенный способ позволяет получить биологическую оболочку со сниженной иммуноспецифичностью, о чем свидетельствует уменьшение содержания в экстрактах из нее обшито белка, обеднение, ее антигенной структуры, с антибактериальной активностью, насыщенную антисептиками.

Формула изобретения

I.

Способ получения биологической оболоки для закрытия ожоговых ран путем обработки плодных оболочек в растворах катионного детергента и антисептиков, отличающийся тем, что, с целью снижения иммуноспецифичности амниотической оболочки и придание ан1: актернальной активвости производят отмывку от крови плодных оболочек, полученных от рожениц в нестерильных условиях, с одновременной стерилизацией путем встряхивания в герметичнее сосуде с раствором № I, содержащим, вес. ч:

Эганолмеркурхлорид1,О-1,5

Цетилпиридийий хлорид1,О-1,5

;Вода бидистиллированнаяОстальное

1ФИ соотношении веса ткани к объему раствора (1:15-2О) при 18-25° С 6-12 ч до прекрашения окраигавания свежей порции раствора в зелековатый цвет, затем ст млизуют к консервируют в гер79$)57 мегичном сосуде с расгвором, содержашим, вес. ч: Эганолмеркурхлорид0,4-О,6 иетиширшшний хлоРИДО,4-0,65 Натрий хлористый7,2-7,8 Вода бидистиллированнаяОстальное1ФИ том же соотношении веса ткани к объему раствора и той же температуре 5,0- 10 8,5 ч с продолжением хранения ее в этом же растворе при 2-4° С 2ОО-24О ч, затем производят отделение амниона от хориона в кювете с раствором № 1 при 20-25 С последующей стерилизацией 15 амниона в том же растворе при 18-25 С 6-12 ч,после чего стерилизованную амниотическую оболочку помешают в раствор, содержащий, вес. ч: 188 ФурвцилинО,15-О,20 Магний сернокислый99,0-101,0 Вода бидистнлпированнаяОстальноепри гом же соогаошении веса псани к объему раствора при 2-4° С 48О-48ОО ч. . Источники информашш, принятые во внимание при экспертизе 1« Козлова-Лавриненко Т, Е., Круг ° « Использование слабых растворов формалина для хранения кожных трансплантатов, - В кн.: Ожоговая болезнь, патогенез, клиника, лечение. Киев, l975, с. IP-3O. 2. R. Klen. Ln Research fn burUs (Eds), Р. Hotter. T.L.Barclay, L.Kon skara, Bern, Stutgart. Vienna, Hans Huber, 1971, p. 289-292,