СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НЕКАРЦИНОИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ ЛЕГКОГО ЧЕЛОВЕКА Российский патент 1995 года по МПК C12N5/02 G01N33/574 

Изобретение относится к области онкологии, а именно к дифференциальной диагностике опухолей.

Проблема дифференциальной диагностики между карциноидами и некарциноидными опухолями, в частности мелкоклеточным раком легкого, в отдельных случаях между карциноидами и аденокарциномами легкого в настоящее время не может считаться до конца решенной. Несмотря на то, что известен ряд тонких гистологических различий между типичными карциноидами и мелкоклеточными опухолями легкого, в некоторых случаях гистологи испытывают трудности в постановке окончательного диагноза. Успехи иммуногистохимии последних лет дали дополнительные маркеры мелкоклеточного рака легкого, такие, как нейронспецифическая енолаза, ДОПА-аминокарбоксилаза, наличие которых в опухоли свидетельствует о ее развитии из АПУД-системы и позволяет считать опухоль мелкоклеточным раком. Однако исследование распределения этих маркеров в мелкоклеточных новообразованиях легкого выявило группу опухолей, гистологически и по клиническому течению являющихся мелкоклеточным раком, однако, не имеющих маркеров АПУД-системы и с неясным гистогенезом. С другой стороны, методом электронной микроскопии была доказана нейроэндокринная природа ряда карциноидов. Анализ степени катаплазии карциноидов и мелкоклеточного рака также не позволяет в ряде случаев дифференцировать эти новообразования. По данным электронной и световой микроскопии, гистохимическим и иммуногистологическим свойствам некарциноидные опухоли, а именно мелкоклеточный рак и карциноиды, представляют гистогенетически сборную группу, что создает затруднения для идентификации этих новообразований. Вместе с тем, решение вопроса о гистологической принадлежности опухолей данного типа имеет принципиальное и решающее значение для выбора тактики лечения больного (объем оперативного вмешательства, необходимости адъювантной химио- или лучевой терапии), а также для оценки прогноза течения заболевания (в связи с различиям в агрессивности клинического течения).

Известны исследования, в которых достаточно полно описаны различные подтипы мелкоклеточного рака и карциноидов по иммуногистологическим свойствам, частоте наличия в них маркеров АПУД-системы, чувствительности к химио- и лучевой терапии, параметрам клеточного цикла, даны результаты сравнительного электронно-микроскопического анализа. Однако каждый из этих параметров и даже их совокупность не позволяет в ряде случаев отдифференцировать мелкоклеточный рак от карциноидов, и, что самое главное, предсказать степень агрессивности клинического течения каждого новообразования.

Известна гистологическая структура и особенности низко-, умеренно- и высокодифференцированных карциноидов в сравнении с мелкоклеточным раком и проанализирована диагностическая роль морфологических вариантов карциноидных опухолей в прогнозировании результатов чисто хирургического лечения. Из результатов работы следует, что морфологические особенности карциноидов не отражают потенциала их злокачественности даже в группе низкодифференцированных карцино- идов, так как по времени безрецидивного течения и вероятности появления метастазов, и степени злокачественности, даже анаплизированные карциноиды существенно различаются. Таким образом, на уровне световой микроскопии невозможно предсказать характер клинического течения карциноидов, и, в ряде случаев, провести дифференциальную диагностику между карциноидами и некарциноидными опухолями, в частности мелкоклеточным раком.

Целью изобретения является повышение точности дифференциального диагноза между этими нозологическими группами злокачественных новообразований легкого, так как в 10-15% случаев гистологи испытывают трудности в постановке окончательного прогноза.

Поставленная цель решается тем, что дополнительно к морфологическому исследованию операционного материала проводят клонирование опухолевых клеток, выделенных из опухолевой ткани легкого (ин витро в чашках Петри в двуслойном агаре) и при выявлении колоний диагностируют некарциноидную опухоль. Клоногенную способность опухолевых клеток оценивают при A.W.Hamburger et S. E.Salmon. Science, 1977, v.197, т.4302, р.461-463) в течение 14 дней в атмосфере воздуха, обогащенного 5% СО₂.

П р и м е р. Больной К. и.б. АЧ-1096, предварительный клинический диагноз периферический карциноид верхней доли левого легкого, что подтверждено исследованием бронхобиоптата.

Опухолевый материал получен в количестве 2,7 г (после операции), далее помещен в стерильную среду 199, содержащую 1% антибиотиков пенициллина и стрептомицина. Опухоль измельчена в холодном 0,025% трипсине до мелких (1 мм³) фрагментов. Полученная взвесь (10 мл) инкубирована в термостате при 37^оС в течение 15 мин; супернатант декантирован и осадок троекратно подвергнут короткой обработке (в течение 1-2 мин) в 0,025% растворе свежего трипсина. Выделенные клетки осаждены из объединенных супернатантов центрифугированием при 1000 об/мин и далее отмыты трижды в среде 199, с добавлением антибиотиков и 10% эмбриональной телячьей сыворотки. В камере Горяева с помощью трипанового синего подсчитано количество выделенных клеток и процент жизнеспособных. Суммарно получено 6,0 ^. 10⁶ опухолевых клеток; 75% из которых жизнеспособны. Проведено клонирование в двуслойном агаре in vitro по методу A.W.Hamburger et Salmon S.E. (Science, 1977, v.197, т 4302, р.461-463) при 37^оС в атмосфере воздуха обогащенного 5% СО₂. Учет выросших колоний производили на 14-й день с помощью микроскопа МББ-1 при суммарном увеличении 200. На 500 000 посаженных клеток (на одну ч.Петри) среднее количество колоний составило 70,0. Эффективность клонирования при этом составила 0,0014. По клоногенной способности исследования опухоль не карциноид. При плановом гистологическом исследовании малодифференцированная аденокарцинома.

П р и м е р 1. Больной У. и.б. АФ-5299, предоперационный гистологический диагноз по исследованию бронхобиоптата карциноид мелкоклеточный рак легкого Во время операции на исследование взят фрагмент опухоли объемом 1 см³. По описанному способу выделены опухолевые клетки и проведено клонирование. Выявлены колонии (ЭКО 0,024%). При плановом исследовании гистологических препаратов диагноз малодифференцированная аденокарцинома легкого.

П р и м е р 2. Больной М. и.б. АЧ-840; предоперационный гистологический диагноз карциноид мелкоклеточный рак легкого Во время операции на исследование взят фрагмент опухоли объемом 2 см³. По описанному способу оценена клоногенная способность опухолевых клеток, которая оказалась равной 0,0017% При плановом гистологическом исследовании диагноз мелкоклеточный рак легкого.

Способ подтверждается таблицей. Показано, что лишь в одном случае из 17 обнаружены единичные колонии при клонировании опухолевых клеток из новообразования, оцененного клиницистами как карциноид. Специфичность метода согласно данным таблицы составляет 94,1% чувствительность 75,0%
Технико-экономическая эффективность. Применение предлагаемого способа в качестве дополнительного для дифференциальной диагностики карциноидов легкого, с одной стороны, и мелкоклеточного рака, и аденокарцином с другой стороны, позволит своевременно выявить опухоли легкого с высокой степенью агрессивности, которые по гистологической картине неотличимы от типичных карциноидов, и, как следствие, выбрать правильную тактику лечения больных.

Использование: изобретение относится к медицине, в частности к онкологии. Сущность изобретения: проводят клонирование опухолевых клеток, выделенных из опухолевой ткани легкого /ин витро в чашках Петри в двухслойном агаре/ и при выявлений колоний диагностируют некарциноидную опухоль. Чувствительность предлагаемого метода 75%, специфичность 94%. Способ применим для выявления опухолей легкого с высокой степенью агрессивности, которые по гистологической картине не отличимы от карциноидов.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ НЕКАРЦИНОИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ ЛЕГКОГО ЧЕЛОВЕКА, включающий гистологическое исследование, отличающийся тем, что проводят клонирование опухолевых клеток в полужидком агаре и при выявлении клоногенных клеток диагностируют некарциноидную опухоль.