СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЦЕЛИАКИИ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, гастроэнтерологии и представляет собой способ диагностики целиакии. Данный способ может быть применен для диагностики целиакии при проведении нагрузочных тестов и оценки эффективности элиминационной диеты, являющейся основой лечения.

Характеристика аналогов.

Известен способ диагностики целиакии, заключающийся в оценке высоты ворсинок, глубины крипт, подсчете количества плазмоцитов и межэпителиальных лимфоцитов в слизистой оболочке тощей кишки до и после лечения. В тех случаях, когда эти изменения бывают неубедительными, и в сомнительных случаях применяют нагрузочные пробы с последующим гистологическим исследованием биоптатов после появления симптомов заболевания или не ранее чем через 2 года после нагрузки. Иногда атрофические изменения в слизистой оболочке обнаруживаются и через 72 месяца, что значительно затягивает диагностику заболевания.

Прототипом данного изобретения является определение количества плазмоцитов в слизистой оболочке тощей кишки, число которых увеличено до лечения и после назначения лечения постепенно снижается до нормальных величин. Для диагностики целиакии после определения количества плазмоцитов до лечения повторные биопсии проводят не ранее, чем через 6 мес-1 год от начала терапии. При отсутствии убедительных результатов возникает необходимость повторных биопсий, обычно через 2 года после начала лечения, но у некоторых больных целиакией увеличение количества плазматических клеток обнаруживают и через 3,5 года. Аналогичная длительность морфологических изменений в слизистой оболочке тощей кишки обнаружена и при проведении нагрузочных тестов.

Недостатком данного метода является не только длительность проводимого исследования, необходимость многократного взятия биопсий, но и возникновение при проведении нагрузочных тестов тяжелых симптомов заболевания, находящихся в прямой зависимости от длительности нагрузки, приводящих к выраженным морфологическим изменениям.

Целью изобретения является сокращение времени диагностики целиакии в 2-3 раза и уменьшение числа взятия повторных биопсий.

Цель достигается тем, что вместо подсчета количества плазматических клеток определяют количество дегранулированных и недегранулированных тучных клеток и вычисляют коэффициент дегрануляции соотношение количества дегранулированных к количеству недегранулированных клеток.

Для определения количества тучных клеток кусочки слизистой оболочки тощей кишки фиксировали в растворе Карнуа, окрашивали 0,5%-ным толуидиновым синим при pH 0,5 в течение 30 мин.

Нами исследовано 26 биоптатов тощей кишки. Контрольную группу составили 8 человек у которых в процессе гастроэнтерологического обследования со стороны желудочно-кишечного тракта изменений не обнаружено. Во вторую группу вошло 9 детей, больных целиакией, до лечения и 9 детей, больных целиакией, через год после назначения лечения 3-я группа.

Определение количества тучных клеток показало, что количество их повышено у больных целиакией до назначения лечения (фиг.1). Коэффициент дегрануляции тучных клеток у этих больных равен 4,15±0,5 и через год после назначения лечения он не имеет достоверных различий от показателей в контрольной группе (фиг.2).

Определение высоты ворсинок, глубины крипт, количества межэпителиальных лимфоцитов и плазматических клеток у этих же больных показало, что до назначения диеты слизистая оболочка тощей кишки больных целиакией имела все характерные для этого заболевания изменения (достоверное уменьшение высоты ворсинок, увеличение глубины крипт, увеличение количества межэпителиальных лимфоцитов и плазмоцитов, фиг.3 6), в то время как после назначения диеты через год эти изменения стали менее выраженными, однако они достоверно отличались от показателей в контрольной группе.

С другой стороны, определение общего количества тучных клеток показало, что их количество увеличивается в остром периоде целиакии и достоверно уменьшается после назначения диеты. Уменьшение общего количества тучных клеток происходит за счет дегранулированных форм (фиг.1).

Таким образом, применение коэффициента дегрануляции количество дегранулированных клеток: количество недегранулированных помогает в более ранние сроки оценить эффективность проводимого лечения и повысить точность диагностики.

Пример конкретного выполнения. Больная К. Лена, 3 года, больна целиакией с 1 года 3 месяцев. В клинику поступила с жалобами на длительную диарею, снижение аппетита, потерю в массе тела, вздутие живота, вялость, слабость, искривление голеней.

Ребенок от второй беременности, протекавшей с токсикозом во второй половине беременности. Роды в срок. Вес при рождении 3.200, длина 53 см. На естественном вскармливании до 10 месяцев. Глютенсодержащие продукты введены в 8 месяцев. С 1 г. 3 мес. до поступления в клинику неоднократно лечилась по поводу диареи неустановленной этиологии. Антибактериальная терапия положительного эффекта не давала.

Состояние при поступлении тяжелое. Вес 10.200, рост 90 см. Ребенок вялый, при ходьбе жалуется на боль в ногах. Кожа чистая, сухая. Тургор ткани снижен. Подкожно-жировая клетчатка развита плохо. Лимфатические узлы не увеличены. Голени ног искривлены. Дыхание везикулярное. Тоны сердца приглушены ритмичные. Живот увеличен за счет вздутия кишечника, снижения тонуса мышц передней брюшной стенки. Печень +2,0 +1,5 +3,0. Стул 4 6 раз в день, обильный непереваренный.

В общем анализе крови Нв-80 г/л, Эр-3,53•10¹², Л-6,0•10⁹, C-31% Л-59% М-10% СОЭ-8 мм/ч.

Общий анализ мочи, анализ мочи по Зимницкому не изменены.

Биохимический анализ крови: билирубин 9,2 мкмоль/л, АЛТ 0,2 нмоль/л, АСТ-0,4, тимоловая проба 4, Са-1,63 ммоль/л, Fe 15,2 ммоль/л, ХОЛ 3,1 ммоль/л, остаточный азот 18,3 ммоль/л. Общий белок 55 г/л, альбумины 51,2, глобулины 48,5, α₁ 6,0 г/л, α₂ 7,2 г/л, β 12,0 г/л, g 16,1 г/л.

Копрология большое количество непереваренной клетчатки и зерен крахмала.

Биопсия слизистой оболочки тощей кишки была проведена до и после назначения аглютеновой диеты. Результаты приведены в таблице.

Как видно из таблицы, через 6 месяцев после назначения лечения общее количество тучных клеток у больной снизилось и коэффициент дегрануляции не превышал этот показатель в контрольной группе, в то время как высота ворсинок, глубина крипт, количество межэпителиальных лимфоцитов и плазмоцитов оставалось повышенным.

Положительный эффект заключается в сокращении времени диагностики в 2-3 раза; повышении точности диагностики при уменьшении количества повторных биопсий и сокращении длительности проведения нагрузочных проб.

На фиг. 1 показано количество тучных клеток в слизистой оболочке тощей кишки больных целиакией до и после назначения лечения (без штриховки - дегранулированные со штриховкой недегранулированные клетки): 1 контрольная группа 8 человек, 2 больные целиакией до назначения лечения 9 детей, 3 - больные целиакией после назначения лечения через 1 год 9 человек.

Коэффициент дегрануляции тучных клеток у больных целиакией до и после лечения показан на фиг.2: 1 контрольная группа 8 человек, 2 больные целиакией до назначения лечения 9 детей, 3 больные целиакией через год после назначения лечения 9 человек.

Изменение высоты ворсинок у больных целиакией до и после лечения показано на фиг.3: 1 контрольная группа 8 человек, 2 больные целиакией до назначения лечения 9 детей, 3 больные целиакией через год после назначения лечения 9 человек.

На фиг. 4 изображена глубина крипт слизистой оболочки тощей кишки до и после назначения лечения больным целиакией: 1 контрольная группа 8 человек, 2 больные целиакией до назначения лечения 9 человек, 3 больные целиакией через год после назначения лечения 9 детей.

Количество межэпителиальных лимфоцитов показано на фиг.5 в процентах к количеству эпителиоцитов: 1 контрольная группа 8 детей, 2 больные целиакией до назначения лечения 9 детей, 3 больные целиакией через год после назначения лечения 9 человек.

На фиг. 6 показано содержание плазматических клеток в объемных долях в процентах у больных целиакией до и после лечения: 1 контрольная группа 8 человек, 2 больные целиакией до лечения 9 человек. 3 больные целиакией через год после назначения лечения 9 детей.

Использование: в медицине, в частности, в гастроэнтерологии. Сущность изобретения: в биоптате слизистой оболочки тощей кишки до и после лечения гистологически определяют количество дегранулированных и недегранулированных форм тучных клеток, рассчитывают отношение первого показателя ко второму и при его снижении в 2 раза относительно исходного уровня диагностируют целиакию. Способ позволяет с помощью определения коэффициента дегрануляции тучных клеток оценить эффективность проводимого лечения, повысить точность диагностики, сократить время, необходимое для диагностики в 2-3 раза. 6 ил., 1 табл.

Способ диагностики целиакии путем гистологического исследования биоптата слизистой оболочки тощей кишки до и после лечения, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа и ранней диагностики, определяют в биоптате количество дегранулированных и недегранулированных форм тучных клеток, рассчитывают отношение первого показателя к второму и при его снижении в 2 раза относительно исходного уровня диагностируют целиакию.