СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИГАНТСКИХ ЭРИТРОЦИТОВ Российский патент 1995 года по МПК A61K47/00 

Изобретение относится к биологии, в частности к биомембранологии, и может быть использовано для определения трансмембранного потенциала эритроцитов.

Известен способ получения гигантских эритроцитов путем их слияния с помощью электрического поля.

Однако этот метод требует специального, дорогого и дефицитного оборудования и позволяет получить лишь небольшое количество (3-5) слившихся клеток размером до 150 мкм.

Цель изобретения повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что эритроциты выделяют из крови, отмывают, осадок эритроцитов инкубируют в забуференном физиологическом растворе в присутствии 1,5-2,5 мМ аденина, 9-11 мМ инозина, 9-11 мМ глюкозы и 150-180 мМ Na₂HPO₄, затем эритроциты отмывают в забуференном физиологическом растворе и после добавления хлористого лантана до конечной концентрации 100-200 мкМ инкубируют при 37-43^о С.

Способ осуществляют следующим образом. Полученную кровь человека центрифугируют, плазму убирают, а эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором. Осадок отмытых эритроцитов помещают в среду, содержащую 146 мМ NaCl, 15 мМ трис-HCl (рН 7,4), 1,5-2,5 мМ аденина, 9-11 мМ инозина, 9-11 мМ глюкозы и 150-180 мМ Na₂HPO₄ и инкубируют при 37^оС в течение 15 ч.

После инкубации эритроциты дважды промывают физиологическим раствором. Осадок отмытых эритроцитов разводят забуференным физиологическим раствором (146 мМ NaCl, 10 мМ трис-HCl, рН 7,4) в 200-400 раз. После этого добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 100-200 мкМ и помещают в водяную баню при 37-43^оС на 30 мин. Слияние клеток, их количество и размеры контролируют с помощью светового микроскопа. Выход гигантских клеток 50-100 шт. диаметр 100-300 мкм. Работа проводилась на эритроцитах, полученных от 25 различных доноров.

Эффективность способа в зависимости от концентрации химических агентов представлена в таблице.

Таким образом, использование способа получения гигантских эритроцитов обеспечивает по сравнению с прототипом более высокий выход целевого продукта.

Использование: в биологии для определения трансмембранного потенциала эритроцитов с помощью микроэлектродов. Сущность изобретения: выделенные эритроциты предварительно инкубируют в забуференном физиологическом растворе, содержащем 1,5-2,5 мМ аденина, 9-11 мМ инозина, 9-11 мМ глюкозы, 150-180 мМ неорганического фосфата, затем эритроциты отмывают, разводят в 200-400 забуференном физиологическом растворе и после добавления хлористого лантана до конечной концентрации 100-120 мМ помещают в водную баню при 37-43 °С. 1 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИГАНТСКИХ ЭРИТРОЦИТОВ, включающий выделение эритроцитов из крови, их отмывание с последующим слиянием, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, выделенные эритроциты предварительно инкубируют в забуференном физиологическом растворе, содержащем 1,5 2,5 мМ аденина, 9 11 мМ инозина, 9 11 мМ глюкозы, 150 180 мМ Na₂HPO₄, затем отмывают, разводят в 200 400 раз забуференным физиологическим раствором, а слияние осуществляют инкубацией при 37 - 43^oС в присутствии 100 200 мМ хлористого лантана.