ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ Российский патент 1996 года по МПК C12N7/00 C12N7/00 C12R1/92 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при производстве вакцин против инфекционной бурсальной болезни (ИББ).

Важным средством борьбы против болезни Гамборо заболевания, причиняющего экономический ущерб за счет гибели 20-40% птиц при остром его течении, снижения привесов и проявления вториных инфекций на фоне иммунодепрессивного воздействия вируса на организм птиц, является вакционопрофилактика.

Специфическая профилактика ИББ проводится с помощью живых и инактивированных вакцин.

Хотя преимущество живых вакцин из-за технологичности в производстве и простоты при употреблении не вызывает сомнения, но иммунная реакция у птиц при их введении не всегда стабильна и во многих случаях вызывает осложнения после вакцинации. Кроме того, при инфекционной бурсальной болезни птиц введение живых вакцин взрослой птице не формирует напряженный иммунитет. Для его создания и сохранения на длительный период у кур-несушек с помощью живых вакцин необходимо ревакцинировать птицу через каждые 2-3 месяца в 3-10-кратной дозе, что связано с возрастными особенностями птицы. Следует учесть также, что подобная передозировка живых вакцин, даже если она для взрослой птицы небезопасна, но с эпизодической точки зрения, в хозяйствах, где на одной площадке выращивают птицу разного возраста, не может быть оправдана. Особенно, в тех случаях, когда в работе используются реактогенные штаммы вируса.

В настоящее время для производства живой вакцины против ИББ предложен аттенуированный штамм "ВНИВИП".

Указанный штамм репродуцируется в первичной культуре ФЭК с биологической активностью 5,5-6,0 1 ТЦД₅₀/мл и используется для специфической профилактики ИББ в живом виде с питьевой водой на молодняке птиц до 60-дневного возраста. Однако после инактивации антигенная активность данного штамма значительно снижается, что не позволяет использовать его в качестве антигена при изготовлении инактивированной вакцины против ИББ.

В зарубежной практике при изготовлении инактивированной вакцины широко используют вирулентные штаммы вируса ИББ.

Известен штамм "52/70", используемый для производства инактивированной вакцины против ИББ.

Однако для культивирования этого штамма требуются чувствительные цыплята 30-40-суточного возраста. В качестве антигена при этом используется гомогенат фабрициевых сумок цыплят, зараженных вирусом ИББ. Вес сумки в данном возрасте не превышает 3-4 г, следовательно, выход вирусной массы ограничен и этот способ получения вирусного антигена непригоден для крупномасштабного производства вакцины.

Кроме того, работа с вирулентным штаммом требует строгого соблюдения ветеринарно-санитарных правил, исключающих рассеивание возбудителя в окружающей среде, т.е. необходимо наличие помещений с боксами и специального оборудования.

Целью настоящего изобретения является штамм вируса ИББ, отвечающий всем требованиям производства как живой, так и инактивированной вакцины, т.е. обладающий высокой биологической, иммуногенной и антигенной активностью в нативном виде и после инактивации, адаптированный к перевиваемой культуре клеток типа ВГИ-70.

Вакцинный штамм "КБК" вируса ИББ адаптирован, поддерживается и титруется в перевиваемой культуре клеток ВГМ-70, под агаровым покрытием образует бляшки 4-5 мм в диаметре, не обладает гемагглютинирующей активностью.

Штамм активно размножается в перевиваемой культуре клеток типа ВГИ-70 с проявлением цитопатического действия вируса через 36-48 ч после заражения в виде дегенерации и округления клеток, появления зернистости. Титр вируса при этом составляет 10^7,5-10^8,0 ТЦД₅₀/мл. Вирус имеет кубическую симметрию, без оболочки с диаметром 60-80 нм и относится к РНК-содержащим вирусам семейства Birniviridal. Вирус устойчив к воздействию температуры 56^оС в течение 30 мин, эфира и хлороформа.

Воздействие 0,1% -ного раствора формальдегида в течение 12 ч вызывает инактивацию вируса, но антигенная активность сохраняется. Внутримышечное и подкожное введение вируса в инактивированном виде цыплятам различного возраста и взрослым курам вызывает образование вируснейтрализующих антител в разведении 1:1024 и вируспреципитирующих антител в разведении 1:64.

При выпойке цыплятам разного возраста неинактивированного вируса в разведении 1: 1000-1: 1500 создает напряженный иммунитет, который обеспечивает защиту цыплят от заражения вирулентным штаммом данного возбудителя.

Для культивирования и титрации вакцинного штамма "КБК" вируса использовали перевиваемые клетки ВГМ-70, которые получили свое происхождение из почки серо-зеленой обезьяны и свободные от контаминации посторонними вирусами или микоплазмами. В качестве ростовой среды использовали минимальную среду "Игла" с прогретой при 56^оС в течение 30 мин 10%-ной сывороткой крупного рогатого скота. В поддерживающей среде содержание сыворотки составляло 2%
Вакцинный штамм "КБК" в отличие от штамма "52/70" культивируется и титруется в перевиваемой культуре клеток типа ВГМ-70, что позволяет накопить вирусную массу в больших объемах с высокой биологической активностью. Титр заявляемого штамма на 2 логарифма выше по сравнению с известным. Антигенная активность штамма "КБК" сохраняется и после инактивации, что позволяет использовать его при изготовлении инактивированной вакцины против ИББ. Введение штамма цыплятам разного возраста в разведении 1:1000-1:1500 не вызывает клинику заболевания, но создает напряженный иммунитет, что характеризует его авирулентный и высокоиммуногенный штамм, пригодный в производстве живой вакцины против ИББ.

Использование: ветеринарная вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм "КБК" вируса инфекционной бурсальной болезни культивируется и титруется на перевиваемой линии клеток ВГМ-70. Штамм активно накапливается в цитоплазме клеток ВГМ - 70 через 36 - 48 ч с титром вируса 10⁷,5 - 10⁸,0 ТЦД₅0/мл. Воздействие 0,1%-ного раствора формальдегида в течение 24 ч вызывает инактивацию вируса. Штамм депонирован в коллекции ГКВ под N 2292. Дача с питьевой водой цыплятам разного возраста в живом виде /разведение 1 : 1000 - 1 : 1500/ и внутримышечное или подкожное введение взрослой птице создает напряженный иммунитет. Вирус свободен от контаминации, специфичен и активен.

ШТАММ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ ПТИЦ ГКВ N 2292, используемый для изготовления живой и инактивированной вакцины против инфекционной бурсальной болезни птиц.