Способ получения слившихся эритроцитов Советский патент 1993 года по МПК C12N15/00 

Изобретение относится к биологии и медицине, в частности, к биотехнологии и может быть использовано для получения большого количества слившихся клеток и изучения механизма их слияния.

Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что эритроциты выделяют из крови, отмывают и производят их слияние в присутствии химических агентов, при этом выделенные эритроциты предварительно инкубируют 14-16 часов в забуференном физиологическом растворе, содержащем 1,5-2,5 мМ аденина, 9-1-1 мМ инозина, 4-8 мМ глюкозы и 100- 150 мМ N32HP04, затем отмывают, разводят в 200-400 раз забуференным физиологическим раствором, а слияние осуществляют инкубацией в присутствии 20-160 мкМ хлористого лантана.

Способ осуществляется следующим образом.

Полученную кровь человека центрифугируют, плазму,и клетки белой крови убирают, а эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором. Отмытые эритроциты помещают в забуфуренный физиологический раствор (15 мМтрис-HCI, 146

мМ NaCI, pH-7,4), содержащий 1,5-2,5 мМ аденина, 9-11 мМ инозина, 4-6 мМ глюкозы и 100-150 мМ Ма2НР04(в качестве источника неорганического фосфора) и ставят на 14-16 ч в водяную баню при 37°С. После инкубации эритроциты дважды отмывают физиологическим раствором. . Осадок отмытых эритроцитов разводят забуференным физиологическим раствором в 200-400 раз, после чего добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 20- 160 мкМ и помещают в водяную баню при 37°С на 60 мин. Слияние клеток контролируют с помощью светового микроскопа. Выход слившихся клеток составляют 60-80%.

Выход слившихся клеток в зависимости от концентрации химических агентов при предварительной инкубации -15 часов, разведении эритроцитов в суспензии в 200 раз представлен в таблице.

Продолжительность инкубации менее 14 и более 16 ч, а также разведение менее чем в 200 и более чем в 400 раз при указанных концентрациях химических агентов, приводит к снижению процента слившихся клеток.

Таким образом, использование предложенного способа получения слившихся

(Л

С

00

-л

ю ю о о

эритроцитов, обеспечивает по сравнению с прототипом более высокий выход целевого продукта.

Формула изобретения Способ получения слившихся эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови, их отмывание с последующим слиянием в присутствии химических агентов, отличающийся тем, что, с целью повышения

0

выхода целевого продукта, выделенные эритроциты предварительно инкубируют 14-16 ч в забуференном физиологическом растворе, содержащем 1,5-2,5 мМ аденина, 9-11 мМ инозина, 4-6 мМ глюкозы и 100- 150 мМ N32HP04, затем отмывают, разводят в 200-400 раз забуференным физиологическим раствором, а слияние осуществляют инкубацией в присутствии 20-160 мкМ хлористого лантана.

Использование: в биологии и медицине, в частности в области биотехнологии, Сущность изобретения: выделенные эритроциты предварительно инкубируют в присутствии 1,5-2,5 мМ аденина, 9-11 мМ инозина, 4-6 мМ глюкозы и 100-150 мМ неорганического фосфора, а слияние осуществляют инкубацией с 20-160 мкМ хлористого лантана. 1 табл.