СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ РАДУЖНОЙ ОБОЛОЧКИ Российский патент 1995 года по МПК A01N1/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмохирургии, и может быть использовано для реконструктивной хирургии радужной оболочки.

По данным (Венгер Г.Е. Тезисы докладов V Всероссийского семинара офтальмологов. М. 1987 г. с. 275-277) от 30 до 50% повреждений органа зрения являются проникающими, а у 33-85% из них имеют место повреждения радужной оболочки. Для замещения обширных дефектов радужки при травмах глаз требуется наличие трансплантационного материала под рукой. Получение свежего трупного материала тотчас после смерти возможно только в редких случаях, поэтому необходимо длительное консервирование материала.

Известны способы длительной консервации различных тканей глаза, в частности роговицы. Однако они не применимы для консервации радужной оболочки ввиду существенной разницы гистологической структуры роговицы и нежной ткани радужной оболочки.

Наиболее распространен до настоящего времени способ консервации трупного глаза во влажной камере при температуре 2-4^оС (Филатов В.П. Избранные труды. Том 1, Киев, 1961, с. 292), принятый за прототип. По этому способу радужную оболочку выделяют из трупного глаза только непосредственно перед операцией, что требует дополнительных временных затрат во время операции. Основным недостатком данного способа является кратковременная сохранность тканей глаза до 5-6 суток, после чего наступают необратимые изменения в оболочках глаза, заключающиеся в разложении и инфицировании тканей глаза, нарушении гистологической структуры и прочностных свойств оболочек, что не позволяет создать банк тканей, тогда как для полноценной косметической реабилитации больных с колобомами радужки необходимо иметь под рукой всю гамму цветовых оттенков.

Нами была поставлена задача удлинить срок хранения трансплантатов, сократить время операции, создать банк тканей для достижения косметического эффекта операции.

Для решения данной задачи предлагается способ консервации радужной оболочки глаза путем выделения ее из трупного глаза, при этом радужную оболочку подвергают высушиванию на силикагеле до остаточной влажности 4-5%
Важным фактором при высушивании является остаточная влажность, которая оказывает влияние на сохранность морфологического строения консервируемой ткани. Экспериментальными исследованиями установлено, что оптимальным режимом консервации радужки является ее высушивание до 4-5% остаточной влажности. При остаточной влажности ниже 4% клетки ткани не достигают своих нормальных размеров даже при длительной регистрации (60-90 мин), они заметно уплотнены, с трудом дифференцируются границы клеток. При остаточной влажности 6% и более во всех клетках радужки развиваются достаточно интенсивные процессы аутолиза, выражающиеся в разрушении ядерных и цитоплазматических клеток. Остаточную влажность определяли исходя из разницы между весом свежей и высушенной радужки.

Способ осуществляют следующим образом. После энуклеации трупный глаз осматривают на щелевой лампе для изучения состояния радужной оболочки, затем на несколько минут помещают в раствор антибиотика (гентамицин 1 мг/мл). Далее выделяют радужную оболочку, промывают в изотоническом растворе хлорида натрия и на предметном стекле помещают в стерильный бюкс с силикагелем. Последний предварительно прокаливают в сухожаровом шкафу при 120^оС для повышения его сорбционной емкости.

Радужную оболочку в стеклянных бюксах с силикагалем, закрытых герметично, сохраняют в сроки от 1 до 6 мес при комнатной температуре. Регидратацию производят непосредственно перед операцией, помещая трансплантат радужной оболочки в изотонический раствор хлорида натрия на 10-20 мин.

Известно, что высушивание на силикагеле оказывает бактерицидное действие на микрофлору.

Было проведено контрольное бактериологическое исследование образцов консервированной радужки на наличие анаэробной и аэробной микрофлоры. Посев на соответствующие среды берут по стандартным методикам, оговоренным в приказе МЗ СССР N 720. Всякая имплантация донорского материала в эксперименте и клинике сопровождалась бактериологическим контролем. Ни в одном случае при сроках консервации от 1 до 6 мес не был зарегистрирован рост аэробных и анаэробных микроорганизмов.

В эти же сроки производили регидратацию консервированных радужных оболочек человека и кролика и изучали их гистологическую структуру. Для гистологического исследования использовали фрагменты подготовленного к трансплантации материала размером 10 х 10 мм и толщиной от 10 до 150 мкм. Последние фиксировали в нейтральном формалине, окрашивали гематоксилинзозином и по Ван-Гизону. Препараты исследовались при помощи световой и электронной микроскопии. Во всех случаях наблюдали сохранность гистологического строения парапластических субстанций: переднего пограничного и сосудистого слоев, сфинктера и дилятатора, задней пограничной пластины. Наиболее устойчивым к консервации оказался задний пигментный эпителий. Чаще всего он был однослойным, реже двуслойным или отсутствовал. Кровеносные сосуды трансплантатов имели хорошо сохранившуюся стенку, свободные просветы. Коллагеновые волокна парапластических субстанций равномерно гипохромно окрашивались кислыми красителями. Клеточные элементы консервированной радужной оболочки в отличие от парапластических субстанций зачастую подвергались некробиозу, но наряду с измененными, сохранялись клетки с нормальной гистологической структурой, даже в поздние сроки консервации.

Были изучены биомеханические свойства образцов консервированной радужки с остаточной влажностью 4% Данные исследования проводились с помощью весового динамометра, выполненного на базе аналитических весов АДВ-200. Сравнительные данные свежей радужной оболочки и консервированной высушиванием приведены в таблице.

Как видно из таблицы, прочностные свойства трупной радужки при консервации на силикагеле изменяются незначительно.

Для обоснования применения предложенного способа консервации в клинической практике нами прослежен процесс приживления данного трансплантата в условиях эксперимента на лабораторных животных. Для проведения хронического опыта методом слепой выборки были отобраны 57 кроликов породы шиншилла со средней массой тела 2,72±0,24 кг. Исследования выполнялись в стерильных условиях экспериментальной операционной УфНИИ ГБ под общим обезболиванием. Техника хирургического вмешательства во всех случаях была одинаковой: после вскрытия передней камеры роговичным разрезом по лимбу производят полную иридэктомию шириной 3-4 мм. Образовавшуюся колобому радужки замещают выкроенным по форме дефекта лоскутом регидратированной силиковысушенной радужки. Трансплантат фиксируют к радужке реципиента непрерывным швом 10/0 и 1 узловым П-образным швом к склере. На рану роговицы накладывают 5-6 узловых швов, под конъюнктивы вводят ристомицин 50 тыс. Имплантировано 42 донорских радужки, обработанных силиковысушиванием. Клинические результаты трансплантации оценивают по данным биомикроскопии. В последующем все животные были забиты в различные сроки от 1 до 180 сут.

Наблюдение за животными в различные сроки после трансплантации радужной оболочки показало, что в первые 3 сут отмечается умеренная инъекция конъюнктивы, в передней камере фибринозный экссудат, реакция зрачка на свет вялая. На 4-5 сут инъекция глазного яблока уменьшалась, фибрин рассасывался, трансплантаты достаточно хорошо адаптированы с краями колобом. К концу 1 началу 2 недели глаза полностью успокаивались. В сроки от 1 до 3 мес трансплантаты несколько подтягивались к области роговичной раны, наблюдалась очаговая депигментация пересаженной радужки по ходу швов. Во всех случаях отмечено в первые сутки распыление пигмента на капсуле хрусталика и эндотелии роговицы, который полностью рассасывался на 10-12 сут. В сроки наблюдения до 6 месяцев трансплантаты оставались на месте, цвет их практически не менялся, зрачок принимал несколько овальную форму с нормальной реакцией на свет. Описанная биомикроскопическая картина была в основном однотипной, приживление наступило во всех случаях наблюдения.

Гистологические исследования препаратов оперированных глаз показали, что донорская радужка, высушенная на силикагеле, довольно быстро подвергается структурной дезорганизацией "под напором" врастающего в толщу трансплантата регенерата радужной оболочки реципиента. Процесс этот начинался в ранние сроки после операции и по истечении 180 сут выглядел практически завершенным. Близкая гистологическая структура парапластических соединительно-тканных субстанций радужной оболочки реципиента и трансплантата радужной оболочки является благоприятным фактором для врастания регенерата. В образовании рубца участвуют фибробласты и пигментные клетки. В отдаленные сроки до 6 мес наблюдалась умеренная депигментация трансплантата, но в целом он сохранял гистологическую структуру радужки. Ни в одном случае не было отмечено ни одного гистологического критерия так называемой "болезни трансплантата": лимфоидной инфильтрации трансплантатов, формирования секвестральной коробки, облитерации неокапилляров и т.д.

В клинике УфНИИ ГБ трансплантация радужной оболочки, консервированной силиковысушиванием, произведена 13 больным от 18 до 65 лет. Этиологическими факторами колобом во всех случаях были травмы органов зрения, при этом у 11 больных это были последствия травмы глаз, у 1 свежее повреждение, у 1 гигантская посттравматическая киста радужки, требующая радикальной эксцизии с одномоментным замещением операционной колобомы трансплантационным материалом. Методы хирургического вмешательства не отличались от общепринятых.

Течение послеоперационного периода оценивали по данным общеклинических методов исследования: офтальмоскопии, биомикроскопии. Отдаленные результаты операций прослежены в сроки от 7 до 36 мес у всех 13 больных.

Из числа оперированных больных, имплантация технически удалась во всех 13 случаях. Наблюдение в послеоперационном периоде показало, что первые 2-3 сут сопровождаются воспалительными изменениями в радужной оболочке реципиента, которые стихают к 6-7 сут. Трансплантаты оставались плотно адаптированы с краями колобомы, влага передней камеры в течение всего срока наблюдения оставалась прозрачной. Небольшие распыления пигмента в передней камере полностью рассасывались на 10-12 сут после операции. Описанная биомикроскопическая картина была однотипной. Ни в одном случае отдаленного наблюдения не было отмечено ни одного случая отторжения трансплантатов. При оценке отдаленных результатов в качестве критериев учитывались такие параметры, как форма зрачка и реакция его на свет, динамика зрительных функций, наличие поздних вторичных осложнений (сращение трансплантата с роговицей и, конечно же, степень приживления трансплантатов. При этом все 13 результатов трансплантации силиковысушенной радужной оболочки оценены как хорошие.

П р и м е р. Больная Харисова М.М. 1971 г.р. история болезни N 7323. Поступила в травматологическое отделение УфНИИ глазных болезней с диагнозом: левый глаз последствие проникающего ранения роговицы, сращенный рубец роговицы, травматическая катаракта, колобома радужки. Травма перенесена в возрасте 4-х лет, после травмы прошло 14 лет. Колобома радужки составляет 1/5 окружности в верхне-внутреннем секторе. После обычной предоперационной подготовки произведена операция реконструкция переднего отрезка глаза, экстракция травматической катаракты, замещение колобомы радужки трупной радужной, консервированной высушиванием на силикагеле, с остаточной влажностью 4%
В послеоперационном периоде получала антибиотики местно, дексазон под конъюнктиву в течение 5 дней, дезинфицирующие капли. Выписана на 12 день после операции. При выписке глаз почти спокоен, роговица прозрачная, в верхне-внутреннем секторе роговицы старый рубец, зрачок в центре, правильной формы, на свет реагирует, афакия, в стекловидном теле плавающие помутнения, глазное дно без патологии. На эндотелии роговицы единичные пигментные преципитаты. Острота зрения с афакической коррекцией 0,2 (амблиопия). Срок наблюдения 2 г. 3 мес. Глаз по-прежнему спокоен, трансплантат на месте, почти не отличается по цвету от окружающей радужки, наблюдается незначительное истончение ткани радужной оболочки и участки депигментации в зоне швов радужки. Зрачок округлой формы, незначительно смещен в верхне-внутренний сектор, среды глаза прозрачны, острота зрения с контактной линзой +10 дптр. 0,3-0,4.

Таким образом, способ консервации радужной оболочки путем ее высушивания на силикагеле позволяет длительно сохранять трансплантаты радужки при сохранности ее гистологической структуры и биомеханических свойств. Кроме того, позволяет создать банк трансплантационного материала всех цветов и оттенков, чем достигается косметический эффект операции пересадки радужки. Трансплантаты радужки, консервированные предложенным способом, не вызывают реакцию несовместимости, употребляются гарантированно стерильными, что способствует снижению послеоперационных осложнений.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано в реконструктивной хирургии радужной оболочки. Сущность: выделенную из трупного материала радужную оболочку подвергают высушиванию на силикагеле до 4 5% остаточной влажности. Длительная консервация радужной оболочки позволяет создать банк тканей всех цветов и оттенков, сократить время операции и при этом достичь высокого косметического эффекта пересадки радужки. 1 табл.

СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИ РАДУЖНОЙ ОБОЛОЧКИ путем выделения ее из трупного материала, отличающийся тем, что радужную оболочку подвергают высушиванию на силикагеле до остаточной влажности 4 5%