Способ получения гиалуронидазы Советский патент 1978 года по МПК A61K35/48 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к получению биологически активных веществ, которые могут быть использованы в медицине в качестве лекарственных препаратов, .

Известен способ получения гиалуро- нидазы из семенников крупного рогатого скота, включающий в себя измельчение ткани, кислотный автолиз в течение 18-20 ч при 38 С, ацетоновое осаждйние, растворение осажденного фермента в дистиллированной воце, отгонку ацетона под вакуумом, стерилизацию и лиофилизацию ij .

Недостатком этого способа является то, что используемые в качестве сырья для получения гиалуронидазы семенники крупного рогатого скота не являются наиболее богатым источником этого фермента, что приводит к недостаточно высокой удельной активности конечного ферментного препарата. Кроме того, использование процедуры ацетонового осаждения значительно усложняет и удорожает производство гиалуронидазных препаратов и делает его опасным в пожарном отношении. Получаемые таким способом пре-ч параты гиалуронидазы отличаются упель - ной активностью.

Наиболее близким к изобретению является способ получения гиалуронидазы путем измельчения животного сырья, экстрагирования солевым раствором хлористого натрия и очистки r2j ,

Недостатком этого способа является низкая удельная активность получаемой гиалуронидазы и незначительный ее выход, менее 1О%,

Целью изобретения является повышение чистоты и вь)хода целегого продукта. Эта цель достигается тем, что в качестве сырья используютподчелюстные железы собак, а очистку производят диализом против оистиллированной воды и отстаиванием при О-6°С в течение 3-4 кед.

Пример. 4Q5 г подчелюстных слюнных желез, полученных у 62 свежо;.6 Забитых .собак различных пород непосредственно после снятия mxypbii гомогенизи- руют с прмошью электрической мясорубки. После этого этапа получают всего 49О г гомогената, содержащего 8554,5 фермента с уаельной активностью 0,14О К гомогенату добавляют 2,45 л 1,5%-кого растворч хлористого натрия. Экстракцию проводят в течение 30 мин при периодическом встряхивании и 5 С, Полученный экстракт центрифугируют при 6ООО О в течение 30 мин при 4 С. К осадку вновь прибавляют 800 мл 1,5%-ного раствора хлористого натрия и проводят повторную экстракцию. Полученные надосадочные жидкости соединяют и диализнруют против дистиллированной воды в течение 24 ч при 5°С. Диализат центрифугируют в течение 30 мин при 4 С. После этого получают ЗООС мл раствора гиалуронидазы, содержащего 14833,2 Е фермента с удельной активностью 0,216. Выход препарата на этом этапе составляет 173%, а чистота препарата повышается в 1,5 раза. Затем указанные выше ЗООО мл надосадочной жидкости оставляют для отстаивания в течение 3-4 нед при 0-6 С. Полученный гиалуронидазный препарат центрифугируют при 6ООО Р в течение 30 мин при 4 С. Получают 2900 мл раствора гиалуронидазы , содержащего 14841,2 Е фермента с удельной активностью 0,458. Выход препарата 173%, а чистота препарата повышается в 3,3 раза. Предлагаемый способ позволяет существенно увеличить чистоту гиалуроницазы, значительно повысить ее выход. Получаемый препарат содержит значительно меньше балдастных белков и поэтому будет давать значительно меньше аллергических осложнений, которые возникают при применении других препаратов. Формула изобретения Способ получения гиалуронидазь путем измельчения животного сырья, экстрагирования солевым раствором хлористого натрия и очистки, отличающийс я тем, что, с целью повышения чистоты и выхода целевого продукта, в качестве сырья используют подчелюстные железы собак, а очистку проводят диализом против дистиллированной воды и отстаиванием при О-6 С в течение 3-4 нед. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1.Технология мясных и технических продуктов. Справочник, Пищевая промышленность, М., 1973, с. 516-517. 2.Гуров В. А. Производство органопрепаратов. М.,Пищевая промышленность , 1976, с. 80.