СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА Российский патент 1995 года по МПК G01N33/66 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии.

Известен способ диагностики течения ревматоидного артрита (РА) (благоприятное и неблагоприятное) по темпу возникновения деструктивных изменений в пораженных суставах рентгенологическим путем.

Также известен способ определения течения РА, заключающийся в изучении показателей В-системы иммунитета путем выявления сывороточного ревматоидного фактора (РФ). Этот способ имеет недостатком то, что РФ может быть обнаружен у больных РА с благоприятным течением болезни и даже у практически здоровых лиц, т.е. способ недостаточно точен.

Целью предлагаемого способа является повышение точности метода определения течения РА.

Для осуществления этой цели предложено цитофлюоресцентное определение показателя активации ядерного хроматина лейкоцитов крови в присутствии липополисахариды (ЛПС) и ЛПС + преднизолон (ЛПС + Пр) и сравнении этих двух показателей в отношении , и при величине отношения меньше 1,0 диагностируют благоприятное течение, а при отношении больше 1,0 - неблагоприятное течение РА.

Данная совокупность существенных признаков в источниках информации не обнаружена, что подтверждает новизну изобретения.

Способ осуществляется следующим образом.

По капле густой суспензии свежевыделенных и отмытых лимфоцитов наносили на три чистых, обезжиренных предметных стекла, инкубировали при комнатной температуре во влажной камере 3-4 мин, после чего смывали неприлипшие клетки физиологическим раствором. Полученные монослои лимфоидных клеток сразу же погружали в инкубационные среды, основу которых составляла среда РПМИ-1640 без добавления сыворотки. В среду одной из проб добавляли ЛПС 5 мпд/мл пр-во НИИЭМ им. Гамалея. В среду другой пробы вносили ЛПС в той же дозе и преднизолон натрийфосфат 150 мкг/мл. , пр-во "Сандоз" Индия. Контрольные пробы инкубировались в среде без каких-либо добавок. После одночасовой инкубации при 37^оС предметные стекла с монослойными культурами промывали физиологическим раствором и окрашивали в модифицированном методе Риглер Р. (1966) 0,001% акридиновым оранжевым, после чего готовые препараты цитофлюориметрировали усовершенствованным нами методом. Количественную цитофлюориметрию проводили на базе люминесцентного микроскопа ЛЮМАМ-ИЗ. Измеряли интенсивность флюоресценции в области 640 и 530 нм с площади поля зрения объектива малого увеличения в системе темного поля. Для обследования измерений по площадям из цитофлюориметра предварительно был удален один из микрозондов.

Полученные результаты выражали отношением величин флюоресценции Ф640/Ф530 - параметра А по Риглер Р. (1966), отражающий соотношение свободных от хромосомных белков РНК/ДНК. Изменения параметра А под влиянием ЛПС, а также при подавлении супрессорной функции Т-лимфоцитов преднизолоном выражали индексом влияния (ИВ) ЛПТ и преднизолона. Индекс влияния вычисляли по формуле ИВ = , или .

Для подтверждения положительного эффекта способа проведено обследование крови 47 больных достоверным РА (диагноз верифицирован критериям АРА) и 49 здоровых лиц. Результаты представлены в табл.1.

Из представленных данных видно, что показатель активации хроматина существенно и достоверно различается в обследованных группах, и что он неоднороден в группе больных РА.

Определяли частоту обнаружения показателя меньше 1,0 и больше 1,0 в обследованных группах (табл.2.).

Из данных табл.2 видно, что показатель в 100% случаев < 1,0 у здоровых лиц, а у больных PА этот показатель < 1,0 в 33% случаев и > 1,0 в 67% случаев, при этом средние значения показателя у здоровых достоверно выше аналогичного значения в подгруппе больных РА с показателем > 1,0,
Для сравнения результатов предложенного способа с прототипом из группы больных РА выделены 2 подгруппы: с благоприятным и неблагоприятным течением болезни. Выборку осуществляли по клинико-лабораторным и рентгенологическим показателям. В каждой подгруппе определяли PФ и показатель . Результаты анализа показаны в табл.3.

Из данных табл. 3 следует, что показатель больше 1,0 определяется в группе больных PА с неблагоприятным течением в 94% случаев, в то время как РФ в этой группе определяется в 77% случаев, т.е. частота обнаружения диагностического показателя в 1,3 раза выше, чем РФ. В группе больных РА с неблагоприятным течением диагностический показатель больше 1,0 не обнаружен, в то же время диагностический показатель РФ положителен в этой группе в 14% случаев.

П р и м е р 1.. У больной Л., 32 лет, отмечается в течение года воспалительный тип поражения мелких суставов кистей с утренней скованностью до 1 ч. Объективно: проксимальные межфаланговые суставы дефигурированы, отмечается болевое ограничение движений в них. Со стороны анализов крови отмечается ускорение СОЭ до 30-32 мм/ч. Данные рентген-исследования суставов кистей соответствуют I рентгенологической стадии РА. Выставлен диагноз: Ревматоидный артрит Олигоартрит II степени активности ранний вариант I стадии ФН О.Серонегативный.

У больной была взята кровь на показатель , который соответствовал 0,61, т.е. не превышал значения 1,0, что указывало на благоприятный вариант течения РА. Через два года больная была вызвана на контрольный осмотр. Отмечает длительные ремиссии (по 4-6 мес.), другие суставы в процесс не вовлекаются, при повторном рентгенологическом исследовании изменения соответствуют той же I стадии процесса. РФ определяется в титре 1:40.

П р и м е р 2. Больной O., 47 лет, в течение двух лет отмечает артралгии воспалительного типа в коленных и пястно-фаланговых суставах кистей. Болевой индекс составлял 8 баллов (по 2 балла соответственно на 4 сустава) рентген-данные соответствовали I стадии РФ отрицательный. Со стороны анализов крови СОЭ до 25-33 мм/ч. Учитывая стойкость и симметричность суставного синдрома, наличие утренней скованности до полутора часов, наследственной предрасположенности (у матери больного - ревматоидный артрит), больному был выставлен диагноз: Ревматоидный артрит Олигоартрит медленно-прогрессирующее течение I-II ст. активности I стадия Серонегативный. ФН О. У больного была взята кровь на показатель , который соответствовал 1,36, т. е. больше 1,0. Через год у больного в процесс вовлеклись мелкие суставы кистей, локтевые суставы, в области правого локтевого сустава появился ревматоидный узелок. На рентгенограмме суставов появились кистовидные просветления и узоры. Состояние больного расценивалось как неблагоприятный вариант течения ревматоидного артрита, что также подтвердилось через год. В процесс вовлечены почти все суставы, сформировалась "ревматоидная кисть", имеются ревматоидные узелки, рентген-данные органов грудной клетки, а именно базальный пневмосклероз, расценены как "ревматоидное легкое". Рентген-исследование суставов позволило обнаружить деструктивные изменения, соответствующие III стадии РА.

Таким образом, предложенный способ диагностики течения РА отличается от аналога тем, что для диагностики используют иммунологические показатели, а не рентгенологические. Это, в свою очередь, позволяет диагностировать вариант течения РА в значительно более короткие сроки, в отличие от аналога.

Предложенный способ отличается от прототипа тем, что: предложен новый диагностический показатель в отличие от сывороточного РФ прототипа; показатель отражает Т-В-взаимодействия при активации В-клеток, которые нарушены при РА и более точно определяют глубину клинических изменений; позволяет диагностировать вариант течения РА в 1,3 раза точнее прототипа.

Использование: медицина, в частности ревматология, для определения течения ревматоидного артрита. Цель - повышение точности способа. Сущность предложения, исследуют В-лифмоциты крови, в которых определяют активность ядерного хроматина после инкубации в присутствии липосахарида с преднизолоном и в присутствии липосахарида, рассчитывают отношение первого показателя ко второму и при его значении 0,89 и менее определяют благоприятное течение заболевания, а при значении 1,09 и более - неблагоприятное. Применение способа в медицинской практике позволит в 1,3 раза повысить точность определения течения ревматоидного артрита. 3 табл.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА путем исследования В-лимфоцитов крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в В-лимфоцитах определяют активность ядерного хроматина после инкубации в присутствии липосахарида с преднизолоном и в присутствии липосахарида, после чего рассчитывают отношение первого показателя к второму и при его значении 0,89 и менее определяют благоприятное течение заболевания, а при значении 1,09 и более - неблагоприятное.