МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ПАРАЗИТОЗОВ ПТИЦ И ЖИВОТНЫХ Российский патент 2018 года по МПК G01N33/48 G01N33/483 

Данное изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой копрологического метода диагностики паразитов птиц и животных.

Важнейшей задачей ветеринарии в современных условиях развития индивидуальных предпринимательств, крестьянско-фермерских хозяйств в частных секторах РФ является помощь начинающим фермерам в производстве здоровой продукции. Она заключается в своевременной диагностике, лечении и профилактике различных заболеваний, в частности вызванных возбудителями паразитозов.

Несмотря на индивидуальный подход со стороны владельцев, птицы и животные подвержены заражению эндо- и эктопаразитами. Отсюда возникает вопрос о ликвидации экономических потерь, связанных с паразитарными болезнями. Кишечные паразиты наносят серьезный ущерб животноводству и птицеводству, складывающийся из падежа, снижения общей продуктивности. Ухудшаются вкусовые качества мяса из-за снижения содержания аминокислот, витаминов, макро- и микроэлементов и накопления токсических веществ в печени и в организме в целом. При этом птицы и животные, пораженные кишечными паразитами, выделяют во внешнюю среду яйца гельминтов, ооцист эймерий и цист амеб.

Одним из способов борьбы с кишечными паразитозами является лечебно-профилактическая дегельминтизация, целесообразность которой основывается на результатах своевременных и безошибочных паразитологических исследований.

Своевременная диагностика по праву занимает основное место в комплексе противопаразитарных мероприятий. Однако в настоящее время на практике используют устаревшие методы прижизненной диагностики кишечных паразитозов, эффективность которых не отвечает современным запросам. В литературе также встречаются устаревшие рекомендации относительно применения тех или иных методик, обладающих заведомо низкой диагностической эффективностью.

Основным и самым распространенным методом копрологической диагностики традиционно в России принято считать метод Фюллеборна. Однако этот метод является давно устаревшим, его диагностическая эффективность очень низкая, что не представляет никакой ценности в постановке диагноза на кишечные паразитозы.

Также распространенными методами являются: метод Котельникова-Хренова и метод Дарлинга.

Метод Котельникова-Хренова. Флотационный раствор состоит из насыщенного раствора нитрата аммония (техническая гранулированная аммиачная селитра, используемая как удобрение). Техника проведения: берут пробу весом 3-5 г, помещают в копрологический чистый стакан, заливают небольшим количеством жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю, в 1 слой, в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микрокопирования [2].

Недостатком метода является быстрая кристаллизация капель и слабый диагностический эффект.

Метод Дарлинга. Пробу фекалий весом 3-5 г размешивают в стаканчике с водой в количестве 18-20 мл, процеживают через сито в другой стаканчик, полученную жидкость переливают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 1-2 мин при 3000 об/мин. Затем надосадочную жидкость сливают, а к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из равных частей глицерина и насыщенного раствора хлорида натрия. Содержимое взбалтывают и вновь центрифугируют в том же режиме. При этом яйца всплывают, их снимают проволочной петлей с поверхности пленки и микроскопируют [2].

Недостатком метода является слабая диагностическая эффективность.

Задача изобретения - разработка усовершенствованного универсального диагностического копрологического метода, для определения паразитарной инвазии птиц и животных.

В процессе разработки метода были опробованы существующие копрологические методы для разных групп животных и экспериментальные с добавлением различных компонентов в разных соотношениях.

В ходе многочисленных экспериментов был установлен состав, по результатам которого показатели имели наивысшие результаты.

Способ диагностики кишечных паразитозов проводится по следующей схеме.

Вначале готовят комбинированную флотационную смесь из двух ингредиентов.

Компонент А. В 1 л кипящей воды растворяют 1750 г ZnCL₂.

Компонент В. Насыщенный раствор сахара - 1333 г на 1 л воды. Для получения комбинированной флотационной жидкости смешивают компоненты А и В в соотношении 1,5:1. Плотность раствора составляет 1,557.

С каждой пробы пинцетом берут помет массой 1-2 г, переносят его в копрологический стакан (объемом 50 мл), заливают 10 мл дистиллированной воды (допускается водопроводная), тщательно размешивают до появления равномерной взвеси, затем добавляют еще 20-30 мл, размешивают и процеживают через металлическое сито или марлю, в один слой, в сухой чистый стакан. Отстаивают 5 мин, после надосадочную жидкость сливают. На дне стакана оставляют такое количество взвеси, которое бы уместилось в центрифужную пробирку. Затем проводят 3-минутное центрифугирование при 1500 g. После всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют флотационную жидкость. Осадок взбалтывают до получения равномерной взвеси и снова центрифугируют в течение 3 мин при 1500 g. После металлической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Пример. Материалом для сравнительной оценки эффективности существующих методов выявления паразитов служили пробы фекалий цесарок, полученные единовременно из одного частного сектора (КФХ «Шишикиных» Пестречинского района). Собранные фекалии тщательным образом перемешивали, после чего в равной степени распределяли по чистым стаканчикам (объемом 50 мл) для дальнейших исследований.

Статистическую обработку цифровых данных проводили по разработанным программам в Microsoft Exel. Достоверность устанавливали по методу Стьюдента-Фишера [4].

Данные о сравнительной эффективности различных копрологических методов диагностики паразитозов птиц при естественном заражении представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что при исследовании пробы фекалий по методу Фюллеборна в 1 мл поверхностной пленки было обнаружено 16,1±2,42 яиц аскаридий, 8,0±1,27 яиц гетеракисов, 9,8±1,13 яиц томинксов, 28,4±5,57 ооцист эймерий, яиц стронгилоидесов метод не выявил. Методы Котельникова-Хренова и Дарлинга показали более лучшие результаты, но также не выявили яйца стронгилоидесов. Усовершенствованный метод диагностики птиц показал наилучший результат, с помощью которого в 1 мл было выявлено 256,4±12,78 яиц аскаридий, 156,6±23,76 яиц гетеракисов, 164,7±±11,46 яиц томинксов, 151,3±18,15 яиц стронгилоидесов, 348,3±41,92 ооцист эймерий. Также обнаружены цисты кишечных амеб, яйца клещей и сами клещи на разных стадиях своего развития.

Кроме того, в ходе экспериментов был проведен опыт с использованием этих же проб фекалий недельной и двухнедельной давности, где из яиц уже вылупились личинки. Новый метод позволил обнаружить как сами яйца, так личинки различных гельминтов.

При изучении паразитофауны у птиц разных половозрастных групп в частных секторах на территории РТ использовали разработанный нами метод и применяющийся на практике метод Фюллеборна.

Результаты копрологических исследований представлены в таблице 2.

Из таблицы видно, что видовой состав паразитов в КФХ «Шишикиных» Пестречинского района РТ у птиц представлен аскарисами, гетеракисами, томинксами, стронгилоидесами и ооцистами эймерий. Исследования, проведенные с 340 пробами помета птиц разных видов и половозрастных групп, из 4 частных секторов показали, что методом Фюллеборна яйца аскарисов выявлены в 26% проб, яйца гетеракисов в 6%, томинксов в 32,1%, ооцист эймерий в 50,5%. Яиц стронгилоидесов метод Фюллеборна не выявил. Новым способом диагностики паразитозов яиц аскарисов выявлено в 66,8% проб, гетеракисов в 43,1%, томинксов в 64%, стронгилоидесов в 47,1%, ооцист эймерий в 97,1%. Таким образом, процент зараженных животных, выявленных новым методом, был значительно больше, чем установленных методом Фюллеборна. Эта закономерность прослеживается при исследовании всех птиц из частных секторов №1, №2, №3.

Аналогичные исследования проводили и при изучении паразитофауны у животных разных половозрастных групп в частных секторах на территории РТ. Результаты приведены в таблице 3.

Из таблицы 3 видно, что в частных секторах на территории различных районов РТ у коз видовой состав паразитов представлен стронгилятами, эймериями и кишечными амебами. У кроликов - стронгилятами, пассалурами, эймериями. У лошадей - стронгилятами, параскарисами, анаплацефалами и кишечными амебами. У овец - стронгилятами, мониезиями, эймериями и кишечными амебами. У КРС - стронгилятами, эймериями и кишечными амебами. Исследования, проведенные с 10 пробами фекалий коз разных пород и половозрастных групп в КФХ «Шишикиных», показали, что методом Фюллеборна выявлено яиц стронгилят меньше на 80%, эймерий на 50%. Цист амеб метод Фюллеборна не выявил. Аналогичные результаты с другими животными в разных частных секторах говорят о том, что новый метод позволяет выявить возбудителей паразитов даже при минимальной степени инвазии. Проведя лечебно-профилактическую дегельминтизацию, также можно вовремя предотвратить снижение продуктивности животных.

Время, затраченное на исследование одной пробы фекалий при использовании разработанного нами метода, в среднем составляет 11 мин.

Высокая диагностическая эффективность данного метода позволяет использовать его для исследования птиц и животных со слабой степенью инвазии.

Преимущество нового метода по сравнению с другими методами состоит в том, что капли исследуемого материала после высыхания на предметном стекле можно длительное время (более 2 месяцев) изучать и использовать для учебных и научных целей.

Источники информации

1. Лутфуллин М.Х. Ветеринарная гельминтология: учебник для вузов, по спец. "Ветеринария" / М.Х. Лутфуллин, Д.Г. Латыпов, М.Д. Корнишина. - Казань: Идел-Пресс, 2007. - 232 с.

2. Лабораторное исследование кала у животных: учебное - методическое пособие / М.Х. Лутфуллин, К.Х. Папуниди, А.Х. Волков, Д.Г. Латыпов. - Казань: 2015. - С. 10-18.

3. Акбаев М.Ш. Паразитология и инвазионные болезни животных: учебник для вузов, по спец. "Ветеринария" / М.Ш. Акбаев, А.А. Водянов, Ф.И. Василевич и др. (ред. М.Ш. Акбаев). - 2-е изд, испр. и доп. - М.: КолосС, 2002. - 64 с.

4. Плохинский И.А. Биометрия / И.А. Плохинский. - М.: МГУ, 1970. - 360 с.

Изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой копрологического метода диагностики кишечных паразитов птиц и яиц клещей. Метод заключается в том, что берут пробу фекалий весом 1-2 г, помещают в копрологический стакан, заливают 10 мл дистиллированной воды, размешивают, доливают 20-30 мл воды, процеживают через металлическое сито в чистый стакан, дают взвеси отстояться в течение 5 мин, верхнюю часть сливают, оставшуюся часть переливают в центрифужную пробирку объемом 13 мл, центрифугируют в течение 3 мин при 1500 g, после сливают жидкость до осадка на дне пробирки, к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из насыщенного раствора хлористого цинка - 1750 г на 1 л, и насыщенного раствора сахара - 1333 г на 1 л, взятых в соотношении 1,5:1 соответственно, размешивают и центрифугируют 3 мин при 1500 g, после чего микроскопируют поверхностную пленку. Способ является быстрым, позволяет выявить яйца и личинки кишечных паразитов птиц, их личинок, а также яйца клещей, и обладает высокой диагностической эффективностью. 3 табл., 1 пр.

Способ диагностики паразитозов птиц, заключающийся в том, что берут пробу фекалий весом 1-2 г, помещают в копрологический стакан, заливают 10 мл дистиллированной воды, размешивают, доливают 20-30 мл воды, процеживают через металлическое сито в чистый стакан, дают взвеси отстояться в течение 5 мин, верхнюю часть сливают, оставшуюся часть переливают в центрифужную пробирку объемом 13 мл, центрифугируют в течение 3 мин при 1500 g, после сливают жидкость до осадка на дне пробирки, к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из насыщенного раствора хлористого цинка - 1750 г на 1 л, и насыщенного раствора сахара - 1333 г на 1 л, взятых в соотношении 1,5:1 соответственно, размешивают и центрифугируют 3 мин при 1500 g, после чего микроскопируют поверхностную пленку.