Способ определения хронических поражений печени алкогольной, аутоиммунной и вирусной этиологии Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии;

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

1,6 мл венозной крови пациента наслаивают на 0,4 мл 3,8% натрия цитрата и оставляют на 20 мин при комнатной температуре. На поверхности осев- .шей эритроиитарной массы образуется белесоватый слой лейкоцитов, который снимают пастеровской пипеткой и из него готовят мазок на предметном стекле. Мазок фиксируют в ацетоновом фиксаторе 35 с. Состав ацетонового фиксатора: 50 мг трилона Б, 120 мл ацетона и 80 мл дистиллированной воды

(рН 5-5,2). Затем мазок промывают дистиллированной водой и подсушивают. После этого погружают в стаканчик с инкубационной средой ,и ставят в . термостат на 1 ч при 37 С. Инкубационную среду готовят следующим образом. Вначале готовят среду без субстрата: смешивают 300 мл фосфатного буфера (рН 7,2-7,4), 0,078 г трилона Б,и 0,078 г п-нит- ротетразолия фиолетового, фильтруют и хранят в холодильнике. Затем приготавливают инкубационную среду с субстратом: в 40 мл среды без субстрата (рН 7,2-7,4) добавляют 0,67 г динатриевой соли D-lrei -глицерофосфата. Хранят в холодильнике. Перед употреблением подогревают до 37 С.

СП СП

до

SS

2

После инкубирования мазки промывают проточной дистиллированной водой и сушат при комнатной температуре. Высушенные мазки окрашивают 0,25%-ным раствором Janus Grim от 15 до 60 с, после этого повторно промывают и подсушивают. Считают число фиолетовых гранул формазана в 50 лимфоцитах под световым микроскопом с иммерсионным объективом (увеличение в 900 раз) и выводят средний показатель активности альфа-глицерофосфатдегид- рогеназы, определяемый как среднее число фиолетовых гранул формазана в просчитанных лимфоцитах. Определение длится 3-4 ч. Активность альфа-глицег рофосфатдегидрогеназы у здоровых людей составляет 9,24±0,63 гранул в лимфоците (30 чел) .-При увеличении активности фермента на 20% и более относительно нормы определяют хроническое поражение печени алкогольной, аутоиммунной и вирусной этиологии.

Пример 1, Больной П.А.В. поступил в клиническую больницу с жа- лрбами на боли в правом предреберье и эпигастральной области. Считает себя больным около 7 мес когда появились тошнота и рвота кровью. Раньше часто употреблял алкоголь. При объективном обследовании: печень увеличена, выходит из под реберной дуги на 2 см, край плотный, болезненная; несколько увеличена селезенка. Лабораторные исследования: АлАТ 0,14 ммоль/ч/л, АсАТ 0,28 ммоль/ч/л, тимоловая проба 5,3 ед,, общий билирубин 45,1 ммоль/ч/л/1рямой 9,0 ммоль/ч/л, непрямой 36,1 ммоль/ч/л, У-глобулин крови 25,9%, HBsAg(-). Скенниро- вание печени: печень деформирована с неровными контурами, изотоп накапливает неравномерно, по всей поверхнос

0

5

0

Q

5

35

40

П р и.м е р 2. Больной Б.Г,И,, поступил в. клиническую больницу с жалобами на боли в правом предреберье, диспепсические явления. Объективно; печень при пальпации несколько увеличена, на 2-3 см выходит из-под реберной дуги, гладкая, слегка болезнен- ная. Лабораторные данные: АлАТ 0,14 ммоль/ч/л, АсАТ 0,21 ммоль/ч/л, ЩФ 0,08 ммоль/ч/л, общий билирубин 12,5 ммоль/л, тимоловая проба 1,6 ед. СОЭ 2 мм/ч. Жалобы больного, перенесенный острый вирусный гепатит, увеличенная печень позволили заподозрить хронический вирусный гепатит, однако по данным лабораторного исследования патологии со стороны печени не выявлено о Проведено исследование активности альфа-глицерофосфатдегидро- геназьт - 15,06 гранул, т.е. на 63% превышает норму. Проведена пункцион- ная биопсия печени и в пунктате выявлено следующее: жировая-белковая дистрофия гепатоцитов, в портальных трактах лимфоидная инфильтрация. Был поставлен диагноз: хронический вирусный персистирующий гепатит.

Таким образом, исследование активности альфа-глицерофосфатдегидроге- назы играет решающую роль в клинической диагностике хронических поражений печени в ряде случаев, когда они не сопровождаются изменением других биохимических показателей, т.е. ци- толитический синдром отсутствует или слабо выражен, в основном в случаях гепатоза или хронического персистирую- щего гепатита, особенно алкогольного генеза, так как данные формы в подавляющем большинстве случаев латентные, скрытые., Определение данного показателя способствует диагностике и в далеко зашедших стадиях хронических

Изобретение относится к медицине, в частности к гепатологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого из периферической венозной крови получают обогащенную лейкоцитарную взвесь, из нее готовят мазок на предметном стекле и проводят гистохимическую реакцию на активность альфа-глицерофосфатдегидрогеназу, используя в качестве акцептора протонов N - нитротетразолий фиолетовый. Затем подсчитывают число гранул образовавшегося формазана в 50 лимфоцитах и выводят средний показатель активности фермента. При увеличении активности на 20% и более относительно нормы диагностируют хроническое поражение печени алкогольной, аутоиммунной или вирусной этиологии. Точность способа составляет 96,7%.

ти имеются очаги резкой величины и ин-дс заболеваний печени, когда вследствие

тенсивности.

На основании полученных данных можно было предположить поражение печени, т.е. алкогольный цирроз печени, сформировавшаяся стадия с признаками портальной гипертензии. Проведено исследование альфа-глицерофосфатдегидро геназы: 11,09 гранул, т.е. на 20,02% превышает норму, хотя активность трансаминаз нормальная Клинический диагноз подтвержден пункционной биопсией печени (86,03.13), а также во время последующей операции - наложения спленоренального шунта.

5

тяжелого поражения гепатоцитов нарушается синтез секреторных ферментов АлАТ и АсАТ и лабораторная диагностика дает отрицательные результаты.

Предлагаемый способ повышает точность определения, особенно на начальных стадиях поражения печени, которая составляет 96,7% (на материале обследования 90 больных), технически прост и нетрудоемок. Формула изобретения

Способ определения хронических поражений печени алкогольной, аутоим51559294

мунной и вирусной этиологии путемфа-глицерофосфатдегидрогеназы в лимбиохимического анализа крови, о т -фоцитах периферической крови и при

личающийся тем, что, сувеличении ее активности на 20% и

целью повышения точности способа,более относительно нормы определяют

проводят определение активности аль-хроническое поражение печени.