Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению нового штамма бифидобактерий, который может быть использован для приготовления бифидумбактерина и кисломолочных продуктов.
В Среднеазиатском регионе для производства бифидумбактерина применяется промышленный штамм Bifidobactеrium bifidum N1.
К недостаткам этого штамма относятся пониженная устойчивость к антибиотикам, продуктам кишечного обмена, низкая скорость роста, отсутствие сквашивания молока.
Цель изобретения получение штамма бифидобактерий Вifidobacterium longum 17х, обладающего достаточной естественной устойчивостью к высокой концентрации соли, антибиотикам, продуктам кишечного обмена, высокой скоростью роста, активно сквашивающего молоко.
Предлагаемый штамм получен постепенным естественным отбором из фекалий здоровых детей грудного возраста, проживающих в Ташкенте Республики Узбекистан и путем адаптации к высоким концентрациям фенола 0,1-0,5% желчи 20-40% поваренной соли 2,5%
Местный штамм Вifidobacterium longum 17х.
Штамм депонирован и хранится во Всесоюзной коллекции культур промышленных микроорганизмов "ВНИИ генетика" под номером В-5813.
Штамм Вifidobacterium longum 17х имеет следующие морфолого-культуральные и физиолого-биохимические характеристики.
Жидкие питательные среды (Блоурока, кукурузно-лактозная, гидролизатно-молочная). Двухсуточная культура палочки прямые и слегка разветвленой формы с булавовидными утолщениями, размером 0,5х1,0, 3,6-5,2 мкм, одиночные, сдвоенные, в виде цепочек. На жидких средах, разлитых в пробирки, высоким слоем растут в виде "столба" мути с зоной анаэробиоза.
Молоко. Клетки палочковидные, укороченные, зернистые.
Агаризованные среды. При глубинном росте колонии в виде утолщенных гвоздиков размером 1х2, 2х4 мм.
Клетки грамположительные, слабо окрашиваются метиленовой синью, по краям клеток видны округлые гранулы, каталазаотрицательные, газ не образуют, протеолитической активностью не обладают, нитраты, нитриты не восстанавливают.
Отношение к углеводам и спиртам. Усваивает фруктозу, галактозу, глюкозу, рибозу, маннозу, лактозу, мальтозу, мелибиозу, сахарозу, трегалозу, арабинозу, ксилозу, инулин, салицин, слабо сорбит; не усваивает целлобиозу, рамнозу, маннит и дульцит.
Отношение к органическим кислотам. Продуцируют молочную, уксусную кислоты.
Отношение к продуктам кишечного обмена. Резистентен к содержанию в среде 40% желчи, 0,5% фенола, 2,5% NaCl. Оптимальная температура роста 37-39оС, не растет при 45оС.
Устойчивость штамма к антибиотикам.
Минимальная ингибирующая концентрация, мкг/мл: Эритромицин 0,05 Олеандомицин 0,1 Бензилпенициллин 0,4 Ампицилин, карбенициллин, линкомицин 2,0 Оксациллин, тетрациклин 3,0 Гентoмицин, метициллин 10,0 Стрептомицин 24,0 Левомицитин 65,0 Леворин, нистатин 2060,0
Антагонистическая активность. По отношению к патогенным, условно-патогенным микроорганизмам, при совместном культивировании 1:1 Bifidobacterium longum 17х, в жидкой среде Блоурока, подавлял рост через 48 ч, Е. coli 100 Salmonella tуphimorium 100 Pr. vulgaris 99,75 Ps. aeruginosa 76 Кl. pneumoniae 94-95
Cостав сред культивирования Bifidobacterium longum 17х.
Печеночная среда Блоурока.
Молоко с ростактиваторами.
Гидролизатно-молочная среда следующего состава, г/л: Гидролизат молока, мл 500 Водопроводная вода, мл 500 Лактоза 7,0-10,0 Пептон 2,0-5,0 Натрий хлористый 5,0-10,0 Дрожжевая вода, мл 30,0-50,0 Дестиобиотин, мкг 0,4 Агар-агар 0,75 рН готовой среды 7,2-7,3 Штамм Bifidobacterium longum 17x активно размножается на различных средах (табл. 1).
Штамм по технологическим свойствам превосходит прототип: при внесении Вifidobacterium longum 17х в молоко в количестве 5-6% сквашивание наступает через 14-16 ч выращивания, кислотность 85-110оТ, титр бифидобактерий достигает 5х109 1х1010 (табл.2).
Штамм непатогенен (Институт региональных проблем Академии медицинскиx наук СССР).
Штамм рекомендуется при приготовлении бифидобактериальных препаратов и лечебных кисломолочных продуктов.
Для приготовления бактериального препарата.
П р и м е р 1. Культуру Bifidobacterium longum 17х засевают в жидкие среды (печеночную, гидролизатно-молочную). Через 48 ч бифидобактерии центрифугируют (3,5-4,0 тыс.об/мин, 20 мин. t 4оС). Осадок разводят стерильной водой до концентрации клеток (1-3) ˙ 109 кл/мл. 1 мл такой микробной суспензии составляет 1 дозу препарата бифидумбактерина.
Препарат из бифидобактерий может быть получен в лиофилизированном виде (ампула, флакон) и содержит активную культуру с высокой антагонистической активностью, резистентную к вредным продуктам кишечного обмена (фенол, желчь), высоким концентрациям солей, и сквашивает молоко.
П р и м е р 2. Для приготовления молочнокислого продукта берется 100 мл цельного молока (восстановленного из сухого молока), стерилизуют его в автоклаве при 121оС в течение 12-14 мин, остужают до 37-39оС, вносят 5-6 мл 48-часовой культуру Bifidobacterium longum 17х, выращенной на печеночной или гидролизатно-молочной средах или лиофильновысушенную культуру с содержанием клеток (1-3)˙ 109. Среды помещают в термостат при 37оС до получения сгустка. В результате получают молочнокислые продукты.
Использование: биотехнология, штамм бифидобактерий, бактериальный препарат, кисломолочные продукты. Сущность изобретения: предложен штамм Bifidobacterium 17 х ВКПМ N В-5813. Штамм имеет следующие характеристики: колонии гвоздикообразной формы, клетки палочковидной формы. Штамм обладает высокой чувствительностью к антибиотикам, устойчив к продуктам кишечного обмена и высоким концентрациям хлорида натрия, активно сквашивает молоко. Штамм используют для изготовления бактериальных препаратов и кисломолочных продуктов. 2 табл.
Штамм бактерий Bifidobacterium longum 17 х ВКПМ N В-5813, используемый для приготовления бактериальных препаратов и кисломолочных продуктов.
| Гончарова Г.И | |||
| и др | |||
| Бифидобактерии и перспектива их применения при нарушении бифидофлоры у детей младшего возраста | |||
| ЖМЭИ, 1971, N 7, с.91-95. |
