СПОСОБ ПОДАВЛЕНИЯ ИНДУЦИИРОВАННОГО АЛЛОТРАНСПЛАНТАЦИОННОГО ИММУНИТЕТА Российский патент 1997 года по МПК A61K31/01 

Изобретение относится к медицине, а именно, к трансплантологии, конкретно, к способам подавления индуцированного аллотрансплантационного иммунитета.

В известных способах подавления индуцированного аллотрансплантационного иммунитета применяются рентгеновское облучение, назначение массивных доз иммунодепрессантов химической и гормональной природы, использование антилимфоцитарной (АЛС) и антимакрофагальной сывороток (АМС), что приводит к выраженному иммунодефициту и повышению частоты инфекционных и онкологических заболеваний у этой категории больных. Наиболее близким к изобретению по методической сущности и достигаемому эффекту является способ подавления аллотрансплантационного иммунитета с использованием АЛС и АМС. Однако в силу того, что указанные сыворотки являются чужеродными биологическими агентами цитологического действия, их использование зачастую сопровождается тяжелыми токсико-аллергическими реакциями вплоть до анафилактического шока, что является основным недостатком метода.

Целью изобретения является подавление индуцированного аллотрансплантационного иммунитета путем отвлечения от трансплантируемого органа клеток, участвующих в запуске и реализации иммунного ответа на аллотрансплантат.

Цель достигается введением непосредственно перед трансплантацией в отдаленное от места трансплантируемого органа аттрактанта лейкоцитов и макрофагов. В качестве аттрактантов с успехом использованы противотурберкулезная вакцина ВСG, гидролизованный крахмал, парафиновое масло, коллоидный уголь и т. д. Ключевым свойством испытанных веществ является способность к привлечению и накоплению в месте инъекции лейкоцитов и макрофагов.

Для достижения цели разработана модель модификации иммунного ответа на аллотрансплантат, в качестве последнего использована линейнонеспецифическая опухоль мышей карцинома Кребо-2, а в качестве неспецифического иммуномодулятора гидролизованный крахмал.

Карцинома Кребо-2, утратившая в процессе многократных пассажей сильные трансплантационные антигены, перевивается на беспородных и всех использованных линиях мышей. Взаимоотношения этой опухоли и организма реципиента наиболее полно моделируют иммунологическую ситуацию при аллотрансплантации органов в клинической практике, где обязательным условием успешной трансплантации является совместимость донора и реципиента по сильным трансплантационным антигенам. Однако в связи с различиями по слабым антигенам тканевой совместимости карцинома Кребо-2, как и трансплантируемый орган в клинической практике, вызывает у донора формирование трансплантационного иммунитета той или иной силы, сдерживающего рост трансплантируемой опухоли. В клинической практике формирование трансплантационного иммунитета направлено на отторжение пересаженного органа.

В экспериментах было обнаружено, что отдаленное введение аттрактантов за несколько часов до трансплантации опухоли приводит к такой же стимуляции роста опухолей, как и глубокая иммунодепрессия реципиента гамма-облучением и назначением глюкокортикоидов (см. эксперимент 1).

В дальнейшем в прямых экспериментах было показано, что подобное введение анттрактантов значительно ослабляет иммунный ответ, индуцированный облученными опухолевыми клетками (эксп.2). Более того, отвлечение эффекторных клеток в место введения аттрактанта существенно ослабляет иммунный ответ даже на гетеротрансплантат, в качестве которого использованы эритроциты барана (эксп. 3). В многочисленных экспериментах, проведенных с целью определения оптимальных условий для подавления индуцированного аллотрансплантационного иммунитета, было установлено, что решающими условиями являются место и время введения аттрактанта относительно трансплантата. Введение аттрактанта необходимо производить за 2-3 ч до трансплантации органа в отдаленное от района трансплантации место.

Таким образом, предложенный способ подавления индуцированного аллотрансплантационного иммунитета заключается в отвлечении в место введения аттрактанта эффекторных клеток, участвующих в запуске и реализации иммунного ответа на аллотрансплантат. Использование в качестве аттрактанта биодеградабильных неантигенных веществ, подобных применяемому в экспериментах крахмалу, гарантирует от возникновения каких-либо побочных реакций, а по эффективности подавления иммунного ответа на аллотрансплантат не уступает таким мощным иммунодепрессивным воздействиям, как высокие дозы рентгеновского облучения и глюкокортикоидов (эксп.1). Наряду с высокой эффективностью, к преимуществам предлагаемого способа следует отнести простоту его осуществления, а также доступность и дешевизну используемых препаратов (аттрактантов).

Выяснение глубинных процессов, лежащих в феномене подавления индуцированного аллотрансплантационного иммунитета предлагаемым способом, требует многосторонних масштабных исследований.

В качестве примеров высокой эффективности подавления индуцированного аллотрансплантационного иммунитета предложенным способом приводим данные трех экспериментов.

Эксперимент 1. Контрольным и подопытным мышам трансплантировали по 200 тыс. опухолевых клеток в мышцу правого бедра в 90,1 мл физраствора, чередуя по одному животному из каждой группы.

Мышей 2-й группы иммунизировали облученными клетками карциномы Креб-2, которые вводили внутрибрюшинно в количестве 6 х 10⁶ на мышь за 96 ч до перевивки опухоли. Клетки облучали на гамма-установке с кобальтовым источником излучения дозой 10 крад при мощности дозы 1 крад/мин.

Иммунодепрессию мышей 3-й группы производили облучением на рентгеновской установке с алюминиевым фильтром 3 мм дозой 400 рентген при мощности дозы 50 рентген/мин за 24 ч до трансплантации опухолевых клеток. Сразу же после облучения дополнительно вводили по 1 мг микрокристаллической суспензии гидрокортизона формы Рихтер.

Мышам 4-й группы в мышцу левого бедра (контрлатерально) вводили по 1 мг лиофилизированной вакцины БЦЖ в 0,1 мл физраствора за 2 ч до трансплантации опухолевых клеток.

Мышам 5-й группы внутрибрюшинно вводили по 0,8 мл 4%-ной суспензии гидролизованного картофельного крахмала в растворе Хенкса за 2 ч до трансплантации опухолевых клеток.

Как следует из представленных результатов (табл.1), карцинома Кребо-2 у нормальных животных находится под сдерживающим ее рост влиянием иммунитета (гр. 1), подавление которого при иммунодепрессии сопровождается выраженной стимуляцией опухолевого роста (гр.3), а специфическая иммунизация - торможением роста опухолевых трансплантатов (гр.2). Отдаленное введение вакцины ВСG и крахмала за 2 ч до трансплантации опухолевых клеток приводит к такой же стимуляции опухолевого роста (гр.4,5), как и использование классической схемы иммунодепрессии (гр.3).

Прямым доказательством того, что при использовании аттрактантов происходит подавление индуцированного аллатрансплантационного иммунитета, служат результаты следующего эксперимента, в котором исследовано влияние аттрактантов на процессы специфической иммунизации.

Эксперимент 2. Иммунизацию мышей осуществляли введением в подушечку правой ляпки 1,2 миллиона облученных 10 крад клеток Кребо-2 с последующей через 24 ч ампутацией лапки. Как следует из полученных результатов избранный способ иммунизации весьма эффективен вес опухолей у иммунизированных животных (гр.2) более чем в два раза ниже в сравнении с неиммунизированными контрольными мышами (гр.1), у которых также проведена ампутация аналогичной лапки. Животным 4-й группы внутрибрюшинно ввели 1 мл 4%-ной суспензии гидролизованного крахмала за 2 ч до иммунизации, осуществленной таким же образом, как и в 1-й группе. Мышам 3-й группы в те же сроки ввели гидролизованный крахмал и через сутки ампутировали правую лапку. Через 7 дней после иммунизации животным всех групп в культю правого бедра перевили по 400 тыс. клеток карциномы Кребо-2. На 11-й день после трансплантации опухолевых клеток мышей забили и определили вес опухолей.

Как следует из представленных результатов (табл. 2), вес опухолевых трансплантатов у иммунизированных интактных мышей (гр.2) оказался в 2,4 раза меньше, чем у контрольных животных (гр.1). Предварительное введение крахмала значительно снижает иммунный ответ: вес опухолевых трансплантатов в этом группе (гр. 4) снизился лишь в 1,3 раза в сравнении с соответствующим контролем (гр.3).

Эксперимент 3. В этом эксперименте исследовали влияние аттрактантов на модификацию иммунного ответа на гетерологичный антиген, в качестве которого использованы эритроциты барана (ЭБ). С целью оттвлечения эффекторных клеток мышам 2-й группы за 2 ч до иммунизации в мышцу левого бедра ввели по 0,25 мг лиофилизированной вакцины ВСG в 0,1 мл физраствора, животным 3-й группы в это же время внутрибрюшинно ввели по 1 мл 4%-ной суспензии гидролизованного крахмала. Иммунизацию осуществляли введением в мышцу правого бедра 1х10⁶ эритроцитов барана в 0,1 мл физраствора. На 4, 5, 6-е сутки после иммунизации мышей забивали и учитывали иммунный ответ в реакции Ерне по количеству бляшкообразующих клеток на 1 млн. селезеночных клеток. Как следует из данных, представленных на чертеже, отвлечение эффекторных клеток на внутрибрюшинно введенный крахмал приводит к двухкратному снижению числа антителопродуцирующих клеток на высоте иммунного ответа (5-е сутки), а контрлатеральное относительно места иммунизации введение вакцины ВСG сопровождается еще более значительной ингибицией антителообразования антителообразования (в 3,8 раза относительно контроля).

Представленные результаты исследований свидетельствуют, что временное отвлечение эффекторных клеток (главным образом нейтрофилов и макрофагов) от места имплантации аллотрансплантата не уступает по глубине иммунодепрессивного эффекта обычно используемым с этой целью иммунодепрессантам (ионизирующее излучение, иммунодепрессанты химической и гормональной природы, АЛС и АМС) и отличается от них своей физиологичностью.

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии. Способ заключается во введении за 2-3 ч до трансплантации аттрактанта лейкоцитов и макрофагов. 2 табл., 1 ил.

Способ подавления индуциированного аллотрансплантационного иммунитета, отличающийся тем, что за 2-3 ч до трансплантации вводят аттрактант лейкоцитов и макрофагов.