Изобретение относится к медицине, в частности к консервированию и трансплантации биологических тканей.
Известны растворы, предложенные для криоконсервирования костного мозга и содержащие криопротекторы низкомолекулярный поливинилпирролидон и/или глицерин. Эти растворы при замораживании костного мозга позволяют сохранить репродуктивную, колониеобразующую способность столовых клеток в среднем в 37% (при колебаниях от 20 25% до 40 63%), т.е. они не обладают достаточно высоким хладоограждающим действием на костномозговые клетки. Применение глицерина в оптимальной для замораживания кроветворных клеток 15% концентрации ввиду ее токсичности для макроорганизма требует отмывания этого криофилактика от костного мозга перед трансплантацией и ведет к дополнительной потере гемопоэтических клеток.
Цель изобретения заключается в том, чтобы раствор для криоконсервирования костного мозга создать из максимально нетоксичных составных частей и повысить его хладоограждающее действие на стволовые костномозговые клетки.
Цель достигается тем, что хладоограждающий раствор содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты при следующих соотношениях компонентов, мас. Гексаметиленбистетра- оксиэтилмочевина 30,0-50,0 Динатриевая соль эти- лендиаминтетрауксус- ной кислоты 0,08-0,18 Бидистиллированная вода Остальное
Раствор готовят следующим образом.
Взвешивают требуемые навески динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины. Отдельно в бидистиллированной воде растворяют навески указанных веществ. Полученные растворы смешивают и, добавляя бидистиллированную воду, доводят до окончательного объема.
Приготовленный хладоограждающий раствор пропускают через ватно-марлевый фильтр, разливают в требуемые флаконы, закрывают их резиновыми пробками и завальцовывают. Перед стерилизацией завертывают в двойной слой пергаментной бумаги.
Стерилизацию флаконов с раствором для криоконсервирования костного мозга производят в автоклаве в течение 30 мин при 1,2 атм. Готовый раствор хранят в сухом прохладном темном месте во флаконах, завернутых еще до стерилизации в пергаментную бумагу, не более 6 мес. Коррегируют рН раствора до 7,0-7,2 с помощью 2 н. раствора химически чистой соляной кислоты.
Готовый хладограждающий раствор бесцветен, прозрачен, не имеет запаха. Он хорошо смешивается с нативной костномозговой взвесью, а также стабилизированной цитратом натрия и содержащей среду 199 и аутологичную сыворотку, предупреждает агрегацию клеток костного мозга и обеспечивает их высокую жизнеспособность при положительных температурах.
Раствор обладает очень выраженным хладограждающим действием: при замораживании до -196оС по двухэтапной программе (со скоростью охлаждения 1о в мин до -9 и 10о в мин до -196оС) и размораживании в течение 50 с при 39оС в водяной ванне сохраняется весьма высокий процент стволовых кроветворных клеток от 75,4 до 94,1 в среднем 83,3±2,7.
Эти данные получены в исследованиях, проведенных на 905 мышах имбредной линии (СВА + С57ВIб) с клонированием гемопоэтических стволовых клеток в селезенках смертельно облученных мышей по принятому в отечественных и зарубежных работах методу Till T.E. Mc Culloch E.A. A direct meаsurement of the radiation sensivity of normal mouse bone marrav cells. "Red"at.Ros v 14, р. 213.
Предлагаемый раствор обладает очень выраженным хладограждающим действием, апирогенен, нетоксичен. Последнее обстоятельство позволяет трансплантировать размороженный костный мозг без отмывания от криофилактика, что делает удобным использование данного хладограждающего раствора в практической работе.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| РАСТВОР ДЛЯ КОНСЕРВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПРИ НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ | 1990 |
|
RU1772911C |
| ВОДНЫЙ РАСТВОР ДЛЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ ТРОМБОЦИТОВ | 1988 |
|
RU1561227C |
| Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80 C с раствором Гекмолит | 2019 |
|
RU2711152C1 |
| ХЛАДООГРАЖДАЮЩИЙ РАСТВОР ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ ТРОМБОЦИТОВ ПРИ УМЕРЕННО-НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ | 2002 |
|
RU2230454C2 |
| Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80С с раствором Гекмодиолит | 2019 |
|
RU2716574C1 |
| Состав для замораживания костного мозга | 1985 |
|
SU1349021A1 |
| КРИОЗАЩИТНЫЙ РАСТВОР ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ УМЕРЕННО-НИЗКОЙ ТЕМПЕРАТУРЕ | 2001 |
|
RU2184449C1 |
| СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА | 1998 |
|
RU2144290C1 |
| КРИОКОНСЕРВАНТ ДЛЯ ЗАМОРАЖИВАНИЯ ЯДЕРНЫХ КЛЕТОК КРОВИ | 2013 |
|
RU2530149C1 |
| Способ снижения токсичности криоконсервирующего раствора на основе диметилсульфоксида после размораживания гемопоэтических стволовых клеток | 2020 |
|
RU2744614C1 |
Изобретение относится к медицине, а именно к средствам для криоконсервирования костного мозга, для снижения токсичности, средство кроме динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты содержит гексаметиленбесстетраоксиэтилмочевину и бидистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, мас. гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 30 50; динатриевая соль этилендиамитетрауксусной кислоты 0,08 0,18; бидистиллированная вода остальное.
СРЕДСТВО ДЛЯ КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЯ КОСТНОГО МОЗГА, содержащее динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, отличающееся тем, что, с целью снижения токсичности, оно дополнительно содержит гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину и бидистиллированную воду при следующих соотношениях ингредиентов, мас.
Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 30,0 50,0
Динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 0,08 0,18
Бидистиллированная вода остальное
| С | |||
| С | |||
| Лаврик | |||
| Консервирование костного мозга | |||
| Изд | |||
| Здоровье, Киев, 1975. |
