СПОСОБ ПРОГНОЗА МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ ОСТЕОГЕННОЙ САРКОМЫ В ЛЕГКИЕ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/48 G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения прогноза метастазирования остеогенной саркомы, что необходимо для выбора правильного лечения.

Известен морфологический способ прогноза метастазирования остеогенной саркомы, заключающийся в измерении длины опухоли по костномозговому каналу.

Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности в определении прогноза метастазирования остеогенной саркомы.

Целью изобретения является повышение точность способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно известному способу определения прогноза метастазирования остеогенной саркомы, у больного определяют рецепторы андрогенов в цитозольной фракции опухоли, ранее описанным нами микрометодом (Кушлинский Н.Е. и соавт. 1987). Наличие в опухоли рецепторов андрогенов в концентрации >=10 фмолей/мг белка в пробе цитозоля указывает на неблагоприятный прогноз относительно метастазирования остеогенной саркомы. Отсутствие в опухоли рецепторов андрогенов указывает на благоприятное течение и значительно сниженную способность опухоли к метастазированию, а следовательно, и более длительный безметастатический период болезни.

Способ осуществляется следующим образом.

У больных остеогенной саркомой после хирургического удаления опухоли определяют в ней цитоплазматические рецепторы андрогенов. Ткань опухоли (мягкотканный компонент) массой 50-100 мг измельчают в фарфоровой ступке при охлаждении жидким азотом, смешивая с буфером состава: 10 мМ Трис-НСl ("E. Merck", ФРГ), 1,5 мМ ЭДТА ("Sigma", США), 0,5 мМ дитиотрейтол ("Koch-Light Laboratories", Великобритания), 0,03% азид натрия ("E.Merck", ФРГ) рН 7,4 при 20^oС, 10% глицерин (марки о.с.ч. СССР) по объему. После размораживания гомогенат центрифугируют 10 мин при 2500-3000 g. Из надосадочной жидкости получают цитозоль, центрифугируя пробы при 105000 g 1 час на ультрацентрифуге "К-32М" (СССР). При таком методе получения цитозоль содержат не более 0,03% ДНК от общего количества ДНК в данном образце ткани. ДНК определяли методом Peters D. и Dahmus M. (1979). В опытах использовали цитозоль с концентрацией общего белка около 1,0 мг/мл. Белок определяли по методу Лоури.

Цитозоль инкубировали при 2-4^oC в течение 12-14 час с 5альфа -дигидро[1,2,4,5,6,7-3Н]-тестостероном ([3H]ДГТ) фирмы "Amersham" (Великобритания) при концентрации лиганда 10 нМ. Уровень специфического связывания цитоплазматических белков-рецепторов с андрогеном рассчитывали по разности между общим связыванием [3H]ДГТ и неспецифическим связыванием в присутствии 100-кратного избытка немеченого ДГТ фирмы "Koch-Light Laboratories" (Великобритания). С целью ингибирования связывания андрогенов в рецепторами прогестерона во все пробы добавляли 500-кратный избыток триамцинолон ацетонида фирмы "Sigma" (США) (Asseline J. и соавт. 1979). После инкубации цитозоля с лигандами к пробам добавляли равный объем раствора протамина сульфата фирмы "E.Merck" (ФРГ) в буфере (состав буфера см. выше) при концентрации 2 г л-1. Пробы интенсивно встряхивали, инкубировали во льду 10 мин и центрифугировали 10 мин при 3000 g. Надосадочную жидкость удаляли, осадок промывали 2 раза 1,0 мл охлажденного буфера, растворяли в 50 мкл ледяной уксусной кислоты и добавляли 75 мкл 50% водного раствора NaOH. Пробы смывали двукратно по 3,5 мл сцинтилляционной жидкости (СЖ-8) во флаконы для счета. Радиоактивность определяли на спектрометре модели 8100 фирмы "ЛКБ" (Швеция). Эффективность счета по тритию равнялась около 40% Чистота используемого [3H] ДГТ была не менее 98% Очистку лиганда проводили методом тонкослойной хроматографии в системе бензол-ацетон-абсолютный этанол (9:1:0,5 по объему) по методу В.Г. Дегтяря и соавт. (1987). Абсолютное содержание радиоактивного стероида в растворе рассчитывали с учетом удельной радиоактивности лиганда и эффективности счетчика. Метаболизм [3H] ДГТ в условиях определения связывающей способности рецепторов андрогенов в цитозоле остеогенных сарком изучали методом тонкослойной хроматографии (Дегтярь В.Г. и соавт. 1987).

Способ пояснен чертежом.

Пример 1. Больной З. 16 лет, N 87/4643, клинико-рентгенологический диагноз остеогенная саркома большеберцовой кости. В предоперационном периоде специфического лечения не получал. После ампутации конечности диагноз остеогенной саркомы подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Цитоплазматические рецепторы андрогенов в цитозольной фракции остеогенной саркомы не обнаружены. В послеоперационном периоде больной получил 6 курсов монохимиотерапии адриамицином. Длительность безметастатического периода у пациента составила 25 месяцев от начала терапии.

Пример 2. Больной Л. 16 лет, N 86/4130, клинико-рентгенологический диагноз остеогенная саркома большеберцовой кости. В предоперационном периоде специфического лечения не получал. После ампутации конечности диагноз остеогенной саркомы подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Уровень цитоплазматических рецепторов андрогенов в цитозольной фракции остеогенной саркомы равнялся 15 фмолей/мг белка. В послеоперационном периоде больной получал адъювантную полихимиотерапию по схеме САР. Через 3 месяца от начала лечения у больного выявлены метастазы остеогенной саркомы в легких.

Пример 3. Больной Б. 16 лет, N 84/4543, клинико-рентгенологический диагноз остеогенная саркома бедренной кости. В предоперационном периоде специфического лечения не получал. После ампутации конечности диагноз остеогенной саркомы подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Цитоплазматические рецепторы андрогенов в цитозольной фракции остеогенной саркомы не обнаружены. В послеоперационном периоде больному проведено 7 курсов монохимиотерапии адриамицином. В сроки наблюдения до 20 месяцев метастазов в легких не выявлено.

Пример 4. Больной Б. 24 года, N 86/12045, клинико-рентгенологический диагноз остеогенная саркома плечевой кости. В предоперационном периоде специфического лечения не получал. После межлопаточно-грудной ампутации конечности диагноз остеогенной саркомы подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Уровень рецепторов андрогенов в цитозольной фракции остеогенной саркомы равнялся 169 фмоль/мг белка. В послеоперационном периоде больному проводилась полихимиотерапия по схеме САР. Метастазы в легких выявлены через 2 месяца от начала лечения.

Пример 5. Больной Б. 23 года, N 85/1960, клинико-рентгенологический диагноз остеогенная саркома большеберцовой кости. В предоперационном периоде специфического лечения не получал. После ампутации конечности диагноз остеогенной саркомы подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Рецепторы андрогенов в цитозольной фракции остеогенной саркомы не обнаружены. В послеоперационном периоде больному проводилось 7 курсов монохимиотерапии адриамицином. В сроки наблюдения до 26 месяцев метастазов в легких не выявлено.

Пример 6. Больной Г. 22 года, N. 85/14289, клинико-рентгенологический диагноз остеогенная саркома плечевой кости. В предоперационном периоде специфического лечения не получал. После межлопаточно-грудной ампутации конечности диагноз остеогенной саркомы подтвержден данными гистологического исследования опухоли. Уровень рецепторов андрогенов в цитозольной фракции остеогенной саркомы равнялся 10 фмоль/мг белка. В послеоперационном периоде больному проводилась монохимиотерапия адриамицином. Через 4 месяца от начала лечения у больного выявлены метастазы остеогенной саркомы в легких.

Данные, подтверждающие положительный эффект предлагаемого способа.

В описании известного морфологического способа (прототипа) есть цифровые данные, отражающие степень точности прогноза метастазирования остеогенной саркомы. Поэтому авторы настоящего изобретения провели самостоятельно обследование больных известным и предлагаемым способом и сопоставили процент точности прогнозирования сроков появления метастазов остеогенной саркомы в легких предлагаемым способом и прототипом.

Достоверные пределы чувствительности протамин сульфатного метода определения рецепторов андрогенов в цитозольной фракции нормальных тканей и опухолей равняются 10 фмоль/мг белка.

Использование: медицина, онкология, для прогноза метастазирования остеогенной саркомы. Сущность изобретения: определяют в цитозольной фракции опухоли рецепторы андрогенов микрометодом, основанном на осаждении гормон-рецепторного комплекса протамина сульфатом, и при их уровне от 10 и выше фмоль/мг белка прогнозируют более раннее гематогенное метастазирование остеогенной саркомы в легкие независимо от вида адъювантной химиотерапии в послеоперационном периоде. 1 ил.

Способ прогноза метастазирования остеогенной саркомы в легкие, включающий исследование опухолевой ткани, отличающийся тем, что из мягкотканного компонента опухоли, удаленной при хирургическом вмешательстве, получают цитозоль, определяют в нем рецепторы андрогенов и при их уровне от 10 х 10^-12 моль/мк белка и выше прогнозируют метастазирование остеогенной саркомы в легкие независимо от вида альюватной химиотерапии в послеоперационном периоде.