СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВРЕМЕНИ ЭВАКУАЦИИ БРОНХИАЛЬНОГО СЕКРЕТА Российский патент 1995 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике заболеваний.

Важным механизмом в развитии бронхолегочных заболеваний является повреждение мерцательного эпителия слизистой бронхов, нарушение слизеобразования и, как следствие этого, замедление эвакуации бронхиального секрета из дыхательных путей.

Время эвакуации бронхиального секрета является важным интегральным показателем способности бронхиального дерева к самоочищению, что характеризует глубину поражения слизистой бронхиального дерева, и таким образом, позволяет проводить точную диагностику, дифференциальную диагностику бронхолегочных заболеваний, применять дифференцированный подход к их лечению. В связи с этим, для практического врача проведение оценки времени эвакуации бронхиального секрета имеет важное диагностическое, прогностическое значение, позволяет определить тактику лечения.

Известна методика оценки времени эвакуации бронхиального секрета по гему, в основе которой лежит качественное определение с помощью амидопириновой реакции водонерастворимого гема, ингалированного турбоингалятором "Спинхалер".

Метод заключается в том, что 250 мл донорской эритроцитарной массы гемолизируют тройным объемом дистиллированной воды. Для осаждения белков к гемолизату добавляют 500 мл ледяной уксусной кислоты. После отстаивания отбирают надосадочную жидкость и нейтрализуют ее порошком соды до значения рН 7,5-8,5. В процессе нейтрализации гем выпадает в осадок. Осадок выпаривают и готовят из него мелкодиспергированный порошок путем растирания в ступке до визуального плоскостного размера большинства частиц гема 5 мкм. Контроль степени диспергирования проводят путем измерения частиц под микроскопом. Ингаляцию полученного порошка гема в дозе 200 мг проводят с помощью модифицированного турбоингалятора "Спинхалер" ((Югославия). Перед ингаляцией для профилактики бронхроспастических реакций делают 1-2 вдоха дозированного бронхоспазмолитика (беротек, сальбутамол). После этого для очищения полости рта и глотки предлагают прополоскать рот и выпить 200-300 мл воды. Затем больные собирают мокроту в чистую сухую посуду отдельными порциями через 6 ч. В каждой порции мокроты с помощью амидопириновой реакции определяют наличие гемсодержащих веществ: в исследуемый материал добавляют избыток реактива, состоящего из равных частей 5%-ного спиртового раствора амидопирина, 30%-ной уксусной кислоты, 3%-ной перекиси водорода. По наличию или отсутствию фиолетовой окраски образовавшейся смеси субъективно судят о присутствии гемсодержащих веществ. Исследования заканчивают после того, как в трех последовательно собранных порциях мокроты субъективно отмечается отрицательная качественная реакция.

Существующий метод имеет ряд существенных недостатков.

Метод основан на субъективной оценке наличия или отсутствия окраски в смеси, содержащей бронхиальный секрет и реактив, что свидетельствует о его недостаточной точности.

Порошок гема практически не растворим в воде, что делает невозможным количественное определение индикатора в бронхиальном секрете.

Кровохарканье, сопровождающее течение заболеваний легких у 10% больных ("Руководство по пульмонологии". Под редакцией Н.В.Путов. - Ленинград. - 1984. - 456 с) и практически постоянное наличие в бронхиальном секрете единичных эритроцитов, проникших в просвет бронхов per diapedesis, и содержащих продукты их гемолиза (Л.В.Козловская, А.Ю.Николаев "Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования". - М., Медицина, - 1985. - 288 с) создают высокий процент ложноположительных результатов, не поддающихся корректировке.

Наличие молекул глобина и их участков в ингалируемом порошке сопряжено с сенсибилизацией дыхательных путей.

Риск развития аллергического бронхоспазма вынуждает применять бронхолитики ( β-адреномиметики), что за счет воздействия на специфические α - и β-адренергетические структуры (расширение бронхов, разжижение мокроты, угнетение кашля), искажает истинный ход очищения дыхательных путей.

Неоднородность объемных размеров частиц гема (несомненна при механическом измельчении и визуальном контроле с использованием плоскостной микрометрии) определяет их различный уровень проникновения и распределения в воздухоносных путях.

Целью изобретения является повышение точности способа и снижение его травматичности. Положительный эффект предложенного способа заключается в возможности интегральной оценки кашлевого и мукоцилиарного аппарата и диагностики для менее травматичной диагностики заболеваний легких. Способ дает возможность проведения более точной оценки времени эвакуации бронхиального секрета, что упрощает и объективизирует исследования и создает возможность врачу своевременно и точно начать дифференцированное лечение. Способ прост в исполнении, не требует дорогостоящей аппаратуры и медикаментов. Совокупность существенных отличий способа определения времени эвакуации бронхиального секрета заключается в том, что ингаляцию проводят 50 мл 0,2%-ного раствора инсулина, приготовленного на физиологическом растворе хлористого натрия с последующим выявлением реагента фотометрически.

Способ осуществляют следующим образом.

Больному вечером, накануне исследования предлагают прополоскать рот. Весь период исследования не рекомендуется есть фрукты, мед, сахар, варенье и другие фрукты, содержащие фруктозу. Утром больной собирает контрольную порцию мокроты, после чего проводят ингаляцию раствора инулина - 100 мг на 50 мл физраствора (формы "Мерк", Дармштад, ФРГ, C₆H₁₀O₅(х) степень очистки 90% ) с помощью ультразвукового ингалятора TUR "USI" - 50 (ГДР). Ультразвуковой ингалятор позволяет достигнуть степени дисперсности частиц 5 мкм, что обеспечивает проникновение раствора инулина до терминальных бронхиол (А.Н. Кокосов, Д.А.Поташев "Аэрозольтерапия больных с заболеваниями легких"//Клин. медицина. - 1986. - N 12. - С.108-113, В.Н.Солопов "Диагностика мукоцилиарной недостаточности"//Клиническая медицина. - 1989. - N 7. - С.49-52). После ингаляции больной ополаскивает рот и собирает мокроту в чистую, сухую, градуированную стеклянную посуду отдельными порциями через 6 ч. В собранную мокроту добавляют 20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты в количестве, равном половине собранной мокроты. Оставляют на 20 мин. Фильтруют. Отбирают 3 мл от профильтрованного объема. Дальнейшее исследование проводят по методу Роя на фруктозу. Добавляют 2 мл 0,1%-ного спиртового раствора резорцина и 3 мм концентрированной соляной кислоты. Помещают в водяную баню при температуре 80^оС на 8 мин. Появляется окраска от темно-вишневой до розовой. Охлаждают. Фотоколориметрируют с зеленым светофильтром. Фотоколориметр KFS-2 (Польша). Калибровочную кривую строят по стандартному раствору фруктозы (в 1 мл - 10 мг вещества на 1N растворе соляной кислоты). Берут 0,2; 0,4; 0,6 и т. д. мл стандартного раствора фруктозы, доводят до 2 мл дистиллированной водой. Дальнейшие манипуляции как и в опыте. Контролем в опытном исследовании служит контрольная порция мокроты. Исследования проводят до тех пор, пока показания фотоколориметра опытной порции мокроты не станут равны контрольной три раза подряд. Инулин водорастворим, биологически инертен, не всасывается через слизистые оболочки и не способен гидролизоваться в просвете бронхов, т. к. бронхиального секрета рН 7,45-5,15, температура 38^оС. Инулин гидролизуется до мономеров (фруктозы) лишь в резко кислой среде при температуре 80^оС. Специфический фермент гидролиза инулина - инулаза в организме человека отсутствует (Н.А.Ратнер "Болезни почек и гипертония". - М. Медицина. - 1971. - 464 с, Н.А.Мухина, И.Е.Тареева "Диагностика и лечение болезней почек". - М., Медицина. - 1985. - 240 с., Советский энциклопедический словарь. М. Сов.энциклопедия. - 1988. - 1600 с.).

В результате исследования мы определяем время эвакуации бронхиального секрета по количеству выделенного инулина в каждой порции мокроты. У здоровых субъектов время эвакуации инулина не превышает 30 часов (получено в результате исследования 40 здоровых, некурящих добровольцев). У больных с нарушенной очистительной функцией бронхов время эвакуации значительно больше.

П р и м е р. Больной Л., 29 лет, история болезни N 71. Диагноз обострения хронического обструктивного бронхита ДН_П. Беспокоит одышка при умеренной физической нагрузке, кашель с обильной (до 50 мл в сутки) мокротой, слабость, потливость.

Объективно: дыхание 18-20 в мин, рассеянные влажные средне и крупнопузырьчатые хрипы. Перкуторно - легочный звук с коробочным оттенком. Подвижность нижнего края легкого - 5 см. В анализе крови отмечалась эозинофилия до 20% . Рентгенологически - картина хронического деформирующего бронхита, пульмосклероз. Функция внешнего дыхания: признаки дыхательной недостаточности по обструктивному типу. Проведено определение времени экспекторации по инулину 100 мг на 50 мл физиологического раствора. Время экспекторации превысило 72 ч. Выделение индикатора (по фруктозе) в первой 6-ти часовой порции - 12 мг, во второй - 2 мг, в третьей - 6 мг, в четвертой - 2 мг, в пятой - 6 мг, в шестой - 2 мг, в седьмой - 2 мг, в восьмой - 4 мг, в девятой - 8 мг, в десятой - 2 мг, одиннадцатой - 4 мг, в двенадцатой - 2 мг.

Использование: медицина, а именно диагностика заболеваний легких. Цель: повышение точности и снижение травматичности способа. Сущность изобретения: используют 50 мл 0,2%-ного раствора инулина, приготовленного на физиологическом растворе хлористого натрия. Раствор инулина ингалируют больному с помощью ультразвукового ингалятора. Затем проводят сбор секрета каждые 6 ч в течение 5 - 6 сут. Исследуют собранный материал с целью выявления находящегося в нем индикатора по методу Роя /на фруктозу/. Для повышения точности способа проводят фотоколометрическое исследование. Количественное определение содержащегося в секрете индикатора проводят по калибровочной кривой. Исследование проводят до тех пор, пока в трех подряд порциях секрета реагент не выявляется.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВРЕМЕНИ ЭВАКУАЦИИ БРОНХИАЛЬНОГО СЕКРЕТА, включающий предварительную ингаляцию больного реагентом, сбор каждые 6 ч в течение 5-6 суток бронхиального секрета, выявление реагента в каждой порции секрета и время эвакуации определяют по тому периоду времени, после которого реагент не выявляется в трех последних порциях секрета, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и снижения его травматичности, ингаляцию проводят 50 мл 0,2 %-ного раствора инулина, приготовленного на физиологическом растворе хлористого натрия, с последующим выявлением реагента фотометрически.