СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА Российский патент 1994 года по МПК G01N33/48 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии, и может быть использовано для диагностики активности гуморального иммунитета у больных сифилисом.

Проблема терапии и контрольного наблюдения за больными серорезистентным сифилисом (с длительной позитивностью серологических реакций) является одной из актуальных в современной сифилидологии. Между тем, как среди отечественных, так и зарубежных ученых нет единого мнения относительно интенсивности терапии серорезистентного сифилиса и сроков диспансеризации для этой категории больных. Это является тем более необходимым, так как помимо медицинских эта проблема имеет и социально-экономические аспекты. Нерешенность этого вопроса несет в себе неоправданность дополнительной терапии и длительных сроков контрольного наблюдения.

Ввиду вышеизложенного актуальность изучения этой темы не подлежит сомнению.

Существует способ определения необходимости в дополнительной терапии больных сифилисом (WHO, Technical Report Series, N 674, 1982) - аналог, при котором критериями для назначения терапии служат: подъем в 4 раза титра реагинов реакции Вассермана, сохранение титра реагинов 1: 8 и выше в течение 1 года после лечения.

Недостатком является то, что крайне субъективно определяются критерии необходимости лечения, которые могут отсутствовать, но необходимость в лечении сохраняется, например, у больных ранним скрытым сифилисом с титром реагинов 1: 5, получивших лечение по поводу интеркуррентных заболеваний.

Известен способ установления необходимости лечения серорезистентного сифилиса (Инструкция по лечению и профилактике сифилиса, Министерство здравоохранения СССР, Москва, 1988), принятый нами за прототип. Серорезистентность устанавливается, когда в течение 1 года после окончания лечения реакция Вассермана остается стойко положительной без тенденции к снижению титра реагинов. В этих случаях назначается дополнительное лечение. При отсутствии эффекта повторно дополнительное лечение не назначается и больной остается под наблюдением до снятия с учета в течение 10 лет с периодическим обследованием 1-4 раза в год.

Недостатком является то, что, с одной стороны, исключается необходимость лечения несмотря на позитивность реакции Вассермана, которая может быть следствием сохранения инфекции в организме, с другой, предлагается длительный срок наблюдения (10 лет), тогда как обычный срок контрольного наблюдения после лечения сифилиса 1-5 лет в зависимости от формы заболевания.

Таким образом, и в аналоге, и в прототипе отсутствуют объективные признаки необходимости терапии и произвольно определяются сроки контрольного наблюдения за больными с позитивными серологическими реакциями. Используемые в настоящее время критерии носят в основном умозрительный подход, что, с одной стороны, может повлечь за собой недооценку возможного исхода сифилиса, с другой - необоснованность сроков контроля и дополнительного лечения.

Целью изобретения является объективная оценка необходимости лечения и сроков контрольного наблюдения больных серорезистентным сифилисом.

Сущность способа состоит в том, что определяют функциональную активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации на митоген лаконоса и трепонемальный антиген, одновременно и по достоверной разнице результатов бласттрансформации лимфоцитов больных и контрольных здоровых лиц на указанные стимуляторы лечение считают завершенным и сроки наблюдения осуществляют в соответствии с формой сифилиса до лечения.

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты из крови больных сифилисом или здоровых лиц культивируют в культуральной среде, состоящей из среды 199 с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота, в концентрации 2 млн/мл при 37^оС в течение 96 ч. В подопытные флаконы добавляют фитогемагглютинин (ФГА) (10 мкг/мл), культуральный трепонемный антиген (60 мкг/мл), митоген лаконоса (60 мкг/мл). По окончании инкубации взвесь центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 мин, из клеточного осадка на предметных стеклах готовят мазки, фиксируют в метиловом спирте (5-7 мин) и окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 3-5 мин. Сосчитывают количество лимфобластов и вычисляют процент бластных клеток по отношению к общему количеству подсчитанных клеток.

Результаты исследований представлены в таблице.

Результаты исследований свидетельствуют, что бласттрансформация лимфоцитов больных серорезистентным сифилисом под действием митогена лаконоса и трепонемного антигена происходила в наивысшей степени по сравнению с уровнем лимфобласттрансформации других исследуемых групп (Р < 0,001).

У некоторых больных сифилисом причиной позитивности серологических реакций после лечения является инфекция, что обусловливает также высокий уровень лимфобласттрансформации на трепонемный антиген, вследствие антигенреактивных к инфицирующему агенту лимфоцитов, однако в ответ на митоген лаконоса лимфобласттрансформация у этих больных не отличается от показателей здоровых лиц.

Поэтому для объективного выявления причин серорезистентного сифилиса необходимо одновременно учитывать результаты лимфобласттрансформации на митоген лаконоса и трепонемный антиген, отражающие высокий уровень гуморального иммунного ответа у обследуемых лиц.

Одновременное тестирование лимфоцитов на митоген лаконоса и трепонемный антиген, выявляющее индивидуальную способность организма реагировать на стимуляторы, позволяют диагностировать причину серорезистентности. В результате этого нет необходимости в дополнительном лечении и длительном (10 лет) контрольном наблюдении, которое необходимо уменьшить (до 1-5 лет) в зависимости от формы сифилиса, при котором начато первоначальное лечение. Напротив, больных с положительной реакцией Вассермана, дающих высокий уровень лимфобласттрансформации только на трепонемный антиген, но не митоген лаконоса, необходимо не только наблюдать, как указано в прототипе, но и подвергнуть дополнительному лечению, так как продолжающаяся бактериемия способна к последующим осложнениям сифилиса.

Способ апробирован в клинических условиях на кафедре кожных и венерических болезней ФУВ Кубанского медицинского института на 36 больных сифилисом с положительной реакцией Вассермана после лечения и 30 здоровых лицах.

В результате использования предложенного способа у 27 больных установлено, что причиной персистирующей позитивности реакции Вассермана являлся высокий уровень гуморального иммунного ответа, дающий в реакции лимфобласттрансформации с митогеном лаконоса и трепонемным антигеном уровень значений, достоверно превышающих (Р < 0,001) показатели лимфобласттрансформации контрольных здоровых лиц на указанные стимуляторы. Это позволило не назначать этим лицам дополнительную терапию и сократить срок контрольного наблюдения с 10 лет до 1-5 лет в зависимости от формы сифилиса до лечения (сифилис первичный серонегативный - 1 год, сифилис вторичный свежий - 3 года, сифилис скрытый ранний - 5 лет).

Напротив, 9 больным сифилисом с позитивной реакцией Вассермана назначено дополнительное лечение без сокращения сроков диспансеризации ввиду высокого уровня лимфобласттрансформации только на специфический стимулятор (трепонемный антиген), но не митоген лаконоса, что отразило наличие инфекции в организме, требующей дополнительной терапии и тщательности диспансеризации за этой категорией больных.

П р и м е р 1. Больной В. , 28 лет, диагноз "Сифилис серорезистентный", реакция Вассермана после лечения позитивна с титром реагинов 1: 10, находится на контрольном наблюдении 2 года. Выделенные из крови лимфоциты в концентрации 2 млн/мл использовали в реакции бласттрансформации с митогеном лаконоса (60 мкг/мл) трепонемным антигеном (60 мкг/мл) и ФГА (10 мкг/мл), культивировали в течение 96 ч. Лимфоциты здоровых лиц в концентрации 2 млн/мл также использовали в реакции лимфобласттрансформации с митогеном лаконоса (60 мкг/мл), трепонемным антигеном (60 мкг/мл) и ФГА (10 мкг/мл), культивировали 96 ч. Бласттрансформация лимфоцитов исследуемого больного при стимуляции митогеном лаконоса была 53% , трепонемным антигеном - 22% , ФГА - 56% , здорового лица - 37,1, 60% соответственно.

Высокий уровень лимфобласттрансформации одновременно на митоген лаконоса и трепонемный антиген у исследуемого больного по сравнению с показателями у здорового лица позволяет установить причину персистирующей позитивности реакции Вассермана, а именно, ввиду высокого уровня гуморального иммунного ответа, прекратить дальнейшее лечение и сократить срок контрольного наблюдения до 5 лет, т. к. первоначальный диагноз до лечения "Сифилис скрытый ранний".

П р и м е р 2. Больной И. , 25 лет, диагноз "Сифилис серорезистентный", реакция Вассермана после лечения положительна с титром реагинов 1: 10, находится на контрольном наблюдении 2 года. Лимфоциты обследуемого больного в концентрации 2 млн/мл использовали в реакции бласттрансформации с митогеном лаконоса (60 мкг/мл), трепонемным антигеном (60 мкг/мл) и ФГА (10 мкг/мл), культивацию проводили в течение 96 ч. Лимфоциты здоровых лиц в концентрации 2 млн/мл также использовали в реакции лимфобласттрансформации с митогеном лаконоса (60 мкг/мл), трепонемным антигеном (60 мкг/мл) и ФГА (10 мкг/мл), культивировали 96 ч. Бласттрансформация лимфоцитов обследуемого больного при стимуляции митогеном лаконоса была 39% , трепонемным агентом 17% , ФГА - 50% , здорового лица - 38,2, 59% соответственно.

Высокий уровень лимфобласттрансформации только на трепонемный антиген у больного и отсутствие разницы в уровне лимфобласттрансформации у обследуемого больного и здорового лица на митоген лаконоса позволяет установить у больного наличие инфекции, что требует проведение дополнительного лечения и тщательного лабораторного обследования (ликворологического, рентгенологического) с целью своевременного обнаружения осложнений сифилиса.

Таким образом, определение активности гуморального звена в реакции лимфобласттрансформации на специфические (трепонемный антиген) и неспецифические (митоген лаконоса) стимуляторы помогает выявить причину персистирующей позитивности реакции Вассермана, установить необходимость дополнительной терапии и срок контрольного наблюдения для больных сифилисом.

В условиях, когда характер серореакций имеет определяющее значение в тактике врача, анализ иммунореактивности при персистирующей позитивности реакции Вассермана имеет немаловажное значение. (56) Инструкция по лечению и профилактике сифилиса. МЗ СССР, М. , 1988.

Использование: медицина, может быть использовано для диагностики активности гуморального иммунитета у больных сифилисом. Сущность изобретения: определяют функциональную активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации на мотоген локоноса и трепанемный антиген одновременно и по достоверной разнице результатов ьласттрансформации лимфоцитов больных и контрольных здоровых лиц на указанные стимуляторы лечение считают завершенным и сроки наблюдения осуществляют в соответствии с формой сифилиса до лечения, а в случае разницы в уровне лимфобласттрансформации в ответ на стимуляцию только трепонемным антигеном лечение продолжают и рекомендуют тщательное лабораторное обследование. Определение активности гуморального звена в реакции лимфобласттрансформации на специфические (трепонемный антиген) и неспецифические (митоген лаконоса) стимуляторы способствуют раскрытию патогенеза серорезистентности и совершенствованию методов терапии и профилактики инфекции (применение иммуномодулирующей терапии, сроки контрольного наблюдения и др. ). 1 табл.

СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЛЕЧЕНИЯ СИФИЛИСА, включающий лабораторный анализ крови и проведение реакции Вассермана в динамике, отличающийся тем, что у больных серорезистентным сифилисом в пробе крови определяют стандартную реакцию бласттрансформации лейкоцитов в ответ на одновременную стимуляцию митогеном лаконоса и трепонемным антигеном и при отличии полученных результатов от нормы лечение считают завершенным и строки наблюдения осуществляют в соответствии с формой болезни до лечения, а в случае изменения уровня лимфобласттрансформации только в ответ на стимуляцию трепонемным антигеном лечение продолжают и рекомендуют тщательное лабораторное обследование.