СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ТКАНЕЙ МОЗГА Российский патент 1997 года по МПК A61K35/30 

Изобретение относится к ветеринарной медицине и может использоваться для получения других биостимулирующих веществ с целью лечения, профилактика и иммунокоррекция животных и человека, а также для изготовления бальзамов, линиментов, кремов, лосьонов и др.

Известны различные способы получения и консервирования тканевых препаратов. Так, М.Б. Тушнов (1926) предложил получение биологически активных веществ путем обработки тканей 0,5%-ным раствором соляной кислоты и 0,5%-ным раствором пепсина с последующим их хранением в хлороформе. Эти препараты известны под названием "лизаты Тушнова".

В. П. Филатов (1940, 1948) разработал теорию и практику получения и применения биогенных стимуляторов при охлаждении изолированных тканей до 2.4^oC воздействием лучами Рентгена и последующим автоклавированием.

Н. И. Краузе (1944, 1950) рекомендовал консервировать ткани хлороформом, с целью их последующего применения для рассасывания рубцовой ткани.

Н.С. Харченко с соавторами (1947) рекомендовал получение тканевых биогенных стимуляторов путем высушивания, пропуская через кровеносные сосуды органа нагретый воздух до 37.38^oC при помещении органа в камере с температурой 40^oC.

А. В. Дорогов (1950) разработал технологию получения препаратов АСД (антисептик стимулятор Дорогова) путем глубокой термической обработки тканей, который обладает сильным биостимулирующим свойством и широко применяется в практике, однако, обладает сильным неприятным запахом.

В.П. Багинскас (1960) предложит способ получения сухих тканевых препаратов из селезенки, печени надпочечников, крови, эмбрионов, которые выдерживают при температуре 1.4^oC в течение 4-6 cуток. После чего, полученные ткани измельчают и помещают в котел и сушат при температуре 90.100^oC в течение 1ч с подключением вакуумного устройства до 0,5 атм. Высушенную ткань измельчают в шаровой мельнице.

М.В. Королев (1967) рекомендует высушивать сырье из тканей, после выдерживания в холодильнике 5-7 cуток, в вакуумном котле с мешалкой при температуре 50^oС и вакууме 650-700 мм рт.ст. затем досушивать в сушильном шкафе.

Г.И. Голубев и Т.Е. Калмыков (1952) разработали получение аминапептида-2 путем ферментативного гидролиза крови.

А. М. Смирнов предложил готовить тканевые препараты путем действия на ткани натуральным желудочным соком и хинозолом (1970).

В. М. Ковбасенко (1971) предложит использовать препараты матки, эмбрионы и различные конфискаты при убое скота, промывая их 0,5%-ным раствором хлорамина и консервируя при температуре 2.3^oC, 5-6 cуток и высушивать в горизонтальных вакуумных котлах при температуре 80.90^oC в течение 6-7 ч с последующим измельчением.

Все эти способы отличаются только процентным соотношением различных тканей и связаны с действием высоких температур, при которых разрушаются термолабильные составные элементы.

А.М. Воротилин, М.М. Лоевский и Н.Р. Гусева (1982, авт. св. SU 1165401А) разработали способ получения эритроцитарной массы для трансфузии путем замораживания с криоконсервантом на основе пропиленгликоля и последующего размораживания, отмывания и помещением полученной эритроцитарной массы в трансфузионную среду.

В. И. Луговой, Е.Л. Воловельская и А.М. Грек (авторское свидетельство SU 1192828 А, 1983) разработали способ консервирования сыворотки крови путем замораживания и добавления полиэтиленгликоля до конечной концентрации 5-10%
Г. А. Вилков и А. П. Сиякина, Э.С. Гульяни и Л.И. Межова (авт. св. SU 602182, 1978) разработали способ получения вещества из мозговой ткани, регулирующего водно-солевой обмен. В качестве исходной ткани авторы использовали субкоммисуральный орган мозга, к которому перед иммунизацией добавляли гомогенат смещенной с адъювантом Фрейнда. Полученное вещество вводили испытуемым животным и определяли его биологическую активность по регуляции водно-солевого обмена (прототип).

А. Г. Лютов, С. А. Eникеева, В.А. Алешкин и Ф.З. Хакимова (авт. св. SU 1362478 AI, 1986) разработали способ получения препаратов крови путем обработки этанолом при низких температурах и разрушения гемпигментов перекисью водорода в присутствии каприлоита натрия. В качестве источника сырья рекомендовали использовать отходы при производстве альбумина из гемолизированной крови.

В.А. Фигурнов и Е.В. Фигурнова предложили способ получения порошка фибрина (авт. св. SU 1811845 AI, 1990) путем высушивания, измельчения и стерилизации. Фибрин получали из сгустков крови путем высушивания при 35.40^oC в течение 20-24 ч. Стерилизацию проводили при температуре 120^oC и атмосферном давлении 2,5 атм. в течение 30 мин.

Однако имеющиеся предложения различных способов еще не являются окончательным решением проблемы получения активных экологически чистых препаратов из тканей, не подлежащим дальнейшему совершенствованию. Нет способов с комплексным сочетанием действия на ткани различных факторов:
охлаждение переживающих тканей с целью мобилизации и синтеза биологически активных веществ;
ультрафиолетовое облучение и получение высокоактивных пептидов;
сублимация ферментативный процесс, парабиотическое переживание тканей клеток и их органоидов, как заключительный этап биостимуляции. Все перечисленные процессы активации тканей в оптимальном сочетании составляют сущность предложенного способа.

Предлагаемый способ получения биологически активных препаратов отличается простотой получения высокоэффективных биологических препаратов путем комбинированного воздействия на изолированные ткани в следующей последовательности: охлаждение, дозированное облучение с ультрафиолетовым спектром и сублимация.

Известно, что действие ультрафиолетовых лучей очень сложно и требует подбора оптимальных параметров по интенсивности, длительности действия, расстояния от облучателя, толщины и проницаемости обрабатываемого материала. Кроме того, исходный материал имеет большую вариабельность по содержанию биологически активных веществ в зависимости от действия экзогенных и эндогенных факторов, биоритмических, трофических, геофизических и других факторов.

Цель изобретения получение более эффективного биологического стимулятора, экологически чистого, из натуральных тканей, без добавления химических веществ, путем действия естественных физических факторов в оптимальном режиме и при последовательном действии охлаждения, облучения с ультрафиолетовым спектром и сублимации.

Предложенный способ получения биологически активных препаратов включает следующие процессы.

Первый этап получение свежего биогенного материала и быстрого охлаждения до 2.3^oC в термостатическом контейнере, выдерживание охлажденной ткани в течение 24.48 ч. При этом создаются парабиотические условия, обеспечивающие синтез жизненно важных веществ в тканевой массе, что повышает активность тканей в среднем на 15% от общей активности препарата. После предварительного охлаждения производится гомогенизация и разбавление стерильным изотоническим раствором до необходимой текучести и фильтрация гомогенизата от плотных остатков тканей через несколько слоев стерильной марли.

Второй этап облучение, включая ультрафиолетовый спектр лучей. Облучение выполняется при использовании ртутно-кварцевых горелок путем пропускания гомогенизированной массы через двойной цилиндр из кварцевого стекла при расстоянии между стенками 1,8.2 мм и вставленной в нее кварцевой бактерицидной лампой. При мощности лампы 60 Вт скорость движения гомогенизата должна быть 200 мл в 1 мин. Более быстрое или более медленное пропускание через аппарат снижает степень активации. Этот способ воздействия обеспечивает стерилизацию и активацию препарата не менее чем на 70% от общей его активности.

Третий этап. После облучения полученная масса расфасовывается в стерильные флаконы и подвергается сублимационной сушке. Сублимация обеспечивает повышение активности в среднем на 15% и в результате обезвоживания создает условия для длительного хранения.

Сублимационная сушка материала состоит из двух взаимосвязанных процессов, замораживания материала в низкотемпературном холодильнике с последующей его сублимацией в специальном сублимационном аппарате. Флаконы с материалом незамедлительно после разлива помещают в охлажденную до температуры -40.-50^oC камеру холодильника и промораживают при данной температуре в течение 8-16 ч. В 2-3 флаконах из разных кассет устанавливают 2-3 датчика для снятия в процессе сублимации показаний температуры продукта. Сушку проводят в сублимационных камерных аппаратах типа ТГ-50, КС-30 и др. Кассеты с замороженной тканью, не допуская оттаивания биопрепарата, быстро перегружают в подготовленную и охлажденную камеру, подключают датчики, закрывают камеру и включают вакуумные насосы и охлаждают до -35^oC. Спустя 1-3 ч при достижении показателей вакуума 9-10 мм рт.ст. включают нагрев полок до 30.40^oC, в зависимости от объема расфасовки. Нагрев поддерживают при данных температурных показателях до достижения окончания сушки. Плюсовая температура в биопрепарата не должна превышать 25^oC. Продолжительность сушки на сублимационных аппаратах различных марок допускается до 90 ч. После завершения сушки камеру через специальный фильтр, заполняют стерильным осушенным воздухом или инертным газом. После полной сублимации флаконы закрываются пробками и завальцовываются фольговыми колпачками.

Каждая серия полученного тканевого препарата подвергается определению активности и на безвредность по действию на свободно живущие простейшие тетрахимена пириформис. Флаконы маркируются с указанием всех данных сертификата и его биологической активности в условных единицах скорости размножения тетрахимены пириформис по сравнению с контрольными (без добавления БСМ).

Предложенный способ получения биологически активных препаратов отличается от существующих способов поэтапным воздействием на ткани нескольких физических факторов: охлаждения, облучения ультрафиолетовым спектром лучей и сублимация, что значительно повышает биологическую активность препарата, обеспечивает его стерилизацию и сохранение активности при длительном хранении.

Использование: ветеринарная медицина. Цель изобретения - повышение эффективности биостимулятора и совершенствование способа их получения. Сущность изобретения: заключается в комплексном воздействии на изолированные живые ткани вначале действия охлаждением и создание условий для парабиотических процессов. Затем осуществляют облучение, включая ультрафиолетовый спектр, и последующей сублимации. Все эти физические способы воздействия, охлаждение, облучение, и обезвоживание, проведенные в указанной последовательности, повышают биологическую активность тканевых препаратов, которое можно выразить в процентном отношении 15-70-15%.

Способ получения биологически активного препарата из тканей мозга, включающий гомогенизацию, отличающийся тем, что перед гомогенизацией ткани мозга охлаждают в течение 24 48 ч при 2 3^oС, а гомогенизат подвергают ультрафиолетовому облучению при мощности бактерицидной лампы 60 Вт и толщине облучаемого слоя 1,8 2,0 мм при скорости течения 100 мл/мин с последующей сублимационной сушкой.