ВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА ПТИЦ И СПОСОБ ЕЕ ПРИМЕНЕНИЯ Российский патент 1995 года по МПК A61K39/17 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к вакцине против болезни Ньюкасла и способу ее применения.

Известна вакцина против болезни Ньюкасла, изготовленная на основе штамма Paramikovirus a-1 "Bop-74 ВГНКИ" [1]
Наиболее близкой по составу к предлагаемой является вакцина против ньюкаслкской болезни птиц, содержащая экстраэмбриональную жидкость из штамма Ла-Сота вируса болезни Ньюкасла и защитную среду из обезжиренного молока или пептона [2]
Известен способ профилактики ньюккаслской болезни птиц, который заключается в интраназальном, экстраэмбриональном или аэрозольном введении вакцины против болезни Ньюкасла птиц из штамма Ла-Сота [3]
П р и м е р 1. Для получения вакцины в качестве посевного вируса ньюкаслской болезни используют штамм Ла-Сота, которым заражают хорошо развитый 9-10-дневные эмбрионы. Эмбрионы инкубируют 96-120 ч при 37-38^оС и относительной влажности 60-70% Одновременно производят закладку незараженных эмбрионов из той же партии для контроля на присутствие гемадсорбирующих вирусов. Просмотр зараженных эмбрионов проводят один раз в сутки. Все эмбрионы, погибшие в период до 96 ч выбраковывают. Для изготовления серии вакцины используют только живые эмбрионы, предварительно охлажденные при 4^оС не менее 16 ч.

У эмбрионов отбирают экстраэмбриональную жидкость, которую очищают и концентрируют методом ультрафильтрации на полых волокнах или ядерных мембранах. При этом вирусосодержащую суспензию концентрируют в 8-12 раз по объему. Концентрат контролируют на контаминацию бактериальной и грибковой микрофлорой, определяют инфекционную и гемагглютинирующую активности, подтверждают идентичность вакцинного штамма вируса и определяют содержание массовой доли белка.

Для изготовления вакцины используют стерильный вирусосодержащий материал с титром гемагглютинирующей активности не ниже 2049-4096 ГАЕ/мл, содержанием белка не выше 3-5 мг/см³ и инфекционной активностью 8,1-11,0 lgЭИД₅₀/мл, который смешивают в соотношении 1:(1-10) со стабилизатором, состоящим из пептона, лактозы, двухзамещенного фосфата натрия и трилона Б. При этом используют пептон, содержащий, мас.

Высокомолекулярные пептиды (30000-80000g) 10-15
Среднемолекулярные пептиды (5000-20000g) 68-70
Низкмолекулярные пептиды (5000g) Остальное
Приготовление стабилизатора:
50 г пептона смешивают с 50 г лактозы с 12,775 г двухзамещенного фосфата натрия и 3,32 г трилона Б. Полученную вакцину фасуют в ампулы по 2 мл и лиофильно высушивают.

Перед употреблением вакцину восстанавливают до первоначального объема восстановителем, содержащим следующие вещества, г: Пептон 5 Трилон Б 0,23 Натрий двузамещенный 9,6 Калий однозамещенный 1,74 Твин-80 0,03-0,05
После чего определяют количество доз во флаконе. Одна прививная назальная доза содержит 5 ˙ 10⁶ ЭИД₅₀.

Таким образом, полученная вакцина имеет следующий состав: Пептон 50-55 г Лактоза 45-55 г
Двузамещенный фосфат натрия 22,37-27 г
Однозамещенный фосфат калия 1,74-2,0 г Трилон Б 2,65-5,00 г Твин-80 0,3-0,5 г
Вируссодержащий ма-
териал вируса болезни
Ньюкасла штамм Ла-Сота
с титром гемагглютиниру-
ющей активности не ниже
2048-4096 ГАЕ/мл, содер-
жащем белка не выше 3-5
мг/см и инфекционной
активностью 8,1-11, lgЭДИ₅₀/мл 100-500 мл Вода До 1л
Введение осуществляют интраназально, перорально и аэрозольно. Полученная вакцина устойчива при хранении (см. таблицу).

Для проверки безвредности вакцину вводят 10 цыплятам по 10 доз интраназально. Срок наблюдения, за цыплятами 14 суток. Все 10 цыплят остались живыми в течение 14 суток.

П р и м е р 2. Применение вакцины. Перед проведением вакцинации определяют титр материнских антител в РТГА у 10% цыплят. Титр материнских антител не должен превышать lg2 2(1:4).

Цыплят делят на три группы по 10 голов в каждой. 3 группу цыплят содержат отдельно (контрольная невакцинированная группа).

Цыплятам первой группы вводят назально одну дозу вакцины, цыплятам второй группы вводят назально 1/10 дозы вакцины. Срок наблюдения за вакцинированной птицей 14 суток. Спустя 14 суток после вакцинации берут пробы крови от вакцинированных и невакцинированных птиц.

Сыворотки всех цыплят, вакцинированных 1 дозой интраназально, имеют титр антигемагглютининов не ниже lg2 4(1:16).

Сыворотки всех цыплят, вакцинированных 1/10 дозы интраназально имеют титр антигемагглютининов не ниже lg2 3(1:8).

Сыворотки невакцинированных цыплят отрицательные или имеют титр антигемагглютининов не выше lg2 2(1:4).

Контрольное заражение вакцинированных цыплят вирулентным вирусом болезни Ньюкасла штамм "Т". Цыплят, ранее вакцинированных интраназально (вторая и третья группы), и контрольной невакцинированной группы заражают внутримышечно штаммом "Т" в дозе 10000 ЛД 50/0,2 см³. Срок наблюдения за зараженными цыплятами 10 суток. Цыплята, вакцинированные интраназально 1 дозой, выживают; из 10 цыплят, вакцинированных интраназально 1/10 дозы погибли двое, все контрольные цыплята погибли.

При введении вакцины выпаиванием цыплят делят на три группы. Выпаивание проводят два дня подряд утром перед кормлением. Цыплятам первой группы вводят одну дозу (5 ˙ 10⁶ ЭИД₅₀), растворенную в 10 мл. Цыплятам второй группы вводят 1/10 дозы, растворенную в 10 мл. Третья группа контрольная. Спустя 14 суток определяют уровень антител. У цыплят второй группы он не ниже 1:16. Контрольное заражение проводят вирулентным штаммом "Т" вируса болезни Ньюкасла в дозе 10000 ЛД₅₀/0,2 см³. Из второй группы 1 цыпленок пал. Все цыплята контрольной группы погибли.

При аэрозольной вакцинации цыплят делят на 2 группы по 15 голов. В первой группе проводят аэрозольную вакцинацию дозой 600 ЭИД₅₀. Вторая группа контрольная. Через 2 недели определяют титр анти ГА в сыворотках крови цыплят. Средний титр составляет 1:(64-128). После контрольного заражения все цыплята, вакцинированные аэрозольно, остались живы, контрольные погибли.

Использование: ветеринария вирусология. Вакцина содержит г: пептон 50 - 55, лактоза 45 - 55, двузамещенный фосфат натрия 22,37 - 27, однозамещенный фосфат калия 1, 74 - 2,0, трилон Б 3,65 - 5,00, твин-80 0,3 - 0,5, вируссодержащий материал вируса болезни Ньюкасла штамм Ла-Сота с титром гемагглютинирующей активности не ниже 2048 - 4096 ГАЕ/мл, содержанием белка не выше 3 - 5 мг/см³ и инфекционной активностью 8,1 - 11,0 lg ЭИД 50 мл 100 - 500 мл. Вакцина вводится птице интраназально, энтерально или аэрозольно. 2 с. и 1 з.п. ф-лы, 1 табл.

1. Вакцина против болезни Ньюкасла птиц, содержащая вируссодержащий материал из штамма Ла-Сота вируса болезни Ньюкасла и пептон отличающаяся тем, что она дополнительно содержит лактозу, двузамещенный фосфат натрия, однозамещенный фосфат калия, трилон Б и твин-80 при следующих соотношениях, г:
Пептон 50 -55
Лактоза 45 55
Двузамещенный фосфат натрия 22,37 27,0
Однозамещенный фосфат калия 1,74 2,0
Трилон Б 3,65 5,0
Твин-80 0,3 0,5
Вируссодержащий материал вируса болезни Ньюкасла штамм Ла Сота с титром гемагглютинирующей активности не ниже 2048-4096 ГАЕ/мл, содержанием белка не выше 3-5 мг/см и инфекционной активностью 8,1 11, lg ЭИД 50 мл, мл 100 - 500
Вода До 1 л
2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что из пептидов она содержит пептид следующего состава, мас.

Высокомолекулярные пептиды (30000 80000g) 10 15
Среднемолекулярные пептиды (50000 30000g) 68 70
Низкомолекулярные пептиды (5000g) Остальное
3. Способ применения вакцины против болезни Ньюкасла птиц, включающий введение птице вакцины против болезни Ньюкасла на основании штамма Ла-Сота, отличающийся тем, что используют вакцину следующего состава, г:
Пептон 50 55
Лактоза 45 55
Двузамещенный фосфат натрия 22,37 27,0
Однозамещенный фосфат калия 1,74 2,0
Трилон Б 3,65 5,00
Твин-80 0,3 0,5
Вируссодержащий материал вируса болезни Ньюкасла штамм Ла-Сота с титром гемагглютинирующей активности не ниже 2048 4096 ГАЕ/мл, содержанием белка не выше 3 5 мг/см³ и инфекционной активностью 8,1 11,0, lg ЭИД 50 мл, мл 100 500
Вода До 1 л
которая в одной начальной дозе содержит 5 · 10⁶ ЭИД₅₀.