Способ слияния эритроцитов Советский патент 1992 года по МПК C12N5/00 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения большого количества слившихся клеток и изучения механизма их слияния.

Известен способ слияния эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови, их отмывание, добавление s качестве агента слияния полиэтиленгликоля и учет слившихся клеток.

Недостатком способа является небольшая (10-30%) частота слияния клеток.

Цель изобретения - увеличение числа слившихся клеток.

Поставленная цель достигается тем, что выделенные из крови и отмытые эритроциты смешивают с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной концентрации 8-12 мМ, полученную смесь инкубируют, затем эритроциты омывают от кислоты и смешивают с 0,5-5,0 мМ раствором хлористого кальция, после чего в указанную смесь добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,30 .,. 0,35 мМ, при этом 8

качестве агентов слияния используют моно- иодуксусную кислоту, хлористый кальций и хлористый лантан.

Способ осуществляют следующим образом.

Свежезаготовленную кровь донора центрифугируют при 2000 g в течение 5 мин, плазму убирают, а эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором с последующим центрифугированием.

К 1,0 мл осадка отмытых эритроцитов добавляется 9 мл моноидоуксусиой кислоты до конечной концентрации 8 ... 12 мМ, приготовленной на забуференном физиологическом растворе и инкубируют в течение 30 мин при 37°С. После инкубации эритроциты дважды отмывают от кислоты физиологическим раствором, 0,1 мл осадка отмытых от кислоты эритроцитов смешивают с 0,8 мл раствора хлористого кальция, приготовленного на забуференном физиологическом растворе, до конечной концентрации 0,5- 5,0 мМ, перемешивают и добавляют 0,1 мл

раствора хлористого лантана, приготовленного на забуференном физиологическом растворе, до конечной концентрации 0,30- 0,35 мМ.

Учет слившихся клеток ведется с помощью светового микроскопа. Частота слияния эритроцитов в зависимости от концентрации агентов слияния представлена в таблице.

Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход слившихся клеток до 60%.

Формула изобретени я - Способ слияния эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови, их

0

5

отмывание с последующим слиянием с помощью химических агентов и умет числа слившихся клеток, отличающийся тем, что, с целью увеличения числа слившихся клеток, в качестве химических агентов используют моноиодуксусную кислоту, хлористый кальций и хлористый лантан, при этом осадок эритроцитов смешивают с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной концентрации 8-12 мМ, после чего полученную смесь инкубируют, эритроциты отмывают и смешивают с 0,5-5 мМ раствором хлористого кальция, затем в указанную смесь добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,30-0,35 мМ,

Использование: биотехнология, цитология, способы получения большого количества слившихся клеток и изучения механизма их слияния, Использование в качестве химических агентов моноиодуксусной кислоты, хлористого кальция и хлористого лантана, при этом осадок эритроцитов смешивают с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной концентрации 8-12 мм, после чего полученную смесь инкубируют, эритроциты отмывают и смешивают с 0,5-5 мМ раствором хлористого кальция, после чего в указанную смесь добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,30-0,35 мм 1 табл.