СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК A61K48/00 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности.

Для лечения вирусных инфекций широко применяются химиотерапевтические средства, характеризующиеся избирательностью воздействия на вирусы определенного типа.

Нередко химиотерапевтическим средствам присуща высокая токсичность, выражающаяся в виде анемии, лейкопении и нейтропении, поражении жизненно важных органов и развитием устойчивости штамма вируса к препарату.

Способы получения противовирусных препаратов являются дорогостоящими многоступенчатыми процессами. Способ получения вещества с противовирусной резистентностью в отношении как РНК-, так и ДНК-содержащих вирусов на основе солей ДНК в литературе не описан. Наиболее близким к изобретению является способ получения противовирусного средства на основе натриевой соли ДНК.

Целью изобретения является способ получения вещества, обладающего противовирусной резистентностью в отношении РНК- и ДНК-содержащих вирусов. Сущность способа состоит в том, что суспензию клеток инкубируют с солью ДНК при 37^оС. Инкубированные клетки многократно отмывают чистой средой с использованием центрифугирования, далее ресуспендируют в питательной среде и инкубируют в физиологических условиях.

П р и м е р 1. Суспензию клеток МТ-4 с концентрацией 300000 клеток в 1 мл среды RPM1 1640 с 10% фетальной сыворотки телят с 300 мкг/мл глутамина, с 100 мкг/мл гентамицина (полная ростовая среда) инкубировали в течение 10 мин с препаратом натриевой соли ДНК (концентрация препарата 25 мкг/мл) при 37^оС. После этого клетки дважды отмывали чистой средой с помощью низкоскоростной центрифуги. Отмытые клетки ресуспендировали в чистой ростовой среде и инкубировали в течение 1 ч в атмосфере с 5% СО₂ и при 98% влажности при 37^оС. Через 1 ч клетки отделяли от культуральной жидкости с помощью низкоскоростного центрифугирования. Полученная культуральная жидкость обладала противирусной резистентностью (жизнеспособность ВИЧ-инфицированных клеток 89,7% синцитиеобразование 0).

П р и м е р 2. Суспензию клеток СЕМ-SS с концентрацией 300000 клеток в 1 мл полной ростовой среды обработали как в примере 1. Полученная культуральная жидкость обладала противовирусной резистентностью (жизнеспособность ВИЧ-инфицированных клеток 91,2% синцитиеобразование 0).

П р и м е р 3. Суспензию клеток МТ-4 с концентрацией 300000 клеток в 1 мл полной ростовой среды инкубировали с комплексом натриевой соли ДНК с никелем. Концентрация внесенного в среду комплекса 25 мкг/мл. Инкубацию вели в течение 40 мин при 37^оС в условиях, аналогичных примеру 1. Все последующие операции полностью соответствовали описанным в примере 1. Полученная культуральная жидкость обладала противовирусной резистентностью (жизнеспособность ВИЧ-инфицированных клеток 83,4% синцитиеобразование 0).

Полученная по предлагаемому способу культуральная жидкость позволяет создать противовирусную резистентность в клетках, обладает высокой эффективностью как в отношении РНК-, так и ДНК-содержащих вирусов (вирус иммунодефицита человека, цитомегаловирус, вирус простого герпеса), не обладает выраженной токсичностью в отношении клеток (табл. 1-3).

Способ создания противовирусной резистентности в отношении как РНК-, так и ДНК-содержащих вирусов, состоящий в инкубировании клеток с биологически активным веществом, основой которого является соль ДНК или ее комплекс с последующим отделением полученной культуральной жидкости от клеток. 3 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВОВИРУСНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, включающий использование солей ДНК, отличающийся тем, что соль ДНК инкубируют с суспензией клеток млекопитающих в питательной среде не менее 10 мин в физиологических условиях с последующим выделением культуральной жидкости, являющейся целевым продуктом.