СПОСОБ ОЦЕНКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ДОНОРСКОЙ РОГОВИЦЫ Российский патент 1996 года по МПК A61F9/00 A61F9/07 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии, и может быть использовано как способ оценки жизнеспособности донорской роговицы для выполнения последующей сквозной каратопластики зрительных функций и для консервации.

Известен способ определения жизнеспособности донорской роговицы, основанный на изучении плотности эндотелиальных клеток на аутопсированном донорском глазу с помощью зеркальной микроскопии (Тезисы докл. VI Всесоюзного съезда офтальмологов, т. VI, M. 1985, c. 15 16).

Cущественным недостатком этого способа можно считать отсутствие в его основе патофизиологической направленности в определении жизнеспособности донорских тканей, зависящей от энерегического потенциала клеток.

Задачей изобретения является разработка патофизиологически направленного, неизвазивного, быстрого и простого в выполнении способа определения жизнеспособности донорских тканей для выполнения кератопластики и других видов реконструктивных операций на глазном яблоке и консервации.

Техническим результатом является уменьшение количества случаев отторжения и болезни трансплантата, повышение эффективности хирургического лечения роговичной патологии.

Технический результат достигается тем, что на аутопсированный донорский глаз инстиллируют 2 3 капли 0,1% раствора адреналина гидрохлорида и осуществляют осмотр зрачка для выявления начала его деформация в сторону мидриаза, и если зрачок расширился до 5 минут, то роговица считается жизнеспособной, если от 5 до 10 минут то умеренной жизнеспособности, если от 10 до 15 минут то условно жизнеспособной; при отсутствии расширения зрачка до 15 минут роговица считается нежизнеспособной.

Способ основан на методе физиологической пробы и относится к группе фармакологических тестов. В его основу положен принцип выявления доли нераспавшегося аденозинтрифосфата (АТФ) после смерти донора в клеточных популяциях тканей переднего отрезка глаза путем воздействия адреналина на аденилатциклазную систему миоцитов мышцы дилятатора зрачка. Раствор адреналина гидрохлорида взаимодействуя с адренорецепторными мышцами, дилятатора зрачка, активизирует фермент аденилатциклазу, которая посредством воздействия на АТФ приводит в движение миофибрилярный аппарат клети. Причем для запуска аденилатциклазной системы адреналин _→ β -адренорецептор аденилатциклаза _→ АТФ циклический аденозинменофосфат (ЦАМФ) -L сокращение миофибриллы / необходима определенная минимальная квота АТФ. Выявлено, что в зависимости от остаточного количества АТФ в миоците радужки, время сокращения миофибрилл (мидриаза) различно. Причем, в отличие от классических биологических проб, в основном ориентированных на качественное выявление физиологически активного вещества, в предложенном варианте пробы сделана попытка количественно оценить результаты исследования.

Минимальный латентный период (от момента закапывания до начала мидриаза) пробы соответствует 5 минутам, а максимальный 30 минутам. Продолжительность минимального латентного периода (5 минут) соответствует времени всасываемости, распределения и воздействия раствора адреналина гидрохлорида на миоцит радужки при условии наличия максимального количества нераспавшегося АТФ. В случае увеличения продолжительности латентного периода более 5 минут, остаточное количество АТФ прямо пропорционально времени пробы.

На основании биофизического (ядерно-магнитно-резонансная спектроскопия по фосфору -31) и биохимического (энзиматическая спектрофотометрия) методов определения остаточного количества АТФ в донорских тканях радужки и роговицы трупного глаза и сопоставления с полученными результатами адреналиновой пробы, а также клинических наблюдений за приживанием сквозного трансплантата роговицы у человека, выявлено, что степени А соответствует остаточное количество АТФ, условно взятое за 85 100% и полноценное приживление трансплантата; степени В соответствует остаточное количество АТФ 50 84% и достаточно полноценное приживление трансплантата; степени С соответствует остаточное количество АТФ 25 49% и клинически неполноценное ранее полупрозрачное приживление трансплантата. При отрицательной пробе количество АТФ составляло менее 25% и при использовании этого материала в клинике во всех случаях имело место раннее, до 14 дня помутнение трансплантата.

Способ осуществляется следующим образом: аутопсированный глаз человека после доставки в клинику в режиме гипотермии (при температуре +4 -10^oC) выдерживается при комнатной температуре в течение 20 30 минут, до установления в тканях глаза температуры 20±2^oC. Далее осуществляется биомикроскопический осмотр роговицы и переднего глаза на предмет прозрачности роговицы, исключения патологических изменений и перенесенных операций на переднем отрезке. Затем, после изучения исходных размеров и формы зрачка на поверхность роговицы инстиллируют 2 3 капли официального 0,1%-го раствора адреналина гидрохлорида. Отмечается исходное время пробы. В интервалы времени 5, 10, 15 минут осуществляют осмотр состояния зрачка под щелевой лампой. В случае выявления начала деформации зрачка в сторону мидриаза (изменение формы и размеров хотя бы по одному из меридианов) реакцию считают положительной, а время реакции законченным. Если начало реакции зрачка на адреналин составляет 5 минут проба считается резко положительной и соответствует степени А жизнеспособности клеток тканей переднего отрезка глаза (в том числе и роговицы); если время реакции составляет 10 минут проба расценивается как положительная и соответствует степени А; в случае времени реакции 15 минут проба считается условно положительной и соответствует степени С. При отсутствии реакции зрачка в интервалах до 15 минут, проба считается отрицательной, а донорский материал энергетически нежизнеспособным.

Пример 1.

Донор, труп мужского пола, 42 лет со сроком после смерти 16 часов, скончавшийся по поводу множественных сочетанных ранений в автодорожной катастрофе.

После предварительного биомикроскопического осмотра переднего отрезка глаза на поверхность роговицы инстиллируют 2 капли 0,1% раствора адреналина гидрохлорида. Начало деформации зрачка в сторону мидриаза произошло до 5 минут, проба резко положительная (степень А жизнеспособности донорского материала). Произведена сквозная субтотальная кератопластика этим донорским материалом пациенту Н. 51 года с диагнозом: вторичная эпиталиально-эндотелиальная дистрофия роговицы II степени, артифакия. В клинике получена ранняя адаптация к условиям реципиента: своевременная эпитализация поверхности роговичного трансплантата, отсутствие перикорнеальной инъекции. В течение всего периода наблюдения полное прозрачное приживление и высокие оптические функции (срок наблюдения 4 года).

Пример 2.

Донор, труп мужского пола, 35 лет, со сроком после смерти 13 часов, скончавшийся от множественных сочетанных травм в результате падения с высоты. Осуществление пробы согласно примеру 1. Начало деформации зрачка в сторону мидриаза произошло до 10 минут, проба умеренно положительная (степень В жизнеспособности донорского материала).

Произведена сквозная субтотальная кератопластика этим донорским материалом пациенту С, 54 года с диагнозом: вторичная эпителиально-эндотелиальная дистрофия I степени, артифакия).

В клинике получена удовлетворительная в ранние сроки адаптация донорского трансплантата к условиям реципиента:эпителизация в срок, незначительная периокорнеальная инъекция. В срок наблюдения 3 года отмечено полное прозрачное приживление и достаточно высокие оптические функции.

Пример 3.

Донор, труп мужского пола, 38 лет, со сроком после смерти 14 часов, скончавшийся от геморрагического шока при колоторезанной ране сердца.

Осуществление пробы согласно примеру 1. Начало деформации зрачка в сторону мидриаза произошло до 15 минут, проба условно положительная (степень С жизнеспособности донорского материала), Произведена сквозная субтотальная кератопластика пациенту К, 54 лет, с диагнозом: вторичная эпителиально-эндоталиальная дистрофия роговицы I-II степени, артифакия.

В клинике наблюдалась ранняя неудовлетворительная адаптация донорского трансплантата роговицы. С первых суток имел место выраженный отек стромы роговицы, наличие грубой складчатости задней пограничной мембраны, матовость заднего эпителия роговицы. На фоне отсутствия перикорнеальной инъекции полная эпителизация роговицы определялась лишь к 10 дню после операции. Пациент выписан на 14 сутки с полупрозрачным состоянием трансплантата (рельеф радужки практически не различим). В контрольный срок наблюдения (через 3 месяца) глаз спокоен, сосудистая инъекция отсутствует, эпителизация роговицы полная, трепанационный рубец нежный, обвивной шов состоятелен, трансплантат мутный, в оптическом срезе утолщен, рельеф радужки не просматривается. Пальпаторно внутриглазное давление соответствует норме. Оптические функции отсутствуют.

Пример 4.

Донор, труп мужского пола, 40 лет, со сроком после смерти 11 часов, скончавшийся от ишемической болезни сердца, декомпенсации сердечной деятельности. Осуществление пробы на жизнеспособность согласно примеру 1. Реакция зрачка в интервале до 15 минут отсутствовала. Проба отрицательная (донорский материал энергетически нежизнеспособен).

Данный материал в клинике для целей сквозной кератопластики не использовался в связи с неудовлетворительными клиническими результатами при использовании материала с условной жизнеспособностью (адреналиновый тест степени С).

Использование: в офтальмологии, при определении жизнеспособности донорской роговицы. Сущность изобретения: при определении состояния тканей аутопсированного глаза предварительно при температуре тканей глаза 20±2^oC инстиллируют на роговицу 2 - 3 капли 0,1% раствора гидрохлорида адреналина, а затем определяют продолжительность времени, предшествующую началу мидриаза и при ее величине, равной 5 минутам, оценивают роговицу как высоко жизнеспособную, 5 - 10 минутам - как умеренно жизнеспособную, 10 - 15 минутам - как условно жизнеспособную, а при отсутствии мидриаза до 15 минут - как нежизнеспособную.

Способ оценки жизнеспособности донорской роговицы путем определения состояния тканей аутопсированного глаза, отличающийся тем, что предварительно при температуре тканей глаза 20±2^oC инстиллируют на роговицу 2 3 капли 0,1% -ного раствора гидрохлорида адреналина, а затем определяют продолжительность времени, предшествующую началу мидриаза, и при ее величине, равной 5 мин, оценивают роговицу как высоко жизнеспособную, 5 10 мин как умеренно жизнеспособную, 10-15 мин как условно жизнеспособную, а при отсутствии мидриаза до 15 мин как нежизнеспособную.