Способ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии,

Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения уровня специфических глобулинов, связанных с клетками, путем обработки клеток антисывороток к иммуноглобулинам человека, меченной флуоресценизотиоцианатом (ФИТЦ).

Способ осуществляют следующим образом.

Лимфоциты выделяют из крови центрифугированием над смесью фиколгипак 1,078 г/см3, однократно отмывают, ресус- лендируют в 0,5 мл физиологического раствора NaCI. По 0,1 мл суспензии вносят в две центрифужные пробирки, в одну добавляют

0,02 мл разведенного в 20 раз препарата румалон (антиген хряща), в другую - 0,02 мл физиологического раствора NaCi. Пробы инкубируют 18 ч при 37°С во влажной камере. После инкубации во все пробы вносят по 0,02 мл люминесцентной сыворотки против глобулинов человека в удвоенном рабочем титре, пробы встряхивают, инкубируют 1 ч при комнатной температуре, затем центрифугируют 5 мин при 800 д, надоса- дочную жидкость отбрасывают и осадок ре- суспендируют в 1 капле физиологического раствора NaCI, Каплю суспензии из опыта и контроля переносят на предметное стекло, подсушивают и определяют показатели специфической флуоресценции лимфоидных клеток.

ю ю ю со

Далее рассчитывают коэффициент по формуле

Кг ()х 100 усл.ед.

Пример 1. Больная Р., 1935 года рождения, поступила в клинику с выраженным суставно-воспалительным синдромом мелких и крупных суставов рук, отмечены потеря в весе, субфебрильная лихорадка, ускорение СОЭ до 35 мм/ч, лейкоцитоз 9000 мкл, палочкоядерный сдвиг. Обнаружен ревматоидный фактор в титре 1:160. Показатель специфического иммунитета оказался отрицательным (1 усл.ед.). Клинический диагноз: ревматоидный артрит серопозитив- ный, быстро прогрессирующее течение, активность III степени. Однако в дальнейшем у больной появились эритематозные высыпания на лице, в сыворотке обнаружен знтинуклеарный фактор в титре 1:800. Диагноз ревматоидного артрита был снят и выставлен диагноз: системная красная вблчанка, острое течение.

Пример 2. Больная Т., 1945 года рождения, поступила в клинику с умеренно воспалительными изменениями коленных и голеностопных суставов обеих ног. Общие анализы крови и мочи в пределах нормы. Показатель специфическго иммунитета положителен (9 усл.ед.). Клинический диагноз: деформирующий остеоартроз с умеренным синовитом. В дальнейшем у больной развился воспалительный синдром в мелких суставах кистей и стоп, отмечено нарастание СОЭ до 40 мм/ч, лейкоцитоз 8,5 109/мл. Рентгенологически обнаружены эрозивные изменения в мелких суставах кистей. Диагноз остеозртроз был снят и выставлен диагноз: ревматоидный артрит, активность II степени геронегативный.

Пример 3. Больная М., 36 лет, находилась на стационарном лечении с 12/XI no 2/XH 1989 г. с диагнозом: ревматоидный артрит, полиартрит медленно прогрессирующее течение, II стадия, I степень активности, серонегативный. Жалобы при поступлении на боли i припухлость голеностопных, лучезапястных суставов, мелких суставов кистей, утреннюю скованность более 2 ч, ограничение движения в правом локтевом суставе. Из анамнеза: в течение 1,5 лет принимает с хорошим эффектом Д- пенициламин. Объективно: дефигурация преимущественно пролиферативного характера лучезяпястных и голеностопных суставов. Контрактура правого локтевого

сустава. Со стороны внутренних органов без патологии. Лабораторно: Нв - 12,1 г/л; эр.; - 3,9x1012; ЦП - 0,9; Л - 5,2х109/л; СОЭ - 22 мг/г; СРБ +, фибриноген - 4,1 ммоль/л.

Рентгенограмма суставов: околосуставной остеопороз, сужение суставной щели, эрозии хряща.

Определение специфического иммунитета (СИ): Л А : РФ отр. РТМЛ с АХ : 50,7%

РГПЛ с АХ: Кг + 6 усл.ед.

Из этого видно, что больной с достоверным ревматоидным артритом серонегатив- ным вариантом, получающим в течение 1,5 лете хорошим эффектом базисный препарат Д-пенициламин, при определении специфического иммунитета РГПЛ-методом определяется минимальное значение Кг, равное 6 усл.ед., что коррелирует с минимальной клинико-лабораторной активностью болезни (I степень активности).

Определяли наличие СИ в реакции торможения миграции лимфоцитов (РТМЛ), в реакции глобулинпродукции лимфоцитов (РГПЛ) с АХ, по выявлению ревматоидного

фактора (РФ) в латекс-агглютинации (ЛА). Результаты представлены в таблице. Из данных таблицы следует, что СИ обнаруживается РГПЛ-способом в 87,5% случаев, что на 40,4% превышает частоту

положительных результатов РТМЛ-спосо- бом и на 37,5% - ЛА-способом.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Способ определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите путем инкубации лимфоцитов крови с антигеном хряща и без него и с последующей оценкой реакции, отличающийся тем,

что. с целью повышения точности способа, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки клеток антисывороткой к иммуногпобулинаму человека, меченной флуоресценизотиоцианатом, далее регистрируют уровень флуоресценции и рассчитывают показатель уровня глобулина по формуле

КГ-(-1) tOO.

где Кг показатель уровня глобулинов; Гоп - уровень флуоресценции в опыте;

Гк - уровень флуоресценции в контроле, и при значении этого показателя, равном и больше 6, определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите.

Частота обнаружения специфического иммунитета в группах обследованных

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и ревматологии, и может быть использовано для определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Цель изобретения - повышение точности способа. Это достигается тем. что выделенные из крови больного лимфоциты инкубируют с препаратом антигена хряща (приалон) и без него, определяют уровни глобулинов, связанных с клетками, путем обработки антисывороткой к иммуноглобулинам человека, меченной ФИТЦ. Регистрируют уровни флуоресценции в опыте и контроле и рассчитывают показатель уровня глобулина по формуле Кг (Гоп/Гк- 1) -100, где Кг-показатель уровня глобулинов; Г0п и Гк - уровни флуоресценции в опыте и контроле соответственно. При значении Кг, большем или равном 6. определяют наличие специфического иммунитета при ревматоидном артрите. Изобретение позволяет на 40% повысить точность определения специфического иммунитета при ревматоидном артрите. 1 табл. (Л