Способ получения вещества, регулирующего водно-солевой обмен Советский патент 1978 года по МПК A61K35/30 

Изобретение относится к области медицины, а именно эндокринологии, и может найти применение для лечения стеков при заболеваниях сердечно-сосудистой системы и почек и других осложнениях гиперальдостеро ниэма, в космонавтике для профилактики экспрессного оводнения организма; перед приземлением, а также для исследования механизмов взаимодействия минералокортикоид- ной функгши надпочечников с нейроэндокринныкга центрами ее регуляции.

Известен способ получения вещества, регулирующего водно-солевой обмен, заключающийся в том, что исходную ткань- эпифиз гомогенизируют, полученным гомргенатом иммунизируют животных и из сыворо- ки крови животных выделяют целевой продукт l. Однако известный способ не обеспечивает высокой специфичности действия вещества.

Целью изобретения является повышение специфичности действия вещества.

Эта цель достигается тем, что в качеств исходной ткани используют субкомиссуральный орган, гомогенат которого перед иммунизаццей смешивают с адъювантом Фрейнда, а целевой продукт выделяют из сыворотки крови осаждением капр шовой кислотой.

Способ осуществляют след}ющим образом. Для приготовления вещества берут 5 г субкомиссурального органа мозга (1 часть) животных, гомогенизируют с 5 мл (равным объемом) физиологического раствора, смешивают (до получения гомогенной массы - эмульсии) с 2 ч стимулятора Фрейнда. В состав последнего входят ланолин и вазелиновое масло в соотношении 1:2 и 20 мг/мл сухой Вакцины БИЖ. Полученную смесь.(эмульсик и стимулятор Фрейнда) вводят в дозе О,1 мл/кг в подушечки задних конечностей и внутрикожно Б область спины собак равными объемами . Иммунизацию осуществляют трехкратно с интервалом .в одну неделю. Спустя 7 дней после окончания иммунизации с помощью реакции связывания комплекта определзают титр антител против субкомиссурального органа мозга и при его уровне не ниже 1:160 отбирают кровь иммунизированных животных в целях приготовления из нее сыворотки. Для усиления биологического дейс вин конечного

продукта - выделенного вещества, регули}рующёго водно-солевой обмен, из полученной сыворотки его концентрируют путем осаждения каприловой кислотой. Полученное вешест во nponjscKaroT через антимикробной фильтр и запаивают в ампулы. К 5 кг субкомисс уралыюго органа мозга добавляют 5 мл физиологического раствора и 10 мл стимулятора Фрейнда (3,3 мл ланолина, 6,7 мл вазелинового масла и 2О мг/мл сухой Вакцины БЦЖ). Полученную смесь тщательно гомоге 1изируют и вводят собаке весом 10 кг в дозе 0,1 мл/кг (всего 1 мл) внутрикож- но в область спины, справа и слева. Спустя неделю проводят повторную иммунизацию полученной смесью в дозе О,1 мл/кг (всего 1 мл) внутрикожно в подушечки передних лап и в область спины в дозе ,О,1 мл/кг (всего 1 мл). В течение всего периода опыта собаку содержат на стандартном рационе вивария. Спустя 7 дней после завершения иммунизации проводят контрольное определение титра антител в сыворотке крови против субкомиссурального органа мозга реакцией связывания комплемента. При титре 1:16О производят кровопускание 250 мл крови посредством канюли, введенной в сонную af)терию. Полученную кровь центрифугируют при комнатной температуре в течение 15 мин при ЗООО об/мин. Количество сыворо ки в надсадочным слое составляет 80 мл. Затем к 80 MJI сыворотки добавляют 16О мл ОД М ацетатного буфера при pil 4,8 и 1Ь1чкаприловой кислоты. Гloлyч 5И yю смесь эие;)гично встряхивают с помоцью шутел1з-гЧ парата в течение 5 мин и вновь центрифугируют при ЗООО об/мин в течение 10 мин.

Иадсадочную жидкость, содержащую искомое вещество, диализуют против дистиллирова ной воды при +5°С в течение 24 ч и коин центрируют до 1/10 первоначального объе- ма сыворотки с помощью сефадекса. атем в целях стерилизации пропускают через антимикробный фильтр и запаивают в ампулы. Вещество хранят при +5 С. Полученное вещество вводят- испытуемым животным, его биологическая активность высока.

Предлагаемый способ обеспечивает получение вещества, регулирующего водно-солевой обмен с высокой биологической активностью.

Формула изобретения

Способ получения вещества, регулирующего водно-солевой обмен, путем гомогенизации исходной ткани с последующей иммунизацией гомогенатом ткани животных и выделением целевого продукта из сыворотки крови, отличающийся те.м, что, с целью повышения специфичности действия ; вещества, в качестве исходной ткани используют субкомиссурш1ьный орган, гомогенат которого перед иммунизацией смешивают с адъювантом Фройнда, а целевой продукт, выделяют из сыворотки крови осаждением каприловой кислотой.

ИстоЧ шки информации, принятые во внимание при экспертизе;

1, Берхин Е. В. , Хелимский А. М. С роли эпифиза в регуляции секреции альдосте- рона . 1971, с. 61-64.