ПРОТИВОВИРУСНЫЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 1996 года по МПК A61K47/38 A61K47/38 A61K47/36 A61K38/04 A61K35/84 

Изобретение относится к противовирусным средствам, применяющимся в ветеринарии.

Известны противовирусные препараты специфические сыворотки, содержащие антитела к вирусным антигенам. Сыворотки используются в ветеринарии. Недостатком этих препаратов является то, что они легко инактивируются в силу своей белковой природы, поэтому требуют специальных условий хранения и высокой степени очистки; имеют небольшой срок хранения (до 1 года); введение этих препаратов осуществляется инъекцией, что неудобно при большом количестве животных. Сыворотки эффективны при использовании на начальных стадиях инфекции, применение их при проявлении уже общих клинических признаков вирусного заболевания часто не оказывает существенного влияния на течение болезни. Сыворотки для лечения папилломатозного стоматита не производятся.

Известно также противовирусное средство полипренилфосфат, полученное химическим путем, которое применяют в ветеринарии против вирусов чумы плотоядных и энтерита [1]
Недостатком этого средства является то, что данный препарат, как и сыворотки, вводят инъекций, полипренилфосфат не используют при папилломатозе.

Прототипом нашего противовирусного препарата является лекарственное средство JLS-18 [2] которое используется в медицине для лечения инфекций, вызванных вирусами группы герпес (вирус простого герпеса тип 1 и 2, цитомегаловирус, вирус опоясывающего лишая). Препарат и способ его получения описаны в европейской заявке N 437346. Препарат JLS-18 получали по схеме: водная экстракция из мицелия гриба Lentinus edodes, выращенного на твердом растительном субстрате; фракционирование высаливанием; осаждение органическим растворителем; ионообменная хроматография; гидрофобная хроматография; гель-фильтрация.

Препарат JLS-18 представляет собой комплексное соединение, состоящее из пептидов 10 20% имеющих аминокислотный состав, вес. асп 15,0-16,5; тре 6,5-7,2; сер 6,5-7,3; глу 15,0-17,5; про 6,8-8,0; гли 9,3-11,0; ала 7,3-8,8; вал 5,9-6,5; мет 0,3-0,7; илей 3,8-4,9; лей 4,9-6,6; тир 1,1-1,5; фен 3,0-4,6; лиз 3,6-4,8; гис 2,3-2,9; агр 0,7-1,1; полисахаридов 15-30% имеющих углеводный состав, в вес. глюкоза 35-55; ксилоза 29-41; галактоза 2-7, арабиноза 12-20, манноза 1-4 и модифицированного водорастворимого лигнина в количестве 65-75%
Препарат JLS-18 не применялся в ветеринарии, не известно его действие на вирусные заболевания животных.

Задачей изобретения является получение противовирусного препарата для лечения инфекционных вирусных заболеваний у животных на основе растительного сырья, отличающегося более широким спектром действия, высокой эффективностью, стабильностью, удобным способом введения (через рот), простым и экологически чистым способом производства.

Сущность изобретения состоит в том, что получено новое противовирусное средство Лигавирин для лечения инфекционных заболеваний у животных: чумы плотоядных, энтерита, гепатита и папилломатозного стоматита.

Лигавирин представляет собой комплексное соединение, состоящее из пептидов в количестве 12 21% имеющих аминокислотный состав, вес. асп 14,8 20,5; тре 4,3 5,3; сер 4,8 5,2; глу 17,4 19,1; про 6,2 7,1; гли 5,5 10,3; ала 5,9 6,4; вал 5,3 5,8; мет 0,8 1,1; илей 3,8 4,6; лей 8,0 - 8,8; тир 1,1 1,4; фен 5,1 5,6; лиз 2,0 2,2; гис 3,0 3,3; арг 3,9 - 4,3; полисахаридов в количестве 3 5% имеющих углеводный состав, в вес. глюкоза 15 40, ксилоза 60 80, рамноза 2 4 и модифицированного водорастворимого лигнина 75 85%
Лигавирин получен путем экстракции слабощелочным водным раствором растительного сырья (опилки, солома, лузга подсолнуха), подвергнутого предварительно частичной биодеградации и модификации ксилотрофными грибами Pleurotus ostreatus, с последующим кислотным осаждением, промывкой водой и сушкой при комнатной температуре.

Биологические характеристики препарата лигавирин.

Пример 1. Активность лигавирина в отношении вируса Ауески.

Исследования проводили на культуре клеток Vero. После промывки солевым фосфатным буфером клетки инкубируют с вирусом в количестве 100-150 ВОЕ на флакон в течение 1,5 часов при комнатной температуре. Затем раствор вируса удаляют и добавляют 1 мл свежей среды без препарата, или содержащей лигавирин при концентрациях от 20 до 200 мкг/мл, и продолжают культивировать в течение 48 часов. В контрольном опыте на цитотоксичность лигавирина вирус не добавляют.

Лигавирин полностью ингибировал цитопатическое действие вируса при 200 мкг/мл и сильно ингибировал (около 50%) при 100 мкг/мл. Препарат не оказывал какого-либо действия на рост клеток даже при концентрации 1000 мкг/мл.

Пример 2. Терапевтическая активность лигавирина при вирусных заболеваниях животных.

Сухую (жидкую) форму препарата растворяют (разводят) в горячей воде, охлаждают и назначают перорально в виде водного раствора один раз в течение дня в дозе 1 мг/кг живого веса больным собакам с клиническим диагнозом: чума плотоядных, парвовирусный энтерит или инфекционный гепатит. Курс лечения до 5 дней.

Препарат был испытан более чем на 200 собаках. Полное выздоровление наступило у всех собак, за исключением отдельных случаев при чумке, когда препарат назначался после развития паралича конечностей. При отсутствии лечения смертельный исход наступал в 100% случаев.

При лечении папилломатозного стоматита препарат, одновременно с пероральным введением в дозе 1 мг/кг животного, используют местно смачивают пораженные места. Курс лечения 3 4 дня.

У всех собак множественные новообразования после проведенного курса лечения высыхали и отпадали. При отсутствии лечения заболевание может продолжаться несколько месяцев. Единственный альтернативный способ лечения папилломатоза инъекции новокаина с одновременным хирургическим удалением крупных папиллом метод трудоемкий и требующий больших затрат.

Таким образом, препарат лигавирин является высокоэффективным противовирусным средством, обладающим выраженной ингибирующей активностью в отношении вирусов чумы плотоядных, энтерита и гепатита, папилломатозного стоматита, болезни Ауески. Препарат не обладает токсичностью in vitro даже при концентрации 1 мг/мл и не токсичен in vivo.

Препарат стабилен, в сухой форме может храниться неограниченно долгое время, сохраняет активность даже при растворении в кипящей воде.

Все указанное позволяет сделать вывод о том, что лигавирин является высокоэффективным средством для борьбы с вирусными инфекциями, в частности, вызванными вирусами чумы плотоядных, энтерита, инфекционного гепатита, а также лучшим средством по эффективности и простоте применения для лечения папилломатозного стоматита.

Литература
1. Патент Российской федерации N 2005475, Противовирусное средство, A 61 K 31/21.

2. Заявка ЕР N 0437346, Antiviral fraction of aqueous Lentinus edodes extract, A 61 K 35/84.

Использование: препарат лигавирин может быть использован в ветеринарии для лечения вирусных инфекций, вызванных вирусами чумы плотоядных, энтерита, инфекционного гепатита, а также для лечения папилломатозного стоматита. Сущность изобретения заключается в том, что препарат лигавирин получают на основе растительного сырья (опилки, солома, лузга подсолнуха), подвергнутого предварительной модификации ксилотрофными грибами Pleurotus ostreatus с последующим осаждением, промывкой и сушкой. Лигавирин представляет собой комплексное соединение, состоящее из пептидов в количестве 12 - 21%, имеющих аминокислотный состав, вес.%, асп 14,8 - 20,5; тре 4,3 - 5,3; сер 4,8 - 5,3; глу 17,4 - 19,1; про 6,2 - 7,1; гли 5,5 - 10,3; ала 5,9 - 6,4; вал 5,3 - 5,8; мет 0,8 - 1,1; илей 3,8 - 4,6; лей 8,0 - 8,8; тир 1,1 - 1,4; фен 5,1 - 5,6; лиз 2,0 - 2,2; гис 3,0 - 3,3; агр 3,9 - 4,3; полисахаридов в количестве 3 - 5%, имеющих углеводный состав, вес.%: глюкоза 15 - 40, ксилоза 60 - 80, рамноза 2 - 4 и модифицированного водорастворимого лигнина остальное.

Противовирусный препарат для лечения инфекционных заболеваний, включающий активно действующее вещество на основе растительного сырья, отличающийся тем, что в качестве активно действующего вещества он содержит пептиды, имеющие аминокислотный состав, мас.

Асп 14,8 20,5
Тре 4,3 5,3
Сер 4,8 5,3
Глу 17,4 19,1
Про 6,2 7,1
Гли 5,5 10,3
Ала 5,9 6,4
Вал 5,3 5,8
Мет 0,8 1,1
Илей 3,8 4,6
Лей 8,0 8,8
Тир 1,1 1,4
Фен 5,1 5,6
Лиз 2,0 2,2
Гис 3,0 3,3
Арг 3,9 4,3
полисахариды, имеющие углеводный состав, мас.

Глюкоза 15 40
Ксилоза 60 80
Рамноза 2 4
и модифицированный водорастворимый лигнин при следующем соотношении компонентов, мас.

Пептиды 12 21
Полисахариды 3 5
Модифицированный водорастворимый лигнин Остальное