Изобретение относится к медицинской микробиологии и представляет собой штамм бифидобактерий, который может быть использован для приготовления бактерийных препаратов-эубиотиков и лечебно-диетических продуктов.
Препараты и продукту, содержащие в своем составе бифидобактерии, предназначены для коррекции микрофлоры кишечника людей, страдающих дисбактериозом, возникшим в результате широкого применения антибактериальных препаратов, лучевой и химиотерапии, неблагоприятной экологической ситуации, стрессовых воздействий и т.п.
За рубежом используют препараты-эубиотики и кисломолочные продукты-йогурты, приготовленные на основе бифидобактерий видов B. bifidum, B. longum, B. adolescentis, B. breve (патент Франции N 2336886, N 2411008, патент ФРГ N 2134179, N 2421066, патент Швейцарии N 637297, патент Японии N 05227946, N 04320642. Существует препарат, приготовленный из разрушенных клеток смеси штаммов бифидобактерий видов B. longum и B. infantis, обладающий антиопухолевым действием (патент США N 4645667).
У нас в стране в качестве штаммов-продуцентов, используемых при создании препаратов-эубиотиков и продуктов лечебного питания, применяют бифидобактерии видов B. bifidum N 1, 791, B. londum B379M, B. adolescentis MC-42 (авт. св. N 343588, патент N 1347221, патент N 849779, патент N 864639).
В кишечнике человека встречаются бифидобактрии 5 видов - B.bifidum, B. longum, B. adolesctntis, B. breve и B. infantis, причем с наибольшей частотой виды B. bifidum, B. londum и B. adolescentis (39 - 75%). У детей грудного возраста в 30% случаях обнаруживаются и бифидобактрии видов B. breve и B. infantis, которые характерны для этой группы детей.
Целью изобретения является штамм Bifidobarterium in fantis подвид lactentis 79-43, способный активно наращивать микробную массу в питательных средах и сквашивать молоко к 24 часам культивирования и обладающий специфической активностью.
Штамм Bifidobacterium in fantis 79-43 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка в 1979 г, хранится в лиофилизированном состоянии и депонирован под N 156 в Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского.
Культурально-морфологические признаки. Клетки представляют собой гр+ полиморфные палочки с бифуркацией или утолщением на 1-2х концах, склонные к образованию скоплений. В печеночной среде штамм образует колонии в виде комет. Логарифмическая фаза роста заканчивается к 24 часам. В жидких питательных средах растет по всей высоте обмена, кроме зоны аэробиоза.
Физиолого-биохимические признаки. Неподвижный, бесспорный облигатный анаэроб. Оптимальная температура выращивания 37,5 - 38oC, pH питательных сред 7,2 - 7,4. Каталазу не образует, желатину не разжижает. Сбраживает глюкозу с образованием уксусной и L + молочной кислоты без образования газа, закисляя среду выращивания до pH 4,1 - 3,9. Ферментирует лактозу, ксилозу, маннозу, вариабельно маннит, инулин, не сбраживает арабинозу, целлобиозу, сорбит, салицин. Сквашивает стерильное молоко к 16 - 24 часам с образованием плотного сгустка.
Штамм к первым суткам наращивает микробную массу на питательных средах разного состава, активнее на гидролизатно-молочной среде (табл. 1)
Штамм активно размножается к 16-24 часам в питательных средах и молоке, что является одним из основных показателей технологичности штамма. Штамм обладает специфической активностью. При культивировании на питательных средах продуцирует кислоты, наиболее активно - на гидролизатномолочной (табл. 2).
Штамм ингибирует рост натогенных и условно-патогенных микроорганизмов - шигелл Зонне, Флексинера, ЭПКП, стафилококка, протея (табл. 3).
Изучение спектра чувствительности к 14 применяемым антибактериальным препаратам выявило, что штамм устойчив к оксациллину, цефалотину, неомицину, канамицину, тетрациклину, олеандомицину, линкомицину, полимиксину; среднеустойчив к бензилпенициллину, карбенициллину; чувствителен к ампициллину, эритромицину, левомицетину, ристомицину.
Из приведенных данных следует, что штамм 79-43 активно наращивает микробную массу на питательных средах, принятых в производстве бактерийных препаратов в короткие 16 - 24 часа, сроки культивирования, содержанием микрооных клеток lg 7,88-8,03; обладает кислотообразующими и ингибирующими свойствами в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; обладает устойчивостью к ряду антибактериальных препаратов.
Способность штамма 79-43 активно наращивать микробную массу в питательных средах и размножаться в молоке, сквашивая его, делает возможным использование его в составе бифидосодержащих бактерийных препаратов и лечебно-диетических продуктов.
Пример 1. Использование штамма 79-43 для получения бактерийного препарата.
Штамм 79-43 1-2-3-го пассажей культивируют при температуре 37,5 - 38oC и PH среды 7,2 - 7,4 в течение 16 - 24 ч. К выращенной биомассе добавляют защитные среды высушивания (сахароза 80% и желатина 8% - 10-12%, обезжиренное молоко до 20%). Полученную суспензию разливают по 2 мл в ампулы или по 5 мл в пенициллиновые флаконы, замораживают при температуре минус 40 - 45oC и лиофилизируют из замороженного состояния в вакуум-сушильных аппаратах. Полученный препарат содержит 107-108 живых клеток бифидобактерий. Согласно НТД на сухой бифидумбактерин (ФС 42-132 ВС-94) допускается содержание в 1 дозе препарата не менее 107 живых бифидобактерий.
Пример 2. Использование штамма 79-43 в составе закваски для приготовления кисломолочного бифидумбактерина.
2.1 I-й пассаж. - Лиофилизированный штамм 79-43 вносят в питательную среду (печеночную, тиогликолевую, кукурузно-лактозную) из расчета 0,1 г сухой биомассы (1 доза) на 100 мл среды. Посевы инкубируют 24 ч. при 37,5 - 38oC.
2-й пассаж. Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (1 л). Инкубируют 16-24 ч. при 37,5-38oC.
Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5-10% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16-24 ч. при 37,5-38oC. В данном случае указанным количеством закваски получают 20 л продукта.
2.2 I пассаж. Лиофилизированный штамм 79-43 0,1 г сухой биомассы (1 доза) титруют методом десятикратным разведений в питательной среде и в обмене 10% посевного материала из 10-2 - 10-4 переносят в питательную среду (1 л). Инкубируют 24 ч. при 37,5 - 38oC.
2-й пассаж. Полученную биомассу в количестве 10% вносят в среду накопления (10 л). Инкубируют 16 - 24 ч. при 37,5 - 38o.
Получение продукта. Выросшую закваску в объеме 5% вносят в емкости со стерильным молоком и инкубируют 16 - 24 ч. при 37,5 - 38oC. В данном случае указанным количеством закваски можно получить 200 л продукта.
Таким образом, предлагаемый штамм 79-43 является технологичным, поскольку активно накапливает биомассу в питательных средах в короткие, 16 - 24 ч. , сроки культивирования; сквашивает молоко в 24 часам с образованием плотного сгустка; обладает специфической активностью, продуцируя кислоты и подавляя рост патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Штамм можно рекомендовать для введения его в состав препаратов-эубиотиков и лечебно-диетических продуктов питания.
Использование: в медицине. Штамм Bifidobacterium infantis 79 - 43 выделен из содержимого кишечника здорового грудного ребенка. Штамм B.infantis 79 - 43 активно размножается на питательных средах разного состава, принятых в производстве бактерийных препаратов. Накапливает производственную биомассу к 16 - 24 ч культивирования с содержанием в 1 мл микробных клеток lg 8. Сквашивает молоко к 24 ч культивирования с образованием сгустка с хорошими вкусовыми и органолептическими свойствами. Продуцирует кислоты и ингибирует рост патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Устойчив к ряду антибактериальных препаратов. 3 табл.
Штамм Befidobacterium infantis (коллекционный N 156 Государственной коллекции микроорганизмов - представителей нормальной микрофлоры человека ГКНМ МНИИЭМ им. Г. Н.Габричевского), используемый для приготовления бифидосодержащих бактериальных препаратов и лечебно-диетических продуктов питания.
| SU, авторское свидетельство, 863639, кл | |||
| Прибор для равномерного смешения зерна и одновременного отбирания нескольких одинаковых по объему проб | 1921 |
|
SU23A1 |
