СРЕДСТВО ДЛЯ СТИМУЛЯЦИИ ФИЛЬТРАЦИОННОЙ И ВЫДЕЛИТЕЛЬНОЙ ФУНКЦИИ ПОЧЕК ПРИ ТОКСИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТОЛОГИИ Российский патент 1994 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине и фармакологии и может быть использовано для лечения токсической нефропатии.

Известны фармакологические препараты, усиливающие выделительную и фильтрационную функции почек, которые нарушаются при токсическом поражении почек, токсической нефропатии. К ним относятся диуретики различной химической природы. К группе диуретиков относятся также препараты природного происхождения: маннит (группа сахаров), мочевина. Однако эти препараты влияют избирательно на один из путей биохимического воздействия на выделительную и фильтрационную функцию почек, не усиливая процесс восстановления пораженных тканей почек.

Известно также использование диуретиков растительного происхождения: плоды можжевельника, листа ортосифона, березовых почек. Однако все эти препараты обладают узконаправленным действием, недостаточно эффективны и обладают некоторыми противопоказаниями.

Наиболее близким по назначению аналогом является использование при токсическом поражении почек эффективного количества одной или нескольких гамма глутамил-аминокислот. Однако эти аминокислоты, получаемые синтетическим путем, труднодоступны, дорогостоящи и промышленно не усвоены у нас в стране.

Известно использование масла из семян тыквы при лечебном питании, а также в качестве антигельминтного препарата. Известно также использование масла из семян тыквы в качестве гепато-протекторного средства.

Сущность изобретения заключается в изыскании новых средств природного происхождения для расширения ассортиментных средств лечения.

Это достигается использованием масла из семян тыквы в качестве средства, стимулирующего фильтрационную и выделительную функцию почек при токсической нефропатии. Масло из семян тыквы (Cucurbita maxima) получают известным способом путем выдавливания его из семян тыквы "Волжской серой" и представляют собой вязкую жидкость светло-зеленого цвета со специфическим запахом. Масло характеризуется большим содержанием ненасыщенных и полинасыщенных жирных кислот: пальмитиновой, стеариновой, линолевой, линоленовой, арахидоновой, а также фосфатидов, стеринов, токоферелов, витаминов группы В (В₁, В₂), С, РР, каротинов и каротиноидов, т. е. масло из семян тыквы по своему составу имеет сложный набор биологически-активных компонентов и в отличие от других растительных масел соотношение этих компонентов является специфическим, что и обуславливает характер воздействия этого масла, т. е. обладает качеством стимулирующего средства фильтрационной и выделительной функций почек при токсической нефропатии.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения с получением вышеуказанного результата заключается в следующем.

Для создания модели токсического поражения почек 10-ти подопытным крысам со средней массой тела 240 г однократно внутрижелудочно вводили четыреххлористый углерод (ЧХУ) в дозе 620 мг/кг, что соответствует 1/10 LD₅₀. Десять других животных служили контролем, которым вводили в/ж идентичное количество оливкового масла, используемого в качестве растворителя ЧХУ. Через сутки все крысы одновременно подвергались тестированию с применением биохимических, гистохимических и патоморфологического методов исследования.

Для оценки функционального состояния почек при токсическом поражении и лечении применяли в опыте целый ряд показателей, оцениваемых биохимическими и гистохимическими методами исследования.

О функциональном состоянии почечной деятельности судили по следующим показателям: диурезу, определяемому за 18 часов на фоне водной нагрузки; титруемой кислотности мочи; содержанию в моче хлоридов, определяемому с помощью набора химических реактивов Био-тест "Lachema"; содержанию мочевины в моче, определяемому также применением соответствующего набора химических реактивов; содержанию в моче креатинина, устанавливаемому с помощью набора химреактивов; содержанию в моче общего белка, регистрируемого методом А. И. Михеева и И. А. Бочадарова; активности амилазы с применением соответствующего набора химреактивов Био-тест; клиническому анализу мочи с определением количества эритроцитов, лейкоцитов и плоского эпителия.

В динамике острого опыта в каждый срок тестирования проводили патоморфологическое исследование ткани почек. При этом экспериментальных животных умерщвляли путем декапитации. Изучаемые органы препарировали и фиксировали в 10% -ном растворе нейтрального формалина, затем заливали в целлоидин и готовили срезы. Полученные срезы толщиной 3 - 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином, затем микроскопировали и фотографировали.

Параллельно ткани подвергали гистохимическому исследованию. В биоматериале определяли ферментную активность: лактадегидрогеназы (ферменты анаэробной фазы тканевого дыхания) по методу Гесса, Скарпели, Пирсу; сукцинатдегидрогеназы (фермента аэробной фазы тканевого дыхания) по методу Нахласа; цитохромоксидазы (фермента терминального окисления в литохондриях клеток) по методу Винклера-Шульца; α -глицерофосфатдегидрогеназы (также фермента, участвующего в углеводном обмене клеток) по методу Пирса; аденилатциклазы (участвующей в ц-АМФ-зависимых процессах; обеспечивающих регуляцию синтеза гликогена) по методу Ростомяна, Абрамяна; щелочной фосфатазы (мембраносвязанного фермента, участвующего в процессах фосфорилирования) по методу Гомори; липазы (фермента, опосредующего процессы гидролиза жиров в биотканях) по методу Гомори.

Активность энзимов после гистохимической обработки оценивалась на фотоэолектрическом дденситометре (ФДЭ-10), статистическая обработка их проводилась с использованием непараметрического метода - критерия И. Вилкоксона-Манна-Уинти. Все остальные результаты исследования подвергали статистической обработке методом t критерия Фишера-Стьюдента. Изменения показателей считали достоверными при Р ≅0,05. При этом статистическая группа животных при биохимическом исследовании составляла не менее 20 крыс, а при патоморфологическом и гистохимическом - не менее 12 животных. Полученные данные представлены в табл. 1 и 2.

Анализ таблиц показывает, что на нарушение функций при токсическом поражении почек указывает достоверное изменение следующих показателей. Прежде всего - это повышение диуреза, содержание мочевины мочи, повышенное количество лейкоцитов и эритроцитов в моче. При микроскопическом исследовании почек обнаружена выраженная гидроническая дистрофия эпителия проксимальных отделов извитых канальцев. В ткани почек (табл. 2) при гистохимическом исследовании отмечено также повышение активности аденилатциклазы (на 24% ), липазы (на 23% ) и менее существенно - цитохромоксидазы (на 15% ) и α -глицерофосфатдегидрогеназы (на 18% ). Следовательно, токсическое поражение почек сопровождалось активацией ц-АМФ-зависимой системы терминального окисления и липолиза. Для изучения лечебного эффекта масла из семян тыквы на функциональное состояние почек в эксперимент взяты 240 белых крыс, которые были равномерно (по 80 животных) распределены на две опытные и одну контрольную группы. Животных 1-й подопытной группы подвергали токсическому воздействию ЧХУ в дозе 620 мг/кг и затем у них изучалось функциональное состояние почек вплоть до благоприятного исхода интоксикации с момента воздействия химического фактора. Животные II-й подопытной группы, которым вводили ЧХУ в дозе 620 мг/кг (1/10 LD₅₀), получали затем лечение маслом из семян тыквы из расчета 0,1 мл на 100 г веса животных, которое вводили в/ж ежедневно, начиная со следующих суток с момента затравки. Все подопытные и контрольные животные подвергались наблюдению в течение трех недель эксперимента и тестированию в сроки 3, 7, 14 и 21 сутки от начала опыта. На основании результатов проведенного экспериментального наблюдения установлено, что у крыс подопытных групп в течение первых двух суток острого опыта регистрировалась выраженная слабость и адинамия. На третьи сутки степень проявления этих симптомов была уже менее значительная и отмечалась больше у нелеченных крыс. В последующем общее состояние отравленных животных нормализовалось, они внешне не отличались от контрольных особей.

Анализируя результаты функционального состояния почек с применением биохимических тестов и гистохимическом исследовании ткани почек (табл. 3, 4), можно отметить, что на третьи сутки показатели почечной патологии в обеих группах в совокупности были свидетельством развивающейся нефропатии. Однако наблюдается более выраженное нефротоксическое действие ЧХУ у нелеченной группы крыс, чем у леченной маслом. Проявлялось это достоверно повышенным уровнем белка (Р < 0,05) и мочевины (Р < 0,02) в моче, указывающим на изменение фильтрующей функции почек под влиянием изучаемого токсического агента. Свидетельством этого явилось, кроме того, более значимое (Р< 0,01) снижение хлоридов мочи у крыс 1-й подопытной группы в сравнении с животными, подвергавшимися лечению тыквенным маслом (Р < 0,05), связанное с нарушением перфузии канальцев почек.

Преобладание нефротоксического действия ЧХУ у нелеченных подопытных крыс по сравнению с особями, получавшими в постинтоксикационном периоде масло из семян тыквы, наблюдалось и в последующие сроки постинтоксикационного периода. В частности, на седьмые сутки с момента затравки (табл. 3) в данной группе животных при прогрессирующей нефропатии и канальцево-интерстециальном поражении почек, о чем свидетельствовало наличие эритроцитарных и лейкоцитарных ферментных элементов в моче (Р <0,001), продолжало регистрироваться достоверно сниженное количество азотистых веществ: мочевины (Р< 0,005) и креатинина (Р < 0,002). Вместе с тем достоверно повышенной была титруемая кислотность мочи (Р < 0,01).

Различия в функциональном состоянии почек этих животных сохранялись и на 14-е сутки опыта. Они отражали преобладание репаративных процессов и уменьшение воспалительных явлений в группе крыс, получавших терапию тыквенным маслом. В частности, у них проявлялось более слабо выраженные явления гидронической дистрофии эпителия проксимальных канальцев. Заметны они были и на 21-е сутки опыта, когда при микроскопическом исследовании почек нелеченных крыс имели место в проксимальных отделах извитых канальцев единичные эпителиоциты с признаками мелкокапельной гидронической дистрофии, тогда как у особей, получавших лечение маслом, морфоструктурных отличий от контроля не обнаружено.

При гистохимическом исследовании почечной ткани (табл. 5 - 7) обеих экспериментальных групп животных отмечалась лишь некоторая активация ферментов гликолиза (ЛДГ, 14 и 21 сут), АЦ-вторичного мессенжера в регляторной цепи ц-АМФ зависимых процессов (14 сутки) и липолиза (7 сут), что отражает отдельные метаболические нарушения в данном органе.

Таким образом, на основании полученных результатов можно отметить, что в/ж применение масла из семян тыквы способствует стимуляции фильтрационной и выделительной функции почек при токсической нефропатии. (56) Лечебное питание. / Под ред. И. С. Сосвощенко. М. , 1974, с. 400.

Использование : в медицине, а именно в фармакологии при лечении заболеваний почек. Сущность : в качестве средства для стимуляции фильтрационной и выделительной функций почек при их токсическом поражении используют масло из семян тыквы Cucurbita maxima. Технический результат : данное средство уменьшает явления гидропической дистрофии эпителия проксимальных канальцев. 7 табл.

Применение масла из семян тыквы (Cucurbita maxima) в качестве средства, стимулирующего фильтрационную и выделительную функции почек при токсической нефропатологии.