СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики гемахроматоза и, в частности, цирроза печени и может применяться в клинической и экспериментальной гематологии и гепатологии.

Известен способ диагностики цирроза печени, основанный на гистохимическом выявлении железа в гепатоцитах после пункционной биопсии.

Сущность способа заключается в следующем.

После специальной подготовки пациента выполняют лапароскопию и пункционную биопсию печени и фиксируют кусочки печени после иссечения в 10%-ном забуференном растворе формалина в течение 48 ч. Подготавливают гистологические срезы после обезвоживания, просветления и заливки в парафин и проводят гистохимические реакции с 2%-ным раствором ферроцианида калия и соляной кислотой для выявления гемосидерина. Докрашивают 0,2%-ным раствором сафранина, обезвоживают и заключают в полистирол. При микроскопическом исследовании в случае выявления в гепатоцитах диффузной и очаговой окраски диагностируют цирроз печени.

К недостаткам способа относятся травматичность и опасность серьезных осложнений после пункционной биопсии печени, а также широкий спектр абсолютных и относительных противопоказаний к проведению лапароскопии; необходимость обязательной госпитализации для лапароскопии, а следовательно, невозможность ее применения в амбулаторных условиях и в стационарах, не имеющих операционных блоков; трудоемкость технического исполнения; невозможность использования способа при отсутствии необходимых условий асептики и антисептики, а также набора оборудования и инструментов.

Известен также биохимический способ диагностики нарушений обмена железа, используемый в сочетании с морфологическим для выявления гепатоцеллюлярных повреждений. Сущность способа заключается в комплексном исследовании обмена железа, включающем выявление гемосидерина в гепатоцитах и клетках Купфера при параллельном определении содержания железа в сыворотке крови. Способ включает следующие этапы: пункционную биопсию печени с последующим гистохимическим выявлением гемосидерина (по методике способа-аналога, включающего все этапы диагностики); определение концентрации железа в плазме крови: взятие крови из локтевой вены в количестве 3 мл, центрифугирование в течение 10-15 мин при 3000 об/мин, добавление к 1 мл плазмы стандартной смеси для осаждения белков, центрифугирование в течение 10-15 мин при 3000 об/мин, добавление к 1 мл супернатанта 1 мл реактива (4,7-дифенил-1,10-фенантролин-3,6 дисульфоновая кислота 0,46 ммоль/л, уксусный натрий 2 ммоль/л), спектрофотометрия при 540 нм.

При повышении концентрации железа в плазме крови до 30 мкмоль/л и более, наличии гемосидерина в клетках Купфера и гепатоцитах диагностируют цирроз печени.

Однако диагностическая значимость этого способа не оправдала себя при общепринятом в клинической практике однократном определении концентрации железа в плазме крови в утренние часы, особенно на ранней стадии патологического процесса.

Существенными недостатками способа-прототипа являются трудоемкость технологии (необходимость проведения лапароскопии и пункционной биопсии печени, соблюдение условий асептики и антисептики, наличие операционной), а также необходимость проведения продолжительных и трудоемких гистохимических исследований в течение 10 сут. Эти недостатки снижают информативную значимость и ограничивают возможности диагностического применения его в клинико-лабораторной практике.

Цель изобретения - разработка биоритмологического способа диагностики цирроза печени, включающего выявление железа в пробе мочи, собранной за период времени с 6 до 15 ч, и при значении этого показателя выше 40 мкг диагностируют цирроз печени. Простота предлагаемой технологии по сравнению со способом-прототипом позволяет сократить время и трудозатраты, а также расширить область применения способа в клинической практике для дифференциальной диагностики цирроза печени. Атравматичность способа, исключение возможности инфицирования организма, безвредность и безболезненность для обследуемого, простота технологии позволяют использовать его в любой биохимической лаборатории.

Цель достигают, определяя уровень железа в пробе мочи следующим образом. Собирают мочу, выделенную обследуемым с 6 до 15 ч, и измеряют ее объем. Определяют концентрацию железа в моче. Для этого центрифугируют мочу в течение 10-15 мин при 1500 об/мин, добавляют к 1 мл мочи 1 мл стандартной смеси для осаждения белков, центрифугируют в течение 10-15 мин при 3000 об/мин, добавляют к 1 мл супернатанта 1 мл реактива (4,7-дифенил-1,10-фенантролин-3,6-дисульфоновая кислота 0,46 ммоль/л, уксуснокислый натрий 2 ммоль/л), спектрофотометрируют при 540 нм.

На основе данных концентрации железа и количества мочи в исследуемой порции рассчитывают количество железа, выделенного с мочой за время с 6 до 15 ч. Сравнивают полученные показатели с определенной нормой экскреции железа с мочой за время с 6 до 15 ч для здоровых людей, которая колеблется в пределах от 12 до 36 мкг, и при значении выше 40 мкг диагностируют цирроз печени.

Проведенный анализ суточной динамики экскреции железа с мочой у здоровых людей показал, что за сутки выделяется 135,52 ±36,77 мкг железа. При этом наибольшие значения отмечаются с 18 до 3 ч, а наименьшие - с 6 до 15 ч (табл. 1). У пациентов с циррозом печени при недостоверном снижении среднесуточных значений сидерурии - 128,71 ±28,66 мкг - отмечается инверсия суточного ритма с максимальными значениями с 6 до 15 ч и минимальными с 18 до 3 ч (табл. 1).

Таким образом, различия в интенсивности экскреции железа с мочой у здоровых людей и у пациентов с циррозом печени достоверны на протяжении временных интервалов с 6 до 15 и с 18 до 3 ч. Однако в качестве информативного рекомендуют интервал с 6 до 15 ч, так как это время наиболее удобно для работы биохимической лаборатории и, что наиболее важно, исключает вмешательство в биологические ритмы обследуемых (исследование в ночные часы обусловливало бы необходимость пробуждения пациентов для обследования).

Кроме того, при анализе структуры индивидуальных ритмов обнаружена неоднородность группы пациентов с циррозом печени по тому периоду суток, который соответствует максимальной сидерурии. Установлено, что в 76,2% случаев максимальная экскреция железа отмечена с 9 до 12 ч. Смещение максимальных значений на интервалы времени с 6 до 9 ч зафиксировано в 11,9% случаев и с 12 до 15 ч - в 11,9% (табл. 1). Очевидно, что определение мочевой экскреции железа за период с 6 до 15 ч позволяет учесть и особенности индивидуальных суточных ритмов у обследуемых, что повышает диагностическую значимость предлагаемых критериев диагностики цирроза печени.

Существенные отличительные признаки предлагаемого способа: определение количества железа, выделяемого с мочой; использование информативного временного интервала для проведения диагностического исследования с 6 до 15 ч.

П р и м е р. Больной Козаку В.С., 48 лет. История болезни N 678. Поступил в клинику общей хирургии с подозрением на цирроз печени. Из анамнеза известно, что 7 лет назад перенес вирусный гепатит.

Жалобы на слабость, быструю утомляемость, периодически возникающие боли во всем животе, тошному. При клиническом осмотре выявлены "сосудистые звездочки" на правом плече.

Биохимические исследования: общий белок 69 г/л, альбумины 57,0% γ-глобулины 19,5% . Общий билирубин 18,6 ммоль/л, тимоловая проба 3,1 ед, сулемовая проба 2,1 мл.

Учитывая недостаточную информативность клинических и биохимических показателей для диагностики цирроза печени, параллельно определили количество железа, выделенного с мочой с 6 до 15 ч (табл. 3.1). Количество железа, выделенного с мочой с 6 до 15 ч, составило 60,1 мкг, что значительно превышает показатели экскреции железа с мочой у здоровых людей (табл. 3.2,3) и в комплексе с клиническими и биохимическими данными позволяет диагностировать цирроз печени. Диагноз верифицирован при пункционной биопсии печени.

Использование: в медицине, а именно в клинической и экспериментальной гепатологии. Цель: упрощение, повышение точности, атравматичность способа. Сущность предложения: у больного собирают мочу за период времени с 6 до 15 ч, в пробе мочи определяют уровень железа и при значении этого показателя выше 40 мкг диагностируют цирроз печени. Точность способа диагностики составляет 100%. 3 табл.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ, включающий выявление железа в биологическом материале, отличающийся тем, что, с целью упрощения, повышения точности и атравматичности способа, уровень железа определяют в пробе мочи, собранной за период времени с 6 до 15 ч, и при значении этого показателя выше 40 мкг диагностируют цирроз печени.