СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОРМОВОГО СРЕДСТВА Российский патент 1995 года по МПК A61K35/66 C12N1/20 

Изобретение относится к молочной промышленности и предназначено для производства кормовых средств, обладающих лечебно-профилактическими свойствами в отношении желудочно-кишечных заболеваний поросят, а также может быть использовано в ветеринарии.

Способ осуществляется следующим образом.

В стерилизованную питательную среду, приготовленную на основе гидролизованного протосубтилином обезжиренного молока, содержащего 1% лактозы, 1% кукурузного экстракта, 0,5% трехзамещенного лимоннокислого натрия, 0,05% сернокислого закисного железа и 0,075% агар-агара, вносят 7-10% культуры Bifidobacterium thermophilum B-I (штамм выделен от поросят), 0,001-0,05% культуры мезофильных молочнокислых стрептококков вида Lactococcus lactis subsp. diacetilactis и 0,001-0,005% Lactobacillus acidophilus ВКПМ В-2728. Совместное выращивание трех культур проводят при температуре (40 ± 1)^оС в течение 18-22 ч при рН, равном (6,7 ± 1) ед.

После накопления биомассы осуществляют ее отделение от культуральной среды на суперцентрифугах с фактором разделения не менее 15000. Отделенную биомассу смешивают в соотношении 1:1 с защитной средой, приготовленной на основе гидролизованного молока с добавлением следующих ингредиентов: сахарозы 100 ± 0,5 г/л, аммония лимоннокислого трехзамещенного 20 ± 0,1 г/л или натрия лимоннокислого трехзамещенного 50 ± 0,1 г/л в сочетании с аммонием хлористым 5,0 ± 0,1 г/л, кислоты аскорбиновой 5,0 ± 0,1 г/л, магния сернокислого 0,5 ± 0,01 г/л, апилака 0,7 ± 0,01 г/л.

Клеточную суспензию разливают тонким слоем по кюветам и замораживают до температуры минус 35-40^оС со скоростью 1-2^оС/мин и подвергают лиофильному высушиванию. Конечная температура сушки 35-40^оС, продолжительность сушки 20-22 ч. Высушенную биомассу растирают до порошкообразного состояния и подвергают расфасовке и укупорке.

В 1 г сухого препарата, полученного по предлагаемой технологии, содержится 3-7 млрд. жизнеспособных клеток Bb. thermophilum B-I, 1-7 млн. жизнеспособных клеток L.acidophilus ВКПМ В-2728 и 1-8 млрд. молочнокислых стрептококков. Бакпрепарат предназначен для приготовления ферментированных молочных кормовых средств для поросят, а также может быть использован в непосредственном виде в лечебно-профилактических целях.

Предлагаемый способ производства бактериального концентрата отличается от известных следующими приемами:
использованием в составе микрофлоры бактериального концентрата специального штамма бифидобактерий, выделенной от поросят Bifidobacterium thermophilum B-I, а также мутанта ацидофильной палочки, устойчивого к антибиотикам и хорошо приживающимся в кишечнике животных L. acidophilus ВКПМ В-2728;
совместным культивированием бифидобактерий с мезофильными молочнокислыми стрептококками Lactococcus lactis subsp. diacefilactis и ацидофильной палочкой при температуре (40 ± 1)^оС в течение 18-22 ч при дозе инокулирования бифидобактерии 7-10% молочнокислых стрептококков 0,001-0,05% и ацидофильной палочки 0,001-0,005%
П р и м е р 1. В 1000 мл водопроводной воды вносят 30 кг сухого обезжиренного молока распылительной сушки, после тщательного перемешивания смесь нагревают до 56^о. доводят рН с помощью 30%-ного раствора NaOH до 6,75, добавляют 150 г протосубтилина Г10Х активностью 20000 ед. и выдерживают при этих условиях 3 ч. После гидролиза в среду вносят 5 кг лактозы, 5 кг трехзамещенного лимоннокислого натрия, 20 л кукурузного экстракта, 0,5 кг сернокислого железа семиводного. Среду стерилизуют при 121^оС в течение 15 мин, затем охлаждают до 40^оС, после чего инокулируют 10% культуры B. thermophilum B-I, 0,001% культуры L. lactis subsp. diacetilactis 500₆ и 0,001% L. acidophilus. Культивирование микроорганизмов проводят при 40^оС и рН 6,8 в течение 20 ч в ферментере с автоматическим раскислением среды 30%-ным раствором NaOH.

В конце роста культуральную среду охлаждают до 14^оС и центрифугируют на суперцентрифуге при 15000 об/мин. Полученную биомассу смешивают в соотношении 1:1 с защитной средой, после этого суспензию клеток разливают по кюветам толщиной слоя 10 мм, замораживают до 40^оС со скоростью 2^оС/мин и сушат методом сублимации.

Количество жизнеспособных клеток бифидобактерий в 1 г сухого концентрата составляет 7 млрд. молочнокислых стрептококков 1 млрд. ацидофильной палочки 2 млн.

П р и м е р 2. В 1000 л водопроводной воды вносят 30 кг сухого обезжиренного молока распылительной сушки, после тщательного перемешивания смесь нагревают до 57^оС, доводят рН с помощью 30%-ного раствора NaOH до 6,75, добавляют 150 г протосубтилина Г 10Х активностью 20000 ед и выдерживают при этих условиях 3 ч. После гидролиза в среду вносят 5 кг лактозы, 5 кг трехзамещенного лимоннокислого натрия, 20 л кукурузного экстракта, 0,5 кг сернокислого железа семиводного. Среду стерилизуют при 121^оС в течение 15 мин, затем охлаждают до 39^оС, после чего инокулируют 10% культуры B. thermophilum B-I, 0,001% культуры L. lactis subsp. diacetilactis 515₂ и 0,005% культуры L. acidocphilus. Выращивание биомассы проводят при температуре 39^оС и рН 6,7 в течение 18 ч в ферментере с автоматическим раскислением среды 30%-ным раствором NaOH. В конце роста культуральную среду охлаждают до 14^оС и центрифугируют на суперцентрифуге при 15000 об/мин. Смешивание биомассы с защитной средой, замораживание и сушку культур проводят так же, как и в примере 1. Количество жизнеспособных клеток бифидобактерий в 1 г сухого препарата составляет 3 млрд. молочнокислых стрептококков 5 млн. ацидофильной палочки 3,5 млн.

П р и м е р 3. В 1000 л водопроводной воды вносят 30 кг сухого обезжиренного молока распылительной сушки, после тщательного перемешивания смесь нагревают до 57^оС, доводят рН с помощью 30%-ного раствора NaOH до 6,8, добавляют 150 г протосубтилина Г10Х активностью 20000 ед. и выдерживают при этих условиях 3 ч. После гидролиза в среду вносят 5 кг лактозы, 5 кг трехзамещенного лимоннокислого натрия, 20 л кукурузного экстракта, 0,5 кг сернокислого железа семиводного. Среду стерилизуют при 121^оС в течение 15 мин, затем охлаждают до 39^оС, после чего инокулируют 8% культуры B. thermophilum B-I, 0,002% культуры L. lactis subsp. diacetilactis 500₆ и 0,005% культуры L. acidophilus. Выращивание биомассы проводят при температуре 39^оС и рН 6,7 в течение 21 ч в ферментере с автоматическим раскислением среды 30%-ным раствором NaOH. В конце роста культурную среду охлаждают до 14^оС и центрифугируют на суперцентрифуге при 15000 об/мин. Смешивание биомассы с защитной средой, замораживание и сушку культур проводят так же, как и в примере 1.

Количество жизнеспособных клеток бифидобактерий в 1 г сухого концентрата составляет 4 млрд. молочнокислых стрептококков 2,5 млрд. ацидофильной палочки 7 млн.

П р и м е р 4. В 1000 л водопроводной воды вносят 30 кг сухого обезжиренного молока распылительной сушки, после тщательного перемешивания смесь нагревают до 57^оС, доводят до рН с помощью 30%-ного раствора NaOH до 6,7, добавляют 150 г протосубтилина Г10,Х активностью 20000 ед. и выдерживают при этих условиях 3 ч. После гидролиза в среду вносят 5 кг лактозы, 5 кг трехзамещенного лимоннокислого натрия, 20 л кукурузного экстракта, 0,5 кг сернокислого железа семиводного. Среду стерилизуют при 121^оС в течение 15 мин, затем охлаждают до 40^оС, после чего инокулируют 10% культуры В. thermophilum BI, 0,003% культуры L. lactis subsp. diacetilactis 586₄ и 0,005% L.acidophilus.

Выращивание биомассы проводят при 40^оС и рН 6,7 в течение 22 ч в ферментере с автоматическим раскислением среды 30%-ным раствором NaOH. В конце роста культуральную среду охлаждают до 14^оС и центрифугируют на суперцентрифуге при 15000 об/мин. Смешивание биомассы с защитной средой, замораживание и сушку культур проводят так же, как и в примере 1. Количество жизнеспособных клеток бифидобактерий в 1 г сухого концентрата составляет 7 млрд. молочнокислых стрептококков 8 млpд. ацидофильной палочки 4,5 млн.

П р и м е р 5. В 1000 л водопроводной воды вносят 30 кг сухого обезжиренного молока распылительной сушки, после тщательного перемешивания смесь нагревают до 56^оС, доводят рН с помощью 30%-ного NaOH до 6,8, добавляют 150 г протосубтилина Г10Х активностью 20000 ед. и выдерживают при этих условиях 3 ч. После гидролиза в среду вносят 5 кг лактозы, 5 кг трехзамещенного лимоннокислого натрия, 20 л кукурузного экстракта, 0,5 кг сернокислого железа семиводного. Среду стерилизуют при 121^оС в течение 15 мин, затем охлаждают до 39^оС, после чего инокулируют 9% культуры В.thermophilum BI, 0,001% культуры L. lactis subsp. diacefilactis 592₃, 0,002% L. acidophilus. Выращивание биомассы проводят при температуре 39^оС и рН 6,8 в течение 22 ч в ферментере с автоматическим раскислением среды 30% -ным раствором NaOH. В конце роста культуральную среду охлаждают до 14^оС и центрифугируют на супеpцентрифуге при 15000 об/мин. Смешивание биомассы с защитной средой, замораживание и сушку культур проводят так же, как и в примере 1.

Количество жизнеспособных клеток бифидобактерий в 1 г сухого концентрата составляет 5 млрд. молочнокислых стрептококков -4 млрд. ацидофильной палочки 3 млн.

Использование: молочная промышленность и предназначено для производства кормовых средств, обладающих лечебно-профилактическими свойствами в отношении желудочно-кишечных заболеваний поросят, а также может быть использовано в ветеринарии. Сущность изобретения: в составе микрофлоры бактериального препарата используют штамм Bitidobacterium thermophilum B1, относящийся к облигатным представителям микрофлоры желудочно-кишечного тракта поросят, который выращивают совместно с мезофильными молочнокислыми стрептококками и ацидофильной палочкой Zactobacillus acidophilus ВКПМ В-2728 при температуре 40 ± 1 в течение 18 - 22 ч при посевных дозах бифидобактерий 7 - 10%, мезофильных молочнокислых стрептококков 0,001 - 0,005%, ацидофильной палочки 0,001 - 0,005%.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА КОРМОВОГО СРЕДСТВА, предусматривающий приготовление питательной среды, внесение в нее посевного материала бифидобактерий и ацидофильной палочки, совместное культивирование, отделение накопившейся биомассы, смешивание ее с защитной средой и сублимационную сушку, отличающийся тем, что, с целью повышения лечебно-профилактических свойств и качества вырабатываемого средства, осуществляют совместное культивирование бифидобактерий, ацидофильной палочки и мезофильного молочнокислого стрептококка Streptococcus diacetylactis, из бифидобактерий используют Bifidobacterium thermophilum B_I, выделенный из желудочного тракта поросят, из ацидофильной палочки используют штамм Lactobacillus acidophilus ВКПМ В-2728, процесс ведут при 39 41^oС в течение 18 22 ч при посевных дозах бифидобактерий 7 10 мас. ацидофильной палочки 0,001 0,005 мас. и мезофильных молочнокислых стрептококков 0,001 - 0,05 мас.