ВАКЦИНА ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ Российский патент 2000 года по МПК A61K39/17 C12N7/00 

Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии вирусных ветеринарных препаратов, в частности к вакцине против ньюкаслской болезни, предназначенной для пероральной иммунизации цыплят.

Известна вакцина против ньюкаслской болезни, содержащая антиген из вакцинного штамма, сахарозу или лактозу, казеин или обезжиренное молоко, левомизол, сульфат магния и дитиотреитол в эффективной концентрации. Вакцину используют для пероральной иммунизации (1).

Недостатком данной вакцины является ее многокомпонентность, что, во многом, усложняет технологический процесс. Кроме того, она характеризуется значительной потерей активности при изготовлении. Последнее обусловлено наличием фазовых переходов в среде высушивания при сублимационном способе ее получения. Одновременно многостадийность производства, использование сложного оборудования и дефицитного сырья приводит к ухудшению технико-экономических показателей.

Известна также вакцина против ньюкаслской болезни, включающая экстраэмбриональную жидкость куриных эмбрионов, содержащую культуру вакцинного штамма "Ла-Сота", сахарозу, пептон, смолу КБ-4П-2 и аэросил АМ-1-300. Вакцину используют для аэрозольной иммунизации птицы (2).

Недостатком данной вакцины является невозможность ее использования для пероральной иммунизации вследствие ее низкой эффективности ввиду инактивирующего действия желудочного сока на антиген. Кроме того, значительное содержание (9% по массе) в составе вакцины аэросила является экологически небезопасным для обслуживающего персонала.

Целью изобретения является разработка высокоэффективной вакцины против ньюкаслской болезни для пероральной иммунизации птицы, полученной способом контактного обезвоживания.

Указанная цель достигается при следующем соотношении компонентов, мас.%.

Экстраэмбриональная жидкость куриных эмбрионов, содержащая культуру вакцинного штамма "Ла-Сота" - 12,5-15,0
сахароза - 4,5-6,0
пептон - 3,0-4,0
казеин - 0,7-2,0
смола КБ-4П-2 - 72,0-77,3
аэросил АМ-1-300 - 1,0-2,0
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Для изготовления вакцины используют экстраэмбриональную жидкость куриных эмбрионов, инфицированных штаммом "Ла-Сота" вируса НБ в возрасте 9-10 дней. В аппарат типа РТ-1 помещают без предварительной обработки 12,5-15,0%, по массе, полученного антигена, в котором растворяют по массе 4,5-6,0% сахарозы, 3,0- 4,0% пептона и 0,7-2,0% казеина. Смешение компонентов в аппарате проводят при 8000 об/мин в течение 1,5-2,0 минут. Для обезвоживания вируссодержащую суспензию смешивают с ионнообменной смолой КБ-4П-2, на поверхность которой нанесены частицы аэросила AM-1-300, взятых по массе в общем количестве 73,0-79,3%. Смешение указанных компонентов проводят в шаровом барабане при скорости его вращения на обкаточном станке 60-90 об/мин в течение 5-7 мин.

Готовят 3 состава предложенной вакцины, приведенных в таблице 1.

Готовая вакцина представляет собой сыпучий порошок серого цвета. Вакцину расфасовывают во флаконы объемом 500 см³ по 200 г (~800 доз) или в полиэтиленовые пакеты по 200 г (~800 доз). Флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают металлическими колпачками, а полиэтиленовые пакеты герметично запаивают. Срок годности - 12 мес при условии ее хранения в темном и сухом месте при температуре не выше плюс 4-6^oC.

Пример 2.

Изучают биологическую активность 3 составов вакцины "Оровак НБ" из вакцинного штамма "Ла-Сота", приготовленных по примеру 1 и хранившихся в течение 3 и 8 мес при температуре минус 8-12^oC, 2-6^oC и 18 - 20^oC. Биологическую активность определяют титрованием на 10-дневных РЭК и выражают в lg ЭИД 50 г^-1. Специфичность ответа РЭК определяют постановкой реакции гемагглютинации. В качестве контроля испытывают известную вакцину с содержанием антигена из штамма "Ла-Сота" в количестве 15% от объема.

Результаты по изучению биологической активности приготовленных составов предложенной и известной вакцин приведены в таблице 2.

Данные, приведенные в таблице 2, говорят о том, что контактным обезвоживанием с использованием вакцинного штамма "Ла-Сота" получены 4 состава сухой вакцины с биологической активностью от 9,0 до 9,2 lg ЭИД 50 г^-1.

Хранение 3 составов вакцины в течение 3 и 8 мес при минус 8-12^oC и 2-6^oC практически не приводит к инактивации вируса в вакцинном препарате. Хранение вакцины при комнатной температуре в течение 8 мес вызывает незначительное снижение активности вируса на 0,5-0,7 lg ЭИД 50 г^-1. Наилучший стабилизирующий эффект отмечен у образца N 3 в условиях температур минус 8-12^oC и 2-6^oC. Так, хранение при 18-20^oC в течение 8 мес привело к снижению его активности всего лишь на 1,0 lg.

Введение в состав предложенной вакцины казеина и уменьшение количества вводимого аэросила существенно не сказывается на биологической активности.

Пример 3.

Изучают устойчивость вируса НБ различных штаммов как в процессе приготовления, так и хранения при температуре 2-6^oC в течение 1-12 мес.

В работе используют вирус ньюкаслской болезни (ВНБ) производственных штаммов "А(в)ВН", "V-4", "Клон-30", "Бор-74 ВГНКИ" и "Ла-Сота". Сухие препараты готовят контактным обезвоживанием как описано в примере 1, используя композиционный состав 3.

Стабильность биологической активности вируса вакцинных штаммов в составе сухих препаратов определяют также по термотесту - по величине снижения титра инфекционности вируса в процессе хранения при температуре хранения 37-38^oC в течение 7 суток.

Результаты исследований приведены в таблицах 3, 4.

Приведенные в таблице 3 результаты исследований свидетельствуют о том, что практически все штаммы ВНБ хорошо переносят контактное обезвоживание. Активность готовых препаратов колеблется от 8,3 (шт. "А(в)ВН"") до 9,3 lg ЭИД 50 см^3-1 (г^-1) (шт. "Ла-Сота"). Разница в величине титров готовых препаратов обусловлена не чувствительностью вируса вакцинного штамма, а титром исходных вируссодержащих суспензий. Хранение препаратов при 2-6^oC в течение 12 мес показывает, что наиболее устойчивыми к такой температуре хранения оказались штаммы "V-4", "Клон-30", "Ла-Сота". Биологическая активность этих препаратов за 5 мес хранения при 2-6^oC остается, практически, на исходном уровне. В то же время титр в препаратах штаммов "А(в)ВН" и "Бор-74 ВГНКИ" за этот период снижается на 1,03 и 0,6 lg соответственно.

Как видно из данных таблицы, наиболее чувствительным к термотесту оказались штаммы "Клон-30" и "Бор-74 ВГНКИ": их титры за 7 суток хранения при температуре 36-38^oC снизились на 0,48 и 1,0 lg соответственно. Вирус вакцины штамма "Ла-Сота" в контактном препарате оказался высокоустойчивым к такому режиму хранения. Титр его в таких условиях хранения практически не изменился.

Пример 4.

Исследуют безвредность пероральной формы 3 составов вакцины "Оровак НБ", приготовленных по примеру 1 из штамма "Ла-Сота" путем скармливания их цыплятам 20-270-дневного возраста препарата в 10-кратной дозе. Цыплят предварительно выдерживают на голодной диете в течение 8 часов. Устанавливают отсутствие признаков токсикоза и остаточной вирулентности у всех составов вакцины. Клиническое состояние подопытных цыплят не отличалось от контрольных - интактных.

Пример 5.

Оценку иммуногенности состава N 2 вакцины "Оровак-НБ", приготовленного по примеру 1 из штамма "Ла-Сота", хранившегося при температуре 2-6^oC в течение 3 мес, с биологической активностью 3,0х10^8,0 г^-1 проводят на 100 цыплятах- бройлерах 14-дневного возраста. Сухой препарат вакцины смешивают с комбикормом из расчета 150-350 мг/гол с 20 г комбикорма. Дозу вакцины скармливают в течение 2 суток один раз в день (утром, из расчета 10 г корма на 1 гол). Эффективность иммунизации контролируют через 14 и 28 дней по титрам антител, выявляемым в РТГА и по результатам контрольного заражения привитых цыплят культурой вирулентного штамма "Т-53" вируса НБ в дозе 3,0 lg ЛД50.

Результаты по иммунизации цыплят-бройлеров составом N 2 вакцины "Оровак-НБ" представлены в таблице 5.

Данные таблицы 5 свидетельствуют, что пероральная иммунизация составом N 2 сухой вакцины "Оровак-НБ" в дозе 250-300 мг/гол обеспечивает надежную защиту цыплят от контрольного заражения. Наиболее целесообразным для применения является доза вакцины 250 мг/гол.

Пример 6.

Проводят оценку иммуногенности составов N 1 и 3 вакцины "Оровак-НБ", приготовленных по примеру 1. Эксперимент проводят аналогично примеру 4, на 40 цыплятах-бройлерах 14-дневного возраста по 20 голов в каждой опытной группе с профилактической целью против ньюкаслской болезни. Для иммунизации птицы используют дозу вакцины 0,25 г/гол. На 28 сутки у цыплят обеих групп при серологическом исследовании устанавливают титры антител в РТГА 4,0 log2, а также их абсолютную устойчивость к контрольному заражению культурой вирулентного штамма НБ "Т-53".

Пример 7.

Проводят изучение иммуногенности состава N 3 вакцины "Оровак-НБ", приготовленного по примеру 1 из штамма "Ла-Сота", хранившегося в течение 4 мес при температуре 2-6^oC, с биологической активностью 8,47 lg ЭИД 50 г^-1. Испытания проводят в благополучном по ньюкаслской болезни птицехозяйстве на поголовье 75,5 тыс голов. За 3-4 дня до вакцинации и в течение 5 дней после нее исключают дачу птице антибиотиков, сульфаниламидных и нитрофурановых препаратов. Прививают только клинически здоровую птицу. В птицехозяйстве вакцину "Оровак-НБ" равномерно смешивают с комбикормом в существующих смесителях. Вакцину скармливают птице 20-270-дневного возраста два дня подряд в утреннее кормление из расчета 1 доза - 0,25 и 0,5 г/гол. Вакцину "Оровак-НБ" применяют 2- и 3-кратно, а также однократно на фоне применения вакцины из штамма "Бор-74 ВГНКИ". Перед иммунизацией цыплят не кормят и не поят в течение 12 часов. Вакцину скармливают цыплятам, следя за равномерным распределением корма в кормушках и его поедаемостью. После вакцинации птицу кормят и поят как обычно. Результаты иммунизации контролируют на 7-10, 14-16, 60-70, 120-130, 270-300 сутки, исследуя в РТГА 25-40 проб сывороток крови от цыплят каждой группы. Полученные результаты представлены в таблице 6.

Примечание: птица привита "Оровак-НБ" после двух прививок вакциной против НБ из штамма "Бор-74" в возрасте 22 и 120 дней.

Как видно из таблицы 6, иммунный ответ цыплят, которым скармливали вакцину в дозе 250 г /тыс. гол, формируется через 14-16 дней при среднем геометрическом титре 4,9 log2 и напряженности иммунитета 66,6% и достигает оптимального значения через 2 недели после реиммунизации (91,9% и 6,9 log2). Введение вакцины цыплятам в возрасте 120-130 дней приводит к незначительному увеличению среднегеометрического титра антител до 7,2-7,8 log2 и повышает эффективность иммунизации до 100%. К концу срока эксплуатации птицы (18 мес) уровень антител снижается до 3,6 log2 при степени защиты 79,2%. Увеличение дозы вакцины в два раза достоверного улучшения показателей не вызывает. Применение "Оровак-НБ" на фоне 2-х кратной интраназальной иммунизации птиц вакциной "Бор-74 ВГНКИ" также дает достаточную степень защиты и формирование напряженного иммунитета, сохраняющегося до конца срока использования поголовья. У цыплят контрольной группы, привитой вакциной "Бор-74", динамика формирования иммунитета не отличается от "Оровак-НБ", хотя абсолютные показатели колеблются в пределах 1,0-2,0 log2.

Пример 8.

На птицефабрике промышленного стада цыплят на поголовье в 149,2 тыс., размещенных в 2-х корпусах, проводят испытание состава N3 вакцины "Оровак-НБ", приготовленного по примеру 1. Вакцину "Оровак-НБ" в смеси с комбикормом задают двукратно в возрасте 36-44 дня и 120 дней в дозе 0,25 г/гол после предварительного интраназального введения вакцины из штамма "Бор-74 ВГНКИ" в возрасте 13-22 дня по общепринятой методике. Контрольных цыплят прививают интраназально вакциной из штамма "Бор-74 ВГНКИ" в соответствии с наставлением по ее применению. Результаты иммунизации контролируют на 14, 21 и 28 сутки, исследуя в РТГА 25-30 проб сыворотки крови от цыплят каждой опытной группы. Эффективность комплексного применения состава N 3 вакцины "Оровак-НБ" и вакцины из штамма "Бор-74 ВГНКИ" представлены в таблице 7.

Как следует из таблицы 7, иммунный ответ цыплят на введение вакцины "Оровак-НБ" достигает максимума через 2-3 недели после прививки. Уровень антител при этом колеблется в пределах 4,92-5,12 log2 при эффективности иммунизации 92-100%. Через 3 недели после вакцинации в 120-дневном возрасте эффективность иммунизации также, как и титры антигемагглютининов, несколько снижаются, но не достигают запредельного уровня (84-86% и 4,44-4,9 log2 соответственно). Аналогичная закономерность наблюдаются и у цыплят контрольной группы, вакцинированных традиционным интраназальным методом, которые, практически, нивелируются к 14 дню после второй прививки.

Вакцина "Оровак-НБ" из штамма "Ла-Сота", изготовленная по технологии методом контактного обезвоживания для перорального применения, безвредна для птицы, не вызывает поствакцинальных реакций, задержку начала яйцекладки и динамику нарастания продуктивности кур; высокоиммуногенна (защита от вируса НБ на 80-100%) и экологически безопасна для обслуживающего персонала. Комплексное использование для иммунизации вакцины "Оровак-НБ" с другими вакцинами позволяет сократить затраты и повысить эффективность мероприятий по борьбе с ньюкаслской болезнью.

Изобретение предназначено для пероральной иммунизации птиц против болезни Ньюкасла. Вакцина "ОРОВАК-НБ" включает экстраэмбриональную жидкость куриных эмбрионов, содержащую культуру вакцинного штамма "Ла-Сота". Вакцина также содержит сахарозу, пептон, казеин, смолу КБ-4П-2, аэросил AM-1-300 и дополнительно казеин при определенном соотношении компонентов. Вакцину получают методом контактного обезвоживания. Вакцину применяют птице 20-270- дневного возраста перорально с кормом в дозе 0,25 г/гол. Вакцина безвредна, ареактогенна, высокоэффективна для птицы (защита от вируса НБ на 80-100%), а также экологически безопасна для обслуживающего персонала. Изобретение повышает эффективность профилактики болезни Ньюкасла. 7 табл.

Вакцина против ньюкаслской болезни, включающая экстраэмбриональную жидкость куриных эмбрионов, содержащую культуру вакцинного штамма "Ла-Сота", сахарозу, пептон, смолу КБ-4П-2 и аэросил АМ-1-300, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит казеин при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Экстраэмбриональная жидкость куриных эмбрионов, содержащая культуру вакцинного штамма "Ла-Сота" - 12,5 - 15,0
Сахароза - 4,5 - 6,0
Пептон - 3,0 - 4,0
Казеин - 0,7 - 2,0
Смола КБ-4П-2 - 72,0 - 77,3
Аэросил АМ-1-300 - 1,0 - 2,0