СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГИАЛУРОНИДАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК A61K38/43 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к получению ферментных препаратов, используемых в косметических и лечебных целях.

Известен способ получения препарата, обладающего гиалуронидазной активностью, путем измельчения семенников крупного рогатого скота, экстракцией целевого продукта растворителем с последующим его отделением из экстракта, очисткой и высушиванием.

Экстракцию целевого продукта в известном способе проводят 0,6%-ным раствором уксусной кислоты, выделение из экстракта целевого продукта проводят путем осаждения ацетоном с последующим растворением в дистиллированной воде. Очистку от низкомолекулярных примесей проводят диализом при 0 10^оС в течение 12 16 ч против дистиллированной воды.

Однако способ трудоемок, требует специального оборудования, взрывоопасен, длителен.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа, а также увеличение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается в способе получения препарата, обладающего гиалуронидазной активностью, путем измельчения семенников крупного рогатого скота, экстракцией растворителем с последующим отделением целевого продукта в виде раствора, очисткой и высушиванием тем, что в качестве растворителя используют 0,85-0,9%-ный водный раствор хлористого натрия.

Поставленная цель достигается также тем, что экстракцию водным раствором хлористого натрия осуществляют при рН 5,0 7,0 в течение 5 60 мин при весовом соотношении семенников и экстракционного раствора, равном 1:4 2, при 5 50^оС.

Поставленная цель достигается также тем, что целевой продукт получают в виде раствора отстаиванием, либо фильтрацией экстракта.

Поставленная цель достигается также тем, что очистку целевого продукта проводят ультрафильтрацией через мембранный материал, пропускающий вещества с молекулярным весом менее 15 30 тысяч дальтон.

В патентной и научно-технической литературе неизвестны технические решения, содержащие признаки, аналогичные заявляемым, т.е. предложение соответствует критерию "новизна".

Также, впервые нами установлено, что использование в качестве растворителя раствора хлористого натрия позволило увеличить выход целевого продукта, а также убрать из технологического цикла осаждение ацетоном ферментного препарата, т.е. предложение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Заявленное техническое решение просто в технической реализации, т.е. промышленно осуществимо.

П р и м е р 1. 1 кг семенников крупного рогатого скота измельчают на мясорубке. К полученному охлажденному до 5^оС фаршу добавляют охлажденный до 5^оС 0,9% -ный раствор хлористого натрия в количестве 2 л (рН раствора 6,5), интенсивно перемешивают в течение 5 мин. Фильтруют через 8-и слойную марлю. Полученный раствор обладает гиалуронидазной активностью 64 у.е./мл.

П р и м е р 2. К 0,5 кг семенников крупного рогатого скота добавляют 1,5 л 0,85%-ного раствора хлористого натрия. Измельчают семенники на гомогенизаторе в течение 5 мин. Полученный гомогенат прогревают на водяной бане до 50^оС и выдерживают при постоянном перемешивании в течение 60 мин рН раствора 6,0. Полученную смесь отстаивают в течение 1 ч.

Надосадочную жидкость декантируют и проводят ультрафильтрацию на установке УПВ-15 через полые волокна с проникающей способностью для веществ с молекулярной массой менее 15 30 тысяч дальтон. Ультрафильтрацию осуществляют до остаточного объема раствора 300 мл.

Полученный раствор с целевым продуктом разбавляют дистиллированной водой до объема 1,5 л и проводят вторично ультрафильтрацию до остаточного объема 300 мл.

Гиалуронидазная активность растворов на разных стадиях:
1. После декантации 64 у.е/мл.

2. После 1-й ультрафильтрации 256 у.е/мл.

3. После 2-й ультрафильтрации 256 у.е/мл.

П р и м е р 3. 250 г семенников крупного рогатого скота измельчают на мясорубке. К полученному фаршу добавляют 1 л 0,9%-ного раствора хлористого натрия. Перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре рН гомогената в экстрагирующем растворе 5,3. Раствор фильтруют через 8-и слойную марлю, а затем через бумажный фильтр. Отфильтрованный раствор с целевым продуктом разбавляют дистиллированной водой в 2 раза и пропускают через полые волокна на установке УПВ-15. Ультрафильтрацию осуществляют до остаточного объема, равного исходному объему до разведения раствора водой.

Гиалуронидазная активность целевого продукта на разных стадиях:
1. После фильтрации через бумажный фильтр 64 у.е/мл.

2. После ультрафильтрации 64 у.е/мл.

(Для сравнения: экстракция семенников в уксуснокислой среде позволяет получать растворы с целевым продуктом с активностью 16 32 у.е/мл).

Реализация способа позволяет увеличить выход целевого продукта в 4 8 раз, существенно упростить аппаратурное оформление, сократить время более чем в 10 раз.

Область применения: медицина, ветеринария. Сущность: в способе получения препарата, обладающего гиалуронидазной активностью, путем измельчения семенников крупного рогатого скота, экстракцией растворителем с последующим отделением целевого продукта в виде раствора, очисткой и высушиванием, в качестве растворителя используют 0,85-0,9%-ный раствор хлористого натрия, экстракцию осуществляют при pH 5,0-7,0 в течение 5-60 мин при весовом соотношении семенников и экстракционного раствора, равном 1:4-2, при температуре 5-50°С. Целевой продукт получают в виде раствора отстаиванием, либо фильтрацией экстракта, причем очистку проводят ультрафильтрацией через мембранный материал, пропускающий вещества с молекулярным весом менее 15-30 тысяч дальтон. 1 з. п. ф-лы.

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА, ОБЛАДАЮЩЕГО ГИАЛУРОНИДАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, путем измельчения семенников крупного рогатого скота, экстракции, очистки целевого продукта фильтрацией и его высушивания, отличающийся тем, что экстракцию проводят 0,85-0,9%-ным водным раствором хлористого натрия, а очистку проводят ультрафильтрацией через мембранный материал, пропускающий вещества с молекулярным весом менее 30 тыс. дальтон. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что экстракцию осуществляют при рН 4,0-7,5 в течение 5-60 мин при массовом соотношении семенников и раствора хлористого натрия 1:4-2 при 5-50^oС.