СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ РАКА "КЛАМИН" Российский патент 1995 года по МПК A61K35/80 

Изобретение относится к медицине, в частности касается профилактической онкологии.

В настоящее время в мировой онкологии существуют ряд средств для химиопрофилактики рака, которые находятся на различных стадиях экспериментального и клинического изучения, некоторые из них уже применяются в клинической практике в качестве онкопротекторов 1,4,5,7] Все существующие онкопрофилактические средства или недостаточно эффективны или могут при длительном применении вызывать токсические и побочные эффекты, что является существенными недостатками их использования для профилактики рака.

Народная медицина приписывает противоопухолевое действие фитопрепаратом из бурой водоросли ламинарии [2]
Известно использование в качестве онкопрофилактического средства β-каротина. β-Каротин натуральное вещество, содержащееся в различных продуктах растительного происхождения [11] В экспериментальных, эпидемиологических и клинических интервенционных исследованиях установлено, что β-каротин тормозит развитие злокачественных опухолей некоторых локализаций [3,6,8-12] Недостатками β-каротина как онкопротектора является его не очень высокая активность, а также побочный эффект при длительном применении в виде стойкого желто-оранжевого окрашивания кожи и склер [10]
Цель изобретения создание лекарственного средства, обладающего высокой онкопрофилактической активностью и отсутствием токсичности.

Достигается это тем, что средство для профилактики рака содержит концентрат ламинарии омыленный, а также физиологически приемлемые вспомогательные вещества и наполнители, используемые для приготовления лекарственной формы.

Концентрат ламинарии омыленный (ТУ 15-02445-84) получен на Архангельском водорослевом комбинате на бурой водоросли Laminaria saccharina (L.)Lamour. Концентрат ламинарии омыленный содержит ряд натуральных антиканцерогенных веществ: хлорофиллин натрия и другие производные хлорофилла, стерины, каротиноиды, n-3-полиненасыщенные жирные кислоты.

Предложенное средство для профилактики рака названо "Кламин".

Онкопрофилактическое средство "Кламин" может быть приготовлено в таблетированной форме.

Рецептура средства "Кламин" в виде таблетки: Компонент Ядро:
Концентрат лами- нарной омыленный 31,1±3,7
Крахмал карто- фельный 28,4±3,6
Микрокристалли- ческая целлюлоза 28,4±3,6 Глицерин 4,2±0,8 Твин-80 1,6±0,8
Кальций стеарино- вокислый 0,4±0,2
Оболочка:
Метилцеллюлоза марки МЦ-16 4,5±0,8 Касторовое масло 0,1±0,03
Поливинилпирро- лидон 0,6±0,2
Тропеолин О (хризолин) 0,1±0,03
Двуокись титана пигментная марки А 0,4±0,2
При изготовлении таблеток "Кламин" к смеси инертных наполнителей (крахмал и микрокристаллическая целлюлоза) добавляют глицерин и твин-80, прогревают при температуре 90^оС в течение 1-1,5 ч. После охлаждения к этой смеси добавляют концентрат ламинарии омыленный и после перемешивания и влажной грануляции сушат в аппарате "кипящего слоя". Гранулят смешивают с микрокристаллической целлюлозой, стериновокислым кальцием и прессуют ядра на таблеточном прессе. Ядра для обеспечения необходимых защитных и декоративных свойства покрывают оболочкой в установке псевдоожиженного слоя по следующей технологической схеме: первоначально на поверхность ядер таблеток наносят пленкообразующий состав суспензии двуокиси титана; суспензию наносят в теплом виде при постоянном перемешивании, затем 2%-ный раствор метилцеллюлозы для образования глянца на поверхности таблеток.

По физико-химическим свойствам средство "Кламин" соответствует требованиям, указанным в табл.1.

Онкопрофилактические свойства "Кламина" подтверждаются следующими примерами:
П р и м е р 1. У крыс-самок Вистар с начальным весом 220-230 г индуцировали опухоли молочной железы путем однократных интрамаммарных инъекций N-метил-N-нитрозомочевины (МНМ) в ткань всех 12 молочных желез, по 1 мг МНМ на железу. В контрольной группе животные дополнительным воздействиям не подвергались. В другой группе крысам давали перорально таблетки "Кламин", начиная через неделю после окончания введения МНМ и до конца опыта, в ежедневной дозе по действующему веществу 200 мг/кг веса тела. Через 12 месяцев животных забивали, оценивали частоту и множественность опухолей молочной железы, а также их гистологическую структуру.

Влияние "Кламина" в таблетированной форме на развитие опухолей молочной железы, индуцированных МНМ у крыс, представлено в табл.2.

Как видно из данных табл.2, "Кламин" снижает частоту индуцированных опухолей молочной железы на 26% а их множественность на 41%
П р и м е р 2. У крыс-самок с начальным весом 220-230 г индуцировали опухоли толстой и прямой кишки путем интраректальных инстилляций МНМ, по 4 мг МНМ в 0,5 мл физиологического раствора на крысу один раз в неделю в течение 4-х недель. В контрольной группе животных дополнительным воздействиям не подвергали. В другой группе крысам давали перорально таблетки "Кламин", начиная через неделю после окончания введения МНМ и до конца опыта, в ежедневной дозе по действующему веществу 200 мг/кг веса тела. Через 12 месяцев животных забивали, оценивали частоту и множественность опухолей толстой и прямой кишки, а также их гистологическую структуру.

Влияние "Кламина" в таблетированной форме на развитие опухолей толстой и прямой кишки, индуцированных МНМ у крыс, представлено в табл.3.

Как видно из данных табл.3, "Кламин" снижал частоту индуцированных опухолей толстой и прямой кишки на 18% а их множественность на 50%
П р и м е р 3. У крыс-самцов Вистар индуцировали опухоли пищевода путем спаивания с питьевой водой в течение 1 месяца N-метил-N-бензилнитрозамина (МБНА) в концентрации 10 мг/литр. В контрольной группе животных дополнительным воздействиям не подвергали. В другой группе крысам давали перорально таблетки "Кламин", в ежедневной дозе по действующему веществу 200 мг/кг веса тела. Через 12 месяцев животных забивали, оценивали частоту и множественность опухолей пищевода, а также их гистологическую структуру.

Влияние "Кламина" в таблетированной форме на развитие опухолей пищевода, индуцированных МБНА у крыс, представлено в табл.4.

Как видно из данных табл.4, "Кламин" снижает частоту индуцированных опухолей пищевода на 14% а их множественность на 56%
П р и м е р 4. У мышей-самок NMRI индуцировали опухоли шейки матки и влагалища по схеме двухстадийного канцерогенеза: инициация с помощью внутривлагалищных аппликаций 1%-ного раствора МНМ в физиологическом растворе на полиуретановых тампонах, 2 раза в неделю в течение 6 недель, и промоция с помощью внутривлагалищных инстилляций бензоилпероксида, по 5 мг на мышь в 0,2 мл диметилсульфоксида, 2 раза в неделю до конца опыта. В контрольной группе животных дополнительным воздействиям не подвергали. В другой группе мыши получали перорально таблетки "Кламин", начиная через 3 дня после окончания воздействия МНМ и до конца эксперимента, в ежедневной дозе по действующему веществу 200 мг/кг веса тела. Через 6 месяцев мышей забивали, оценивали частоту опухолей шейки матки и влагалища, а также их гистологическую структуру.

Влияние "Кламина" в таблетированной форме неа развитие опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных МНМ и бензоилпероксидом у мышей, представлено в табл.5.

Как видно из данных таблицы 5, "Кламин" снижает частоту опухолей шейки матки и влагалища на 30% причем за счет снижения частоты злокачественных опухолей данной локализации.

П р и м е р 5. У мышей-самок NMRI индуцировали опухоли кожи путем накожных аппликаций бензо(а)пирена (БП), 2 раза в неделю в течение 7 месяцев по 0,2 мл 0,05% раствора БП в ацетоне на мышь. В контрольной группе животных дополнительным воздействиям не подвергали. В другой группе мышам давали перорально таблетки "Кламин", начиная за 1 неделю до воздействия БП и до конца эксперимента, в ежедневной дозе по действующему веществу 200 мг/кг веса тела. Через 7 месяцев мышей забивали, оценивали частоту и множественность опухолей кожи, а также их гистологическую структуру.

Влияние "Кламина" в таблетированной форме на развитие опухолей кожи, индуцированных БП у мышей, представлено в табл.6.

Как видно из данных таблицы 6, "Кламин" снижает частоту индуцированных опухолей кожи на 29% а их множественность на 44%
Таким образом, "Кламин" при пероральном применении на моделях аутохтонных опухолей у животных эффективно тормозил развитие опухолей 5 различных локализаций: молочной железы, толстой и прямой кишки, пищевода, шейки матки и влагалища, кожи. Концентрат ламинарии "Кламин" может быть рекомендован в качестве средства для профилактики рака. В перерасчете на человека терапевтическая доза "Кламина" составляет 20 мг/кг веса тела в сутки. С целью профилактики рака для человека весом 70 кг следует рекомендовать длительные курсы приема "Кламина", по 2 таблетки 3 раза в день.

Онкопрофилактическое средство "Кламин" может быть приготовлено в виде мази для местного применения.

Рецептура средства "Кламин" в виде мази: Компонент
Концентрат лами- нарии омыленный 10,0±1,0
Экстракт ламинарии водный 1,0±0,2 Вазелиновое масло 10,0±1,0 Глицерин 6,0±0,4 Ланолин 2,0±0,3 Препарат ОС-20 2,0±0,3
Моноглицериды дистиллированные 2,0±0,3
Спирты высшие
жирные фракции С₁₆-С₂₀ 2,0±0,3 Стеариновая кислота 1,0±0,2 Нипагин 0,15±0,02 Нипазол 0,05±0,01 Альгинат натрия 2,2±0,3
Цитраль парфюмер- ный 0,2±0,03
Вода дистиллиро- ванная до 100
Содержание концентрата ламинарии омыленного в 9-11.

Содержание хлорофилла в 3,24-3,96
При изготовлении мази "Кламин" в реактор загружают 60 г концентрата ламинарии омыленного и 2,66 кг дистиллированной воды и перемешивают в течение 15 мин, затем при постоянном перемешивании загружают порциями рецептурные количества альгината натрия (84 г). Перемешивание продолжают периодически до полного растворения альгината натрия (приблизительно 3 ч, проверка визуально). Полученный коллоидный раствор фильтруют через капроновое сито N 23 в сборник. Отдельно в стеклянном стакане производят смешивание 2 г нипазола и 400 г масла растительного при перемешивании и температуре 70-80^оС (проверка визуально до полного растворения нипазола). В отдельном стеклянном стакане приготавливают сплав поверхностно активных веществ. В стеклянный стакан вносят 120 г ланолина, 80 г препарата ОС-20, 120 г моноглицеридов дистиллированных, 120 г спиртов синтетических высших фракции С₁₆-С₂₀, 60 г стеариновой кислоты. Смесь сплавляют при нагревании на водяной бане при температуре 70-80^оС до получения жидкой однородной прозрачной массы. Горячий сплав фильтруют через капроновое сито N 61 в стакан. В реактор с водяной рубашкой, нижним спуском и мешалкой загружают из сборника раствор альгината натрия с концентратом ламинарии омыленным. При перемешивании в течение 20 минут и температуре 70-80^оС в реактор загружают 6 г нипагина и 80 г глицерина, затем сплав поверхностно активных веществ, нагретый до 70-80^оС, и перемешивают в течение 10 минут. Затем загружают масляный раствор с нипазолом при температуре 70-80^оС, и в течение 30 минут при той же температуре проводят эмульгирование со скоростью от 6 до 8 с^-1. Затем в реактор вносят 40 г водного экстракта ламинарии и 12 г цитраля, эмульгирование продолжают 30 мин при той же температуре и с той же скоростью. После этого эмульсию перемешивают 1 ч при той же скорости, охлаждают до температуры 35-40^оС и фасуют.

Онкопрофилактические свойства мази "Кламин" подтверждаются следующими примерами:
П р и м е р 6. У мышей-самок NMRI индуцировали опухоли шейки матки и влагалища так же, как в примере 4. В опытной группе мышам, начиная через 3 ч после окончания введения МНМ и до конца эксперимента, производили внутривлагалищные аппликации мази "Кламин", 3 раза в неделю по 0,2 мл на аппликацию.

Влияние мази "Кламин" на развитие опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных МНМ и бензоилпероксидом у мышей, представлено в табл.7.

Как видно из данных табл.7, применение "Кламина" в форме мази снижает частоту опухолей шейки матки и влагалища на 38% причем как за счет снижения частоты злокачественных, так и доброкачественных опухолей данной локализации.

П р и м е р 7. У мышей-самок NMRI индуцировали опухоли кожи так же, как в примере 5. В опытной группе мышам наносили на кажу мазь "Кламин" в дозе 0,2 мл за 1 ч перед каждой аппликацией БП.

Влияние мази "Кламин" на развитие опухолей кожи, индуцированных БП у мышей, представлено в табл.8.

Как видно из данных табл.8, "Кламин" при применении в форме мази снижает частоту опухолей ножи на 18% а их множественность на 25%
Таким образом, "Кламин" при местном применении в форме мази эффективно тормозил развитие индуцированных химическими канцерогенами злокачественных и доброкачественных опухолей шейки матки и влагалища, а также кожи.

На тех же моделях развития опухолей проведены сравнительные опыты с β-каротином. Схема индукции опухолей у животных была такая же, как описано в примерах 1-4. Использована водорастворимая форма β-каротина Аквитон-10 (Санкт-Петербургский Государственный концерн "Биопрепарат"), который давался животным начиная после окончания воздействия канцерогенов и до конца опытов, с питьевой водой в концентрации 200 мг/л, что соответствует ежедневной дозе примерно 20 мг/кг веса тела. Данная доза выбрана как терапевтическая из литературных данных.

Влияние β-каротина на развитие опухолей молочной железы, индуцированных МНМ у крыс, представлено в табл.9.

Таким образом, β-каротин не тормозил развитие индуцированных опухолей молочной железы.

Влияние β-каротина на развитие опухолей толстой и прямой кишки, индуцированных МНМ у крым, представлено в табл.10.

Таким образом, β-каротин снижает частоту индуцированных опухолей толстой и прямой кишки на 16% а их множественность на 45%
Влияние β-каротина на развитие опухолей пищевода, индуцированных МБНА у крыс, представлено в табл.11.

Как видно из данных табл.11, β-каротин не тормозит развитие индуцированных опухолей пищевода.

Влияние β-каротина на развитие опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных МНМ и бензоилпероксидом у мышей, представлено в табл.12.

Как видно из данных табл.12 β-каротин снижает частоту индуцированных опухолей шейки матки и влагалища на 28%
Таким образом, препарат сравнения β-каротин при пероральном применении в опытах на аутохтонных моделях новообразований тормозил развитие опухолей толстой и прямой кишки, а также шейки матки и влагалища, но не проявлял антиканцерогенного эффекта на развитие опухолей молочной железы и пищевода.

Проведено также изучение влияния β-каротина при местном применении на канцерогенез шейки матки и влагалища. У мышей-самок SHR вызывали опухоли шейки матки и влагалища путем внутривлагалищных аппликаций 7,12-диметилбенз(а)антрацена (ДМБА, Sigma, USA), 25 мкг на аппликацию в 0,1% растворе триэтиленгликоля, 2 раза в неделю в течение 6 недель. После окончания введения ДМБА в контроле мышам проводили внутривлагалищные аппликации растительным маслом, а в опытной группе 2,5% раствором натурального β-каротина в растительном масле (Betatene, LTD, USA). Вещества вводили на полиуретановых тампонах 2 раза в неделю до конца эксперимента. Через 21 неделю от начала введения ДМБА мышей забивали, оценивали частоту, множественность и гистологическую структуру опухолей в органах-мишенях.

Влияние β-каротина на развитие опухолей шейки матки и влагалища, индуцированных ДМБА у мышей, представлено в табл.13.

Как видно из данных табл.13, β-каротин по сравнению с контролем снижал общую частоту и частоту злокачественных опухолей на 18% однако, эти различия были статистически недостоверными.

Таким образом, при местном применении β-каротин проявлял лишь статистически недостоверную тенденцию к торможению развития индуцированных опухолей шейки матки и влагалища.

В специально проведенных исследованиях по программам Фармкомитета Минздрава РФ выявлено, что "Кламин" не проявляет острую и хроническую токсичность, а также не имеет специфической токсичности: канцерогенности, мутагенности, тератогенности и эмбриотоксичности.

Использование предлагаемого средства "Кламин" для профилактики рака обеспечивает следующие преимущества:
более выраженная онкопрофилактическая активность;
более широкий спектр онкопрофилактической активности;
отсутствие побочных и токсических эффектов.

Изобретение относится к области медицины и, в частности касается профилактической онкологии. Средство "Кламин" содержит концентрат ламинарии омыленный в концентрации от 9 до 35% и физиологически приемлемые вспомогательные вещества и инертные наполнители. При длительном пероральном применении "Кламин" в таблетированной форме тормозит развитие злокачественных и доброкачественных опухолей молочной железы, толстой и прямой кишки, пищевода, шейки матки и влагалища, кожи индуцированных химическими канцерогенами у животных. При длительном местном применении "Кламин" в форме мази тормозит развитие злокачественных и доброкачественных опухолей шейки матки и влагалища, а также кожи, индуцированных химическими канцерогенами у животных. 13 табл.

Средство для профилактики рака на основе ламинарии, отличающееся тем, что оно содержит концентрат ламинарии омыленной в концентрации от 9 до 35% физиологически приемлемые вспомогательные вещества и инертные наполнители.