СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ И ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА ПТИЦ Российский патент 1998 года по МПК A61K39/17 A61K39/245 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к производству вакцин против ньюкаслской болезни (НБ) и инфекционного ларинготрахеита птиц (ИЛТ).

В настоящее время известна комбинированная живая вакцина фирмы TAD против НБ и инфекционного бронхита птиц [1] а также способы комбинированного применения вакцин, например оспа и НБ [2].

Перечень живых комбинированных вакцин невелик, а использование комбинированных способов применения имеет свои недостатки: при механическом объединении двух вакцин непосредственно перед вакцинацией происходит разбавление компонентов, что снижает эффективность вакцинации, а трудоемкость и увеличение числа обслуживающего персонала в птицехозяйствах делают такую вакцинацию дорогостоящей.

Сложная этизоотическая обстановка в ряде птицехозяйств диктует необходимость проведения иммунопрофилактики НБ и ИЛТ в одни и те же сроки.

Известно комбинированное применение сухих вакцин против НБ из штамма Ла-Сота и ИЛТ из штамма ВНИИБП - прототип изобретения.

Но этот способ имеет свои недостатки: для одновременной комбинированной вакцинации необходимо знать биологическую активность биопрепаратов перед смешиванием, что в условиях птицефабрик определить невозможно. Нарушение соотношения между вакцинами ведет к снижению иммунного ответа либо к одному из них, либо к обеим вакцинам, вследствие чего вакцинация становится неэффективной.

Целью изобретения является создание стабильного комбинированного препарата в условиях биофабрик с заранее заданными характеристиками и обеспечивающего напряженный иммунитет против НБ и ИЛТ.

Поставленная цель достигается тем, что вакцина изготовляется путем соединения вируссодержащих материалов вируса НБ из штамма Ла-Сота и вируса ИЛТ из штамма ВНИИБП в одном флаконе в определенном соотношении.

На первом этапе приготовляют матровую расплодку вакцин против НБ из штамма Ла-Сота и против ИЛТ из ВНИИБП, дальнейшее заражение куриных эмбрионов и получение производственных серий вакцин проводят согласно "Инструкции по изготовлению и контролю опытной партии вирус-вакцины сухой ассоциированной против ньюкаслской болезни (штамм Ла-Сота и инфекционного ларинготрахеита (штамм ВНИИБП), пп. 5.3.1. - 5.3.4. и "Временной инструкции по контролю сухой вирус-вакцины против инфекционного ларинготрахеита птиц из штамма ВНИИБП от 25 декабря 1980 года", пп. 2.2 - 4.3. (4, 5).

На втором этапе берут вирусную суспензии, добавляют концентрат вируса НБ, содержащий равное количество прививаемых доз. Дозы определяют согласно титру инфекционной активности. Затем добавляют защитную среду СПЛФ-20% и доводят объем вакцины во флаконе до 4 мл. Далее рассчитывают общее количество вирусной суспензии ИЛТ, концентрата НБ и защитной среды согласно количеству флаконов в серии.

После приготовления жидкую вакцину разливают в стерильные флаконы по 4 мл, предварительно укупоривают резиновыми пробками, замораживают при температуре - 50^oC и выдерживают в течение 2 ч. Затем сушат в камере сублиматора и окончательно укупоривают, покрывая алюминиевыми колпачками.

После сушки проводят контроль вакцины на биологическую активность вируса ИЛТ (ТУ 10.07.032-93 п.36, табл. 4.5) и вируса НБ (ТУ 10.07.032-93 п.3.5., табл. 2,3), статистический подсчет проводят по методу Рида и Менча. Количество ЭИД₅₀ в 1 см³ вакцины вируса НБ должно быть не менее 10^8,6 ЭИД₅₀/см³; а вируса ИЛТ - 10^-5,0 ЭИД₅₀/см³.

Далее идет контроль вакцины на физические свойства и растворимость. (ТУ 10.07.032-93, пп.3.1.-3.2.).

Проверку безвредности вакцины проводят на 45 цыплятах 15-20-суточного возраста. Цыплят разделяют на группы: 4 по 10 цыплят и 1 по 5 цыплят.

5 цыплятам вводят вакцину внутримышечно по 0,1 см, разведенную 1:10;
10 цыплятам - интраназально по 0,05 см³;
10 цыплятам - интраназально по 0,05 см³, разведенную 1:50;
10 цыплятам - энтерально по 5 см³, разведенную 1:500;
10 цыплятам - энтерально по 5 см³, разведенную 1:1000.

Выпаивание вакцины проводят два дня подряд утром перед кормлением.

Наблюдают 14 суток.

Вакцину считают безвредной, если все 45 цыплят останутся живы.

Иммуногенные свойства против ИЛТ проверяют путем контрольного заражения 20 ранее вакцинированных цыплят окулярным, интраназальным или оральным способами. Контрольное заражение проводят через 15 дней после иммунизации путем введения в трахею 1000 ИД₅₀/0,2 см³ ранее оттитрованного на цыплятах вирулентного вируса штамма "24а". Наблюдение ведут в течение 10 дней. Вакцина считается иммуногенной, если она предохраняет от заболевания 16 цыплят из 20 вакцинированных. В контроле должны заболеть с клиникой ИЛТ не менее 18 цыплят из 20 зараженных.

Иммуногенные свойства против НБ проверяют следующим способом: Цыплятам, ранее вакцинированным окулярно - 20 голов и 20 контрольным вводят внутримышечно вирулентный штамм "Т" вируса НБ в дозе 1000 ЛД₅₀/0,2 см³. Вакцинированные цыплята должны остаться живыми, а контрольные погибнуть в течение 8 суток.

Готовую вакцину хранят при температуре (+4) - (+6)^oC в сухом темном помещении в течение одного года.

Проведение серии опытов по проверке эффективности показывает, что комбинированная вакцина индуцирует у 100% цыплят напряженный иммунитет к НБ и обеспечивает 100% защиту от 1000 ЛД₅₀ вируса НБ (штамм "Т").

Коэффициент корреляции устойчивости к вирулентного вирусу ИЛТ (штамм "24а") составляет 0,85 - 0,89, а при моновакцинации - 0,90, таким образом, различия статистически не значимы (табл. 1, 2).

При изучении реактогенных свойств комбинированной вакцины опыты показывают, что 10-кратная доза вакцины является не реактогенной и безвредной для цыплят 15-17-дневного возраста (табл. 3).

Данные опыты говорят о том, что применение вакцинных штаммов Ла-Сота вируса НБ и ВНИИБП вируса ИЛТ в организме цыплят не препятствуют формированию иммунитета против НБ и ИЛТ, а комбинированная вакцина нереактогенна для цыплят 15-17-дневного возраста и формирует напряженных иммунитет при окулярном и энтеральном методах иммунизации.

Исходя из выше сказанного, можно говорить, что комбинированная вакцина экономически более целесообразна, чем комбинированная вакцинация моновакцинами.

Список литературы.

1. Freesre-dried vaccine for the protection of poultry against infections Bronchitis and Newcastle Disease. Information Miscellanevus Folder Product Data. TAD Pharmazeutisches weerk GMBH D-2190 Cuxhaven 1 P.O. BOX 720. West-Germany.

2. Кахахидзе А.В., Аспанидзе К.Г. Иммунологическая и экономическая эффективность ассоциированной вакцинации птицы против ньюкаслской болезни (комплексная вакцинация в интенсивном животноводстве и ее экономическая эффективность. Труды Грузинского зооветинститута, 1983, с.163-179).

3. Слободенюк М.И. и др. Эффективность одновременной вакцинации цыплят аэрозольным методом против ньюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита. В редакции журнала "Ветеринария", 1993.

Использование: ветеринарная вирусология. Сущность изобретения: вакцину получают путем соединения вируссодержащих материалов вирусов ньюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита птиц в одном флаконе с последующей лиофилизацией. 3 табл.

Способ получения комбинированной вакцины против ньюкаслской болезни и инфекционного ларинготрахеита птиц, заключающийся в приготовлении матровой расплодки вакцин против ньюкаслской болезни из штамма Ла-Сота и против инфекционного ларинготрахеита из штамма ВНИИБП с последующим отбором вирусной суспензии инфекционного ларинготрахеита, определением количества прививаемых доз, которые определяют согласно титру инфекционной активности, добавляют защитную среду СППФ-20%, доводят объем вакцины до 4 мл, разливают в стерильные флаконы, замораживают, сублимируют и укупоривают.