Способ определения активности клеточного иммунитета Советский патент 1993 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а им енно к иммунологии при тех болезнях, в патогенезе которх определяющее значение им|еют иммунные нарушения.

Так, например, при иммунокомплекс- ных болезнях (васкулиты, гломерулонёфрит, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, амилоидов и др.), при болезнях с гийерергическим состоянием организма (бронхиальная астма, ревматизм и другие системные болезни соединительной ткани, неспецифический язвенный колит, тиреои- дит Хашимото, активные гепатиты и др.), при болезнях с энергическим состоянием организма (диссеминированный туберкулез, саркоидоз, болезнь Ходжкина, опухоли различных типов, микоплазменная инфекция и др.).

Известные способы: для оценки состояния клеточного иммунитета (иммунокомпе- тентности) лучшими тестами являются, кожные реакции с разными антигенами, такими, как туберкулин (РРД), трихофитин, кандидин, стрептокиназа, или митогенами.

как фитогемагглютинин (ФГА), конканава- лин А. Особенно трудно интерпретировать данные, полученные In vitro. Поэтому в практике используются кожные пробы. Наиболее выраженной митогенностью обладает и чаще всего используется во всем мире ФГА, который при исследованиях вводится внутрикожно в дозе 0,1 мл 0,04%-ного раствора. Он и принят за прототип. Если внут- рикржное введение антигена или митогена вызывает реакцию замедленного типа, которая проявляется через 24-48 ч покраснением, отечностью и уплотнением и характеризуется мононуклеарной инфильтрацией, то это отражает активность клеточного иммунитета, которая проявляется в виде реакции гиперчувствительности. Большая часть иммунных клеток, образующих инфильтрат, не специфично в отношении данного антигена и мигрирует в очаг воспаления под действием лимфокинов.

Однако ФГА содержит много (15-85%) белков растительного происхождения Известно, что чужеродные организму белки я в

ю

N

ел

OJ

ся

со

ляются для него сильными аллергенами и вызывают нежелательную сенсибилизацию организма. Наши некоторые иммунологи даже считают внутрикожное введение ФГА нежелательным, В связи с этим недостат- ком ФГА возникает необходимость в поисках других митогенов для изучения клеточного иммунитета, не обладающих ал- лергизирующими свойствами. Такой субстанцией в наших исследованиях оказались пр остагландины (ПГ), которые являются циклическими ненасыщенными жирными кислотами, растворимые в воде и.жирах. ПГ не содержит белков. В организме они синтезируются из жирных кислот, при участии комплекса ферментов, в котором особое значение принадлежит простагландин-син- тетазе.. ...

Целью изобретения является повышение точности способа,:

Способ осуществляют следующим образом. В кожу сгибаемой поверхности предплечья при помощи туберкулинового шприца с тонкой иглой вводится простаг- ландин Еа (ПГЕз) (изготовленный в секторе чистых веществ Института химии АН Эстонской ОСР) в дозе 0,05 мкг разведенного в 0,1 мл стерильного физиологического раствора. Это оптимальная доза, хотя реакцию ГЗТ вызывают меньшие и большие дозы; Интервал дозы возможного использования 0,01-0,1 мкг. Меньшая доза часто не вызывает образование папулы, а большие дозы вызывают сильную местную реакцию (резкое покраснение кожи, болезненность, иногда появляется общее недомогание, сердцебиение).;

Для контроля в кожу предплечья другой руки вводится 0,1 мл физ. раствора и на расстоянии 6-7 см внутрйкожно вводится 0,05 мл 0,04% раствора ФГА с 0,05 мл физиологического раствора.

На месте введения митогенов (ФГА и ПГЁа) через 24-48 ч появляется покраснение, отечность и уплотнение кожи; послед- нее называется папулой. При проведении теста измерялась величина папулы по двум перпендикулярным размерам по формуле.

Такие исследования проведены у 10 здоровых людей (контрольная группа), у 38 больных разными формами хронического гастрита и у 20 больных бронхиальной астмой. .

Пример 1. Больная К.А.Т., 22 года. История болезни № 2488/185. Диагноз БА, кожная реакция на ФГА через б часов 3.1 мм2, через 24 ч 77,7 мм2, через 48 ч 12 мм2, а кожная реакция на ПГЕ2 через 6 ч 81,42, через 24 ч 102,1 мм2 и через 48 ч 47 мм . Клеточный иммунитет периферической

крови: лейкоцитов 11,600 (в 1 мкл), лимфоцитов 2204 (в 1 мкл), Т-лимфоцитов 1102 (в 1 мкл), В-лимфоцитов 1080 (в 1 мкл), Т-хелпе- ров404(в 1 мкл), Т-супрессоров 198 (в 1 мкл), соотношение Т-хелперов/Т-супрессоров - 4,5. Данные подтверждают выраженную реакцию клеточного иммунитета.

П р и м е р 2. Больной К.З.И., 23 года. История болезни № 13486/820. Диагноз БА. Кожная реакция на ФГА через 6 ч 0,44 мм2, через 24 ч 11,33 мм2, через 48 ч 101 мм2. Кожная реакция на ПГЕ2 через б ч 8 мм2, через 24 ч 30,75 мм2, через 48 ч 21,3 мм2. Клеточный иммунитет периферической крови: лейкоцитов 8,300 (в 1 мкл), лимфоцитов 14,11 (в 1 мкл), Т-лимфоцитов 522 (в 1 мкл), В-лимфоцитов 310 (в 1 мкл), Т-хелперов57(в 1 мкл), Т-супрессоров 37 (в 1 мкл), соотношение Т-хелперов/Т-супрессоров - 1,5. Данные свидетельствуют о сниженной реакции клеточного иммунитета.

При сравнении кожной ГЗТ на введение ФГА (прототип) и ПГЕа отмечены следующие различия: у здоровых лиц реакция ГЗТ на ПГЁа через 24 ч несколько меньше, чем на ФГА (средний размер папул соответственно 16,23 ± 3,2 и 21,74 ± 3,85 мм2), однако реакция ГЗТ на ПГЕ2 более выражена после 6 и 4.8 ч, чем реакция на введение ФГА. .Следовательно, кожные папулы после введения ПГЕ2 образуются несколько раньше и значительно дольше сохраняются, т.е. ПГЕ2 обладает более длительным местным действием, чем ФГА. На основании этих данных можно рекомендовать внутрикож- ный теЬт с ПГЕ2 для оценки ГЗТ, а также активности клеточного иммунитета, причем тестсПГЕ2болеечувС|Вителени постоянен, чем тесте ФГА. Данные с ГЗТ, получаемые при использовании ФГА через 6 и 48 ч, ва- риабельны, неустойчивые, часто папулы отсутствуют и поэтому эти данные обычно не учитываются. Применяя, используя ПГЕ2. можно использовать и данные о величине папул через 6 и 48 ч, что позволяет более точно определить общую активность клеточного иммунитета.

Значительно более выраженное преимущество ПГЕ2 перед ФГА обнаружено при исследовании клеточного иммунитета у больных разными формами хронического гастрита. Обследовано по той же методике 27 больных хроническим гзстродуоденитом, 26 - первичным атрофическим гастритом, сочетанным с хроническим холециститом и 10 практически здоровых людей. Размеры папул определялись через 6,24 и 48 часов.

Полученные данные показали, что кожная реакция на ФГА у больных хроническим гастродуоденитом и атрофическим гастритом идентична и не отличается от кожной реакции контрольной группы (здоровые люди). Следовательно, по данным исследования с ФГА активность клеточного иммунитета у больных гастритами не изменена и соответствует таковой у здоровых. Между тем, по данным образования папул на введение ПГЕ2 у больных хроническим гастродуоденитом общая активность клеточного иммунитета повышена (23,3 ± 2,43, контроль 16,23 ± 3,2 мм2), при первичном атрофическом гастрите не изменена (нормальная), а при вторичном - пониже- на(11.4± 2,76мм2).- :v

Таким образом, внутрикржный тест с ПГЕа для определения активности клеточного иммунитета является значительно чувствительный, чём тест с ФГА: при ис- по|льзовании ПГЕ2 имеется возможность по изменениям Иммунологической активности дифференцировать разные формы хронического гастрита/используя же ФГА эта диф- фе ренцировка невозможна, так как тест с ФГА имеющиеся различия активности клеточного иммунитета при разных формах хронического гастрита не выявляет (не раскрывает наличие различий). ,

Результаты исследования величины папул после внутоикожного введения ФГА и ПГЕа у больных инфекционно-аллергиче- скрй бронхиальной астмой (И А Б А) и здоровых лиц показало, что реакция на ПГЕ2 была значительно более выраженной по сравнению с аналогичным контролем и у больных ИАБА, а также и по сравнению с данными реакции на ФГА через определенное время

исследования. Кожные папулы при использовании ПГЕ2 четко выявляются уже через 6ч, максимума достигает через 24 ч и выраженными остаются через 48 ч. Между тем

величина папул после введения ФГА у больных ИАБА достоверно определяется через 24 ч (достигает максимальных размеров), и значительно снижается через 48 ч. При использовании фГА результаты исследования

обычно через 6 и 48 ч не учитываются из-за

непостоянства результатов. Однако приме нения ПГЕ2 позволяют четко выявить образование кОжных папул на протяжении всего времени исследования, т.е. через 6,24 и

48 ч и реакция определяется более выраженная. Таким образом можно заключить, что ПГЕ2 обладает выраженным местным действием и способен вызывать образование папул, сохраняющиеся На продолжительное время. В связи с этим понятием, что ПГЕ2 является стимулятором клеточного им мунитёта и отражает aktHBftocfb клеточного иммунитета у больных ИАБА.

Формул а и зобретени я

Способ определения активности клеточного иммунитета, включающий внутри- кбжное введение митогена и Параллельно с ним физиологического раствора с последующим измерением кожной реакций и по изменени.ю кожной реакции на митоген по, сравнению с кожной реакцией на физиологический раствор определют активность клеточного иммунитета, о т л и ч а ю щ и и 4 ,с я тем, что, с целью повышения чувствйгельности способа, в качестве мйтогена используютпрЬстОгландин Е2.,

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения повышение точности способа. Обследуемому внутрикожно вводят простогландин Еа и физиологический раствор, измеряют кожную реакцию на их введение, и при увеличении ее после введения простогландина Ез по сравнению с физиологическим раствором определяют выраженную реакцию клеточного иммунитета и наоборот при снижении реакции в ответ на введение простогландина Е2 - сниженную реакцию. По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа как у здоровых, так и у больных хроническим гастритом и бронхиальной астмой. в Р