СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЯИЦ ТОКСОКАР В ФЕКАЛИЯХ Российский патент 2013 года по МПК G01N33/48 

Данное изобретение относится к области ветеринарии. Может быть использовано для копроскопической диагностики кишечных гельминтозов плотоядных.

Кишечные гельминтозы плотоядных причиняют большой ущерб звероводческим хозяйствам, который складывается из снижения продуктивности, качества продукции и падежа животных. Половозрелые гельминты желудочно-кишечного тракта локализуются как в желудке, так и в просвете кишечника. Личиночные стадии токсокар (Toxocara canis) через артериальную систему попадают в различные ткани и инкапсулируются, сохраняя жизнеспособность. При наступлении беременности у сук часть личинок активизируется и мигрирует через плаценту, вызывая внутриутробное заражение плодов. В заражении плотоядных большую роль играет каннибализм, когда инкапсулированные личинки в мышцах одних служат источником для заражения других. Животные, пораженные кишечными гельминтозами, выделяют во внешнюю среду огромное количество яиц, которые обладают высокой устойчивостью к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды.

Основной специфической профилактикой гельминтозов у животных является профилактическая дегельминтизация, целесообразность проведения которой определяется результатами гельминтоовоскопических исследований.

Для гельминтоовоскопической диагностики кишечных гельминтозов плотоядных применяются следующие методы:

1. Метод Фюллеборна. Пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл этого раствора и процеживают через металлическое сито или марлю в один слой в сухой, чистый стакан. Взвесь отстаивают 40-60 мин, затем прикосновением петли снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло для микроскопирования [1].

Недостатком метода является то, что флотация яиц происходит длительно (40-60 минут), и метод является не достаточно эффективным.

2. Метод Котельникова-Хренова. Техника проведения этого метода аналогична методу Фюллеборна, но в качестве флотационной жидкости применяется нитрат аммония (гранулированная аммиачная селитра). Поверхностную пленку можно микроскопировать через 10 минут [2].

Недостатком данного метода является сильная насыщенность флотационного раствора, вследствие чего происходит быстрая кристаллизация капель на предметном стекле, что препятствует исследованию материала и отрицательно сказывается на эффективности исследований.

Цель изобретения - разработка более эффективного способа копроскопической диагностики гельминтозов плотоядных в целях определения истинной гельминтологической ситуации для проведения соответствующих лечебно-профилактических мероприятий в исследуемых объектах.

Способ диагностики гельминтозов плотоядных проводится по следующей схеме: вначале готовят комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов:

1) насыщенный раствор цинка хлорида (2 кг ZnCl₂ на 1 л воды);

2) насыщенный раствор натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды);

3) сахароза (1,67 кг на 1 л воды).

Далее эти три компонента смешивают в соотношении 1,75:1:1.

Пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством воды, тщательно размешивают до появления равномерной взвеси, затем добавляют еще 50-100 мл воды и процеживают через металлическое сито или марлю в сухой, чистый стакан. После 5-минутного отстаивания надосадочную жидкость сливают. На дне стакана оставляют такое количество взвеси, которое бы уместилось в центрифужную пробирку. Затем проводят 3-минутное центрифугирование при 3000g, после всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют трехкомпонентный флотационный раствор. Осадок взбалтывают до получения взвеси и снова центрифугируют 3 минуты при 1500g. После металлической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

Пример 1. В МУ «СОБЖ» г.Казани (пункт приема и передержки безнадзорных животных) проводили обследование собак и отбор проб кала (10 взрослых и 25 щенков) на инвазированностъ кишечными нематодами (Toxocara canis и Toxoascaris leonine).

Гельминтоовоскопическое обследование проводили методами Фюллеборна и патентуемым методом. Исследования проводили на базе кафедры паразитологии и радиобиологии Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э.Баумана. Исследования проб фекалий по методу Фюллеборна проводили следующим образом: 3 г фекалий заливали небольшим количеством насыщенного раствора поваренной соли (в 1 л кипяченой воды растворяют 400 г соли), тщательно перемешивали, затем добавляли 50-100 мл этого раствора. Взвесь процеживали через металлическое сито или марлю в коническую колбу и оставляли для отстаивания. Через 30-45 мин основная часть яиц в силу меньшего удельного веса по сравнению с насыщенным раствором поваренной соли всплывала на поверхность.

Патентуемый способ осуществлялся следующим образом: свежую пробу фекалий массой 3 г суспендировали в 50 мл воды, фильтровали через металлическое сито с величиной ячей 0,5×0,5 мм. Полученный фильтрат центрифугировали при 3000g в течение 3 мин, полученный осадок суспендировали во флотационном растворе и снова центрифугировали при 1500g в течение 3 мин. Всплывающие яйца гельминтов, концентрирующиеся в поверхностной пленке раствора, снимали при помощи стандартной металлической петли и подсчитывали их количество в объеме 0,2 мл флотационной жидкости без покровного стекла при окуляре с увеличением, кратным ×8, и объективе с увеличением, кратным ×20.

Приготовление флотационного раствора для патентуемого способа исследования проб фекалий: используется трехингредиентная флотационная смесь, включающая в себя насыщенные водные растворы хлористого цинка (ZnCl₂, ρ - 1,82), хлористого натрия (NaCl, ρ - 1,19) и сахарозы (C₁₂H₂₂O₁₁, ρ - 1,28) в соотношении 1,75:1:1 (объем/объем/объем). Удельный вес приготовленных флотационных растворов определяют с помощью денсиметра при t 25°C.

В результате обследования патентуемый способ позволил выявить почти на порядок большее количество яиц гельминтов (таблица 1). Метод Фюллеборна оказался гораздо менее эффективен. Патентуемый метод показал 100%-ную инвазированность обследованных животных. Кроме того, патентуемый метод позволил выявить неоплодотворенные яйца Toxoascaris leonine.

Таблица 1. Исследование проб фекалий собак, принадлежащих МУ «СОБЖ» г.Казани пос. «Мирный», в летний период № п/п Группы животных Количество яиц в 1 г фекалий Фюллеборна патентуемый 1 1 группа 34±1,5 203±3,5 2 2 группа 45±4,1 300±10,5 3 3 группа 50±2,5 315±1,51 4 4 группа 75±3,8 424±11,7 5 5 группа 100±7,55 185±8,68 6 6 группа 56±3,5 125±5,2 Примечание: 1-5 группы - щенки;
6 - группа - взрослые собаки.

Таким образом, патентуемый способ диагностики гельминтозов у плотоядных обладает гораздо более выраженной диагностической эффективностью по сравнению с используемым аналогом (метод Фюллеборна).

По результатам гельминтоовоскопического обследования была проведена дегельминтизация собак (азинокс плюс в дозе 1 таблетка на 10 кг массы тела животного).

Литература

1. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Корнишина М.Д. Ветеринарная гельминтология. Казань, «Идель-Пресс», 2007, 232 с.

2. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Корнишина М.Д. Гельминто-копроскопические исследования животных. Казань, 2002, 24 с.

3. Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. Москва, «Колос», 1998, 744 с.

4. Акбаев М.Ш. и др. Паразитология и инвазионные болезни животных. Москва, «КолосС», 2002, 743 с.

Данное изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано для диагностики гельминтозов плотоядных. Для исследования берут пробу фекалий весом 3-5 г, помещают в стакан, заливают небольшим количеством воды, тщательно размешивают до появления равномерной взвеси, затем добавляют еще 50-100 мл воды и процеживают через металлическое сито или марлю в сухой, чистый стакан. После 5-минутного отстаивания надосадочную жидкость сливают. На дне стакана оставляют такое количество взвеси, которое бы уместилось в центрифужную пробирку. Затем проводят 3-минутное центрифугирование при 3000g, после всю жидкость до осадка сливают, а к осадку добавляют флотационную жидкость, состоящую из насыщенных растворов цинка хлорида (1,5 кг ZnCl₂ на 1 л воды), натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды) и сахара (1,67 кг C₁₂H₂₂O₁₁ на 1 л воды), взятых в соотношении 1,75:1:1. Осадок взбалтывают до получения равномерной взвеси и снова 3 минуты центрифугируют при 1500g. После металлической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Способ является быстрым и обладает высокой диагностической эффективностью. 1 табл., 1 пр.

Способ диагностики гельминтозов плотоядных, заключающийся в том, что пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством воды, размешивают, добавляют еще 50-100 мл воды и процеживают через металлическое сито в чистый стакан, взвесь 5 мин отстаивают, после надосадочную жидкость сливают, а осадок переносят в центрифужную пробирку, затем проводят 3-минутное центрифугирование при 3000 g, после всю жидкость до осадка сливают, к осадку исследуемых фекалий добавляют трехкомпонентный флотационный раствор, состоящий из насыщенных растворов цинка хлорида (1,5 кг ZnCl₂ на 1 л), натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л) и сахара (1,67 кг C₁₂H₂₂O₁₁ на 1 л), взятых в соотношении 1,75:1:1, осадок взбалтывают и снова центрифугируют 3 мин при 1500 g, затем металлической петлей снимают поверхностную пленку, переносят на предметное стекло и микроскопируют.