СРЕДСТВО "ФИТОЛОН" И "ФИТОЛОН-М" ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ Российский патент 1995 года по МПК A61K35/80 A61K31/40 

Изобретение относится к фармакологии, а именно к созданию профилактических средств при онкологических заболеваниях, вызванных различными факторами.

В нашей стране практически отсутствуют профилактические средства (исключая витамины) для защиты населения от неблагоприятных воздействий окружающей среды (воздух, вода, земля, пища), для защиты лиц, имеющих контакт с канцерогенными веществами как химическими, так и радиоактивными.

За рубежом используют целый набор онко- и радиопротекторов. В наших государствах работа по их созданию только начинается. В НИИ онкологии Н.Н. Петрова созданы первые онкозащитные препараты на основе биоженьшеня. Однако отмечается факт снижения активности онкопротекторов в связи с применением женьшеня, выращенного в искусственных условиях, против природного, добыча которого с каждым годом снижается.

Известны в медицине онко- и радиопрофилактические средства растительного происхождения, такие как каротиноиды (особенно β-каротитокоферолы, флавоноиды, аскорбиновая кислота). Онко- и радиопрофилактические свойства являются одним из проявлений присущей этим веществам адаптогенной активности - способности регулировать нормальную жизнедеятельность организма, в том числе и в экстремальных условиях. Предполагаемый механизм их действия - прямое или опосредованное влияние на клеточные мембраны, стабилизирующие их за счет ингибирования перекисного окисления липидов путем гашения свободно-радикальных процессов. Есть экспериментальные данные о возможности антиоксидантного механизма действия адаптогенов, а также о регулирующем действии их на иммунные процессы.

Современные литературные данные свидетельствуют о том, что хлорофиллы и их производные (особенно медные) также обладают антиоксидантной и иммунномодулирующей активностью, за счет чего проявляется адаптогенное и, в частности, онкопрофилактическое и радиопротекторное действие их.

Известно применение медных производных хлорофилла (МПХ) в онкологии (авт.св. СССР N 755929, кл. А 61 К 35/78, 1980). В данном случае используют жирорастворимый комплекс.

Известно применение производных хлорофилла по тому же назначению (патент Японии N 82-185220,кл. А 61 К 31/40, 15.11.82).

Однако известный препарат не обладает широким спектром фармакологического действия.

Целью изобретения является создание средства, обладающего иммуномодулирующим и гемостимулирующим действием, проявляя при этом антиоксидантную активность и эффективно воздействуя на реакции перекисного окисления липидов, связывания свободных радикалов, т.е. то, что эффективно в качестве профилактического средства при онкологических заболеваниях.

Цель достигается тем, что предлагаются два состава, мас.%: 1. МПХ 0,02-0,05 90%-ный этиловый спирт 90,0-99,9 Вода Остальное 2. МПХ 0,02-0,05 Мятно-хлорофилловая ком- позиция или другой пищевой ароматизатор 0,1-0,5 90%-ный этиловый спирт 90,0-99,5 Вода Остальное
Первый состав назван "Фитолон", а второй "Фитолон-М" с мятным ароматом.

Предложенные составы готовят путем растворения МПХ-пасты в этиловом спирте (исходя из расчетного количества) при Т = =60^оС и перемешивания в течение 30 мин. Далее полученный раствор фильтруют через фильтр-картон или бельтинг, получая таким образом спиртовой раствор МПХ - "Фитолон". В случае получения "Фитолона-М" к раствору добавляют мятно-хлорофилловую композицию. Полученные растворы разливают, упаковывают и маркируют. Композиция должна храниться в закрытых, затемненных помещениях при температуре не выше 25^оС.

Внешний вид - однородная жидкость, допускается некоторое количество осадка. Цвет - зеленый. Запах - мятный для "Фитолона-М" и без запаха для "Фитолона" (или запах другого пищевого ароматизатора). Способ применения: 25-30 капель на стакан воды 2-3 раза в день для взрослых, для детей от 5 до 14 лет 10-15 капель на полстакана воды 2-3 раза в день.

Предложенные составы прошли клинические испытания в НИИ пульмонологии (Санкт-Петербург) и показали, что они могут служить эффективным средством повышения резистентности организма при угрозе развития оксидантных повреждений легких и энергодефицитных состояний, а также для стимуляции регенеративных процессов в легких при ингаляционном воздействии агрессивных факторов внешней среды.

Ниже приведены примеры использования "Фитолона" и "Фитолона-М^".

П р и м е р 1. Испытания активности средства на модели токсического фиброзирующего альвеолита.

Объект исследования: крысы-самцы линии Вистар разводки Питомника лабораторных животных "Рапполово". Исходная масса 140-150 г. Материалы и методы исследования: фиброзирующий альвеолит воспроизводили путем трехкратного интратрахеального введения животным блеомицетина гидрохлорида (НИИ органического синтеза АН ЛатССР, Рига) из расчета 10 мг/кг в 0,3 мл стерильного изотонического раствора хлорида натрия. Под поверхностным эфирным наркозом шприцем через прокол стенки трахеи вводили раствор блеомицетина. Инстилляции блеомицетина повторяли еще два раза с интервалами между введениями 14 дн. Половине животных (n=15), начиная с первого дня после каждого введения блеомицетина, в течение 10 дн перорально с помощью зонда вводили масляный раствор МПХ (основы "Фитолона") 25 мг/кг. Другая половина животных (n=15) составила контрольную группу, которой по аналогичной схеме перорально вводили растительное масло. Кроме того, были обследованы 10 интактных животных. Животных обследовали на 30-е сутки после третьего введения блеомицетина. В качестве основных критериев развития фиброзирующего альвеолита и оценки эффективности применяемого препарата использовали распространенность и выраженность фиброза легких по данным морфологического исследования; развитие легочного сердца (по данным биометрического анализа; цитологический анализ бронхоальвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ) показатели иммунологического статуса.

При выведении из опыта животных погружали в эфирный наркоз, взвешивали и выполняли торактомию. Бронхоальвеолярный ЛАВАЖ проводили на изолированных легких стерильным физиологическим раствором (Т = 35-36^оС). Определяли цитограмму БАЛЖ - оценивали количественный и качественный состав клеток. Поглотительную способность альвеолярных макрофагов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа оценивали по методу Е.И.Шмелева с использованием стандартных частиц латекса. Рассчитывали фагоцитарное число и фагоцитарный индекс. Для морфологического исследования легкие расправляли введением в трахею забуференного 10% -ного раствора формалина и фиксировали в течение 5 дн. Гистологические препараты окрашивали гематоксилин-эозином и по ван-Гизону. Выраженность гипертрофии правого желудочка сердца оценивали, рассчитывая желудочковый индекс в процентах, для чего выполняли раздельное взвешивание желудочков сердца по Мюллеру. Кроме того, рассчитывали весовые индексы легких, сердца, надпочечниковой железы как отношение массы органа в миллиграммах к массе тела в граммах. Количественные результаты обработаны методами вариационной статистики.

Результаты морфологического исследования легких. Обзоpное исследование гистологических препаратов легких показало, что через месяц после трехкратного введения блеомицетина в легких контрольных животных определяли распространенный мелкоочаговый, местами диффузный интерстициальный фиброз с образованием в некоторых участках "микрокистозного легкого". Мелкие кисты были выстланы упрощенным или кубическим эпителием. Вокруг мелких бронхов и сосудов обнаруживалась соединительная ткань, инфильтрованная нейтрофилами и лимфоцитами. Выявлялись очаги иррегулярной эмфиземы легких.

В группе животных, получавших в качестве лечебного препарата МПХ (действующая основа "Фитолона"), по данным гистологического анализа фиброз был выражен незначительно. Отмечались мелкие очажки пневмонии.

Результаты биометрического анализа. В табл.1 представлены результаты определения весовых индексов легких, сердца и надпочечников у животных. У контрольных крыс легочный коэффициент превышал значение аналогичного показателя у интактных животных на 151%. Применение "Фитолона" предотвращало повышение массы легких и нормализовало легочный индекс, который не отличался от такового у интактных животных. Сердечный индекс в группе животных с нелеченным фиброзом легких был несколько выше, чем в норме, в то время как у крыс, получавших препарат хлорофилла, практически не отличался от нормы. Характерной чертой нелеченного фиброза легких являлась существенная гипеpтрофия надпочечниковых желез: надпочечниковый весовой индекс в 2,5 раза превышал показатель интактных животных. На фоне применения препарата это увеличение было выражено значительно меньше и составило 85%. Животные, получавшие перорально "Фитолон", практически набирали общий вес в соответствии с возрастной нормой, в то время как контрольные крысы отличались крайним истощением.

Результаты раздельного взвешивания желудочкового сердца свидетельствовали о развитии у животных контрольной группы гипертрофии правого желудочка сердца - основного признака легочного сердца. Желудочковый индекс превышал значение этого показателя в норме в 2 раза. У животных, леченных препаратом хлорофилла, масса правого желудочка возрастала значительно меньше и индекс составил в среднем 48%.

Результаты цитологического исследования (БАЛЖ). В табл.2 представлены результаты дифференциального анализа клеточного состава БАЛЖ в группах обследованных животных. На фоне применения препарата отмечалось некоторое повышение процентного содержания макрофагов в БАЛЖ в сравнении с контролем. В содержании нейтрофилов и лимфоцитов не наблюдалось сколько-нибудь заметного различия между группами.

Результаты исследования фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов. У животных, получавших "Фитолон", были зарегистрированы более высокие значения фагоцитарного числа и индекса альвеолярных макрофагов (64,5% ± 1 и 5,5 ± 0,2 усл. ед. соответственно) в сравнении с контрольными животными (45,7 ± 1,5% и 3,5 ± 0,5 усл.ед., р < 0,05).

Таким образом, на модели токсического фиброзирующего альвеолиза проведено исследование эффективности применения МПХ основы "Фитолона", полученного из растительного сырья для коррекции фиброзирующего процесса в легких при действии токсических агентов. У животных, получавших препарат в качестве лечебного средства и пищевой добавки, отмечены следующие достоверные отличия от контрольных (нелеченных) животных: гистологически не выявлено образование соединительной ткани в легких; сохранялись нормальные значения легочного и сердечного весовых индексов, увеличение массы тела соответствовало возрастным нормам, значительно менее выражена гипертрофия правого желудочка сердца и надпочечников, увеличена функциональная активность альвеолярных макрофагов, что подтверждено более высокими показателями поглотительной способности макрофагов БАЛЖ.

Возможными механизмами реализации терапевтического эффекта МПХ - основы "Фитолона" и торможения фиброзирующего процесса в легких могут быть стимуляция пролиферации бронхоальвеолярного эпителия, поврежденного блеомицетином, снижение повреждающего действия активных метаболитов кислорода на легочную паренхиму в результате проявления антиоксидантных свойств исследованного препарата. Таким образом, препарат может с успехом применяться для профилактики расстройств, связанных с неблагоприятными профессиональными и экологическими факторами, при лечении большими дозами антибиотиков.

П р и м е р 2. Действие "Фитолона" при гематологических расстройствах.

В НИИ онкологии им.Н.Н.Петрова было проведено лечение "Фитолоном" 10 больных по поводу значительных гематологических расстройств. Использование продукта в клинической медицине является правомерным, поскольку "Фитолон" и "Фитолон-М" являются пищевой добавкой, разрешенной к использованию Минздравом РФ. Из 10 больных у двух наблюдалась гипохромная анемия, а у восьми - выраженная лейкопения, обусловленная проведением полихимиотерапии, "Фитолон" вводили перорально по 30-35 капель на стакан воды 2-3 раза в день в течение 10-14 дн. Другие гемостимулирующие препараты не применялись. При контрольных анализах крови в случае исходной лейкопении (800-1500 клеток на 1 мм³) зафиксировано неуклонное повышение числа лейкоцитов до 3,0-3,5 тысяч на 1 мм³. В случаях исходной анемии через 7-10 дн. число эритроцитов достигало нормальных значений, а содержание гемоглобина повысилось с 35 до 80-105 единиц. Так, у больной З., страдающей раком толстой кишки, через неделю от начала лечения количество эритроцитов повысилось с 1,7х10¹²/л до 3,2х10¹²/л, а содержание гемоглобина - с 32 до 86 единиц. У больной Т. с эссенциальной анемией через 10 дн приема "Фитолона" число эритроцитов с 1,9х10¹²/л достигло 3,5х10¹²/л.

Таким образом, лечебно-профилактическая активность пищевой добавки "Фитолон" не вызывает сомнений. Препарат может с успехом применяться для профилактики гематологических расстройств, а также для лечения эритро- и лейкопенией, в том числе и в онкологической практике.

П р и м е р 3. Действие "Фитолона" на культуру костного мозга.

Исследования по влиянию МПХ на клоногенную пролиферативную активность костного мозга проведены в отделении миелотрансплантации НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова. В качестве клеток-мишеней использовали ядросодержащие клетки периферической крови больного миелолейкозом, больного хроническим лимфолейкозом, трофопластической болезнью (культуры костного мозга) и культуры нормального костного мозга. Клетки инкубировались с МПХ (основа "Фитолона" ) от 1 до 24 ч. Полиферативную активность и жизнеспособность клеток оценивали по синтезу ДНК (включение радиоактивной метки 3Н-тимидин). Время инкубации с 3Н-тимидином 18 ч. Оценка проводилась также по окрашиванию трипановым синим и по способности к колониеобразованию в полутвердом агаре. Полученные при изучении данные показали, что точкой приложения этих препаратов является гранулоцитарный росток, а именно мембраны стволовых клеток. Сами по себе МПХ для клеток костного мозга оказались нетоксичными. Эти обстоятельства делают понятным полученный клинический эффект, когда "Фитолон" оказывает иммуномодулирующее и гемостимулирующее действие, проявляя антиоксидантную активность, эффективно воздействуя на реакции перекисного окисления липидов, связывания свободных радикалов.

Результаты исследований по определению полулетальных доз МПХ фирмы "Человек" - основного действующего вещества пищевой добавки "Фитолон" и "Фитолон-М" продемонстрировали нетоксичность указанных препаратов в широком диапазоне использованных доз - 575,2 ± 90,6 мг/кг массы тела.

Результаты исследований показали, что "Фитолон" и "Фитолон-М" эффективны в качестве средства профилактики патологических процессов в организме людей, занятых в производствах, связанных с действием токсических агентов (ионизирующее излучение, химические выбросы, вредные вещества), а также для профилактики онкологических заболеваний.

Использование: в фармакологии, а именно при создании профилактических средств при онкологических заболеваниях, вызванных различными факторами. Сущность: "Фитолон" содержит, мас.%: этиловый спирт 90 - 99,9; медные производные хлорофилла (МПХ) 0,02 - 0,05; воду остальное. "Фитолон - М" содержит, мас. %: этиловый спирт 90 - 99,9; МПХ 0,02 - 0,05; пищевой ароматизатор 0,1 - 0,5; воду остальное. МПХ эффективны в качестве средства для профилактики онкологических заболеваний. Повседневное применение МПХ необходимо для профилактики патологических процессов в организме людей, занятых в производствах, связанных с ионизирующим излучением и вредными химическими веществами, а также живущих в неблагоприятных экологических условиях. 1 з.п. ф-лы, 2 табл.

СРЕДСТВО "ФИТОЛОН" И "ФИТОЛОН-М" ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ.