СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА МИОКАРДА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 A61B5/107 

Изобретение относится к области медицины, в частности, к генетике и кардиологии.

Ишемическая болезнь сердца (ИБС) составляет более половины от всех сердечно-сосудистых заболеваний, а также находится на первом месте среди причин смертности в мире. Исследованиями последних лет выявлено, что ИБС начинается уже в детском возрасте и многие годы течет скрыто, поэтому в момент появления клинических симптомов предпринимать что-либо уже поздно, и единственным выходом является хирургическое лечение. Таким образом, необходима ранняя профилактика развития ИБС, особенно лицам, предрасположенным к ее развитию. В настоящее время достоверно установлено, что ИБС является мультифакториальным заболеванием с наследственной предрасположенностью, т.е. развивается у лиц с определенными генетическими дефектами под воздействием средовых факторов (факторов риска). У больных ИБС выявлены многочисленные генетические дефекты, включающие анатомические особенности строения сердца, наклонность коронарных артерий к спазму, замедленная регенерация повреждений интимы сосудов, нарушения липидного обмена, отклонения в свертывающей, антиоксидантной, иммунной системах и т.д. В последние годы предпринимаются попытки выявления генетических маркеров, тесно сцепленных с первичными дефектами. Так как генетические маркеры не изменяются на протяжении жизни, возможно их раннее определение с целью формирования групп риска по развитию ИБС уже в детстве.

Известны способы прогнозирования возможности развития ИМ с применением в качестве прогностических критериев сведений о наличии факторов риска ИБС (Халфен Э.Ш. Шварц И.Л. Шестилетняя апробация программы прогнозирования возможности возникновения ИМ. Кардиология, N 9, с. 43 47); атерогенных дислипопротеидемий (Кошечкин В.А. Выделение генетических факторов риска ИБС и их использование при диспансеризации. В сб. Профилактика наследственных болезней. Под ред. Н. П. Бочкова, М, ВОНЦ, 1937); дефектов свертывающей системы (Кошкин Ю. Л. Халфен Э.Ш. Кошечкин В.А. Свертывающая система крови как компонент наследственной предрасположенности к ИБС. Кардиология, 1991, N 4, с. 39 41), наследственной отягощенности по ИБС (Гумбатов Н.Б. Исмаилова С. С-Г. Бурлуцкий Т.И. и др. Прогноз вероятности развития ИБС с учетом данных семейного анамнеза у мужчин бакинской популяции в возрасте 20 54 лет. Кардиология, 1991, N 8, с. 43 50). Указанные способы обладают рядом недостатков: 1. трудность выявления, а иногда заведомо ложная информация больного о вредных привычках, сложность интерпретации нарушений питания, наличия НФА и др. 2. невозможность точного количественного определения степени воздействия отдельных факторов риска; 3. позднее выявление прогностических критериев (упускается время для ранней профилактики).

Указанных недостатков лишен способ определения возможности развития ИБС и ИМ по генетическим маркерам. К сожалению, для этой цели используется малое количество маркеров (в основном, группы крови ABO и резус). Наиболее близким к заявляемому и достаточно большим по набору маркеров является способ /1/. Помимо выявления маркеров системы HLA, в этом способе использовались антигены групп крови ABO, резус и MN. Недостатками этого способа являются: 1. небольшое число генетических маркеров, которые достоверно чаще встречаются среди больных ИМ (HLA B22 и NN); 2. недостаточно высокий эффект прогнозирования риска развития ИМ из-за малого числа маркеров.

Задачей настоящего изобретения является повышение точности прогнозирования возможности развития ИМ путем увеличения количества анализируемых маркеров.

Это достигается тем, что помимо маркеров группы крови ABO и MN, дополнительно определялись фенотипы Льюис, Gm 1, ABH-секреции, Tf, Gc, антитрипсина, ACP, PGM, Hp, рост, конституция, тип ушной серы, диагональная складка мочки уха (ДСМУ) и по значению прогностического коэффициента ПК≥5 прогнозируют высокий риск развития ИМ и при ПК≅-6 прогнозируют отсутствие риска.

Наибольший прогностический эффект оказался у следующих маркеров: наличие ДСМУ (RR 6,83, т.е. риск развития ИМ в 6,83 выше для лиц с наличием ДСМУ по сравнению с лицами, у которых нет ДСМУ); фенотип антитрипсина M₂ M₃ (RR 4,32), влажный тип ушной серы (RR 4,20), низкий рост (RR 2,52), нормостенический тип конституции (RR 2,39), фенотип Tf bc (RR 1,90) и Льюис a^- b^- (RR 1,80). Использованный у прототипа маркер групп крови резус исключен как не информативный. Информативность использованных маркеров представлена в табл. N 2.

Таким образом, увеличение количества маркеров до 15 значительно увеличивает эффективность прогнозирования возможности развития ИМ.

Клиническая апробация способа на большой группе больных (493 человека) показала его высокую достоверность.

Сущность способа заключается в следующем: у больных ИМ и лиц контрольной группы проводился забор крови из локтевой вены, после чего определялись генетические маркеры. Определение антигенов системы ABO проводилось стандартными сыворотками методом агглютинации на плоскости, резус - принадлежность устанавливали с помощью стандартных сывороток антирезус экспресс-методом. Антигены системы MN определяли с помощью иммунных сывороток анти-M и анти-N методом агглютинации на стеклах. Для определения P - принадлежности использовались сыворотки анти-P. Через два часа инкубации при комнатной температуре проводили центрифугирование в течение 1 мин и оценивали результаты агглютинации под микроскопом. Для определения группы крови Льюис использовали сыворотки анти-Lea и анти-Leb с полными антителами. После инкубации в течение часа и центрифугирования оценивали результаты агглютинации. Типы ABH секреции определялись по методике М.А. Бронниковой (1947 г.) Образцы слюны для типирования высушивались на марле. Типы гаптоглобина и группоспецифического компонента выявляли с помощью вертикального электрофореза в полиакриламидном геле, типы фосфоглюкомутазы и кислой фосфатазы с помощью электрофореза в 12% крахмальном геле. Для типирования вариантов антитрипсина применяли изоэлектрофокусирование в полиакриламидном геле (Троцкий Г.З. Анницкий Г.Д. 1984).

Типы ушной серы (влажный, сухой) определяли отоскопически. Рост измеряли в положении стоя с помощью ростомера (высокими считаются мужчины 170 см и выше; женщины 160 см и выше, низкими ниже указанных параметров (Автандилов Г. Г. 1990 г.) Типы конституции (нормо-, гипер- и астенический) определялись по методике М.В. Черноруцкого (1938 г.), наличие диагональной складки мочки уха (ДСМУ) по методике Халфена Э.Ш. (1984 г.)
После определения маркеров проводилась математическая обработка с помощью критериев X² и RR на ЭВМ IBM PC/AT.

Установлено, что среди больных ИМ достоверно чаще, чем в контроле, встречаются лица с фенотипами Льюиса a^-b^- (x² 15,24); Gm 1(-) (X² 7,20); Gc 1 2 (X² 6,65); антитрипсина M₁M₁ (X² 13,83); секреторы по системе ABH (X² 5,79); с влажным типом ушной серы (X² 37,56) низким ростом (X² 46,30); нормостеническим типом конституции (X² 32,07) и с наличием ДСМУ (X² 179,76). Распределение маркеров среди больных ИМ и здоровых лиц приведено в таблице N 1.

Таким образом, найден набор генетических маркеров, тесно связанных с развитием ИМ. С помощью маркеров разработана прогностическая таблица для определения степени риска развития ИМ (табл. N 2). На основании частоты встречаемости среди больных ИМ и здоровых лиц для каждого маркера вычислен прогностический коэффициент (ПК) в баллах (Е.В. Гублер "Вычислительные методы анализа и распознавание патологических процессов". М. Мед. 1978 г.) Маркеры, имеющие ПК со знаком (+), увеличивают риск развития ИМ, а имеющие ПК со знаком (-) уменьшают. Арифметическим сложением всех ПК находят сумму баллов. При сумме ПК +5 и больше у данного лица существует высокий риск развития ИМ, при сумме ПК -6 и меньше такой риск практически отсутствует. При промежуточных значениях прогноз неопределенный.

Данный способ прогнозирования можно использовать для массовых осмотров населения с целью раннего выявления предрасположенности к развитию ИМ.

Пример N 1. Больной М. 33 года, Ds: Первичный к/о заднебоковой ИМ, рецидивирующее течение; история болезни N 227. У больного выявлены следующие маркеры: группа крови A; MN; Льюис a^-b^-; GmI (-); Hp 1-1; Tf cc; Gc 1-1; антитрипсин M₁M₁; низкий рост (165 см); нормостенический тип конституции; влажный тип ушной серы; секретор по системе ABH; ACP aa; PGM 1-1; ДСМУ (+). Сумма прогностических коэффициентов равна: ПК 0+0+2+1+1+0+1+1-2+2+1+0+0+1+4 +14. Заключение: поскольку сумма больше +5, то у больного высокий риск развития ИМ, что и подтверждается перенесенным ИМ.

Пример N 2. Больной К, 41 год, Ds: Первичный т/м переднебоковой ИМ, осложненный формированием аневризмы передней стенки лев. желудочка, история болезни N 158. У больного определены маркеры: группа крови B; MN; Льюис a^-b⁺; GmI/(-); Hp 2-2; Tf cc; Go 1-2; антитрипсин M₁M₁; высокий рост (175 см); нормостенический тип конституции; влажный тип ушной серы; секретор по системе ABH; ACP bb; PGM 2-2; ДСМУ (+). Сумма прогностических коэффициентов равна: ПК 1+0-1+1+1+0+1+1-2+2+1+0+1+1+4 +11. Заключение: у больного сумма ПК больше +5 и существует высокий риск развития ИМ, что подтверждает перенесенный ИМ.

Пример N 3. Больная В. 46 лет, Ds: Первичный м/о переднебоковой ИМ, осложненный в остром периоде пароксизмом мерцания предсердий. История болезни N 201. У больной выявлены следующие маркеры: группа крови 0; NN; Льюис a^-b^-; GmI (+); Hp 1-1; Tf bc; Gc 2-2; антитрипсин M₂M₃; рост низкий (156 см); тип конституции гиперстенический; влажный тип ушной серы; секретор по системе ABH; ACP bs; PGM 1-1; ДСМУ (-). Сумма ПК составила: ПК 0+0+2-1+1+3-1+7+2-2+1+0-1+1-4 +8. Заключение: у больной высокий риск развития ИМ, что и подтверждается перенесенным ИМ.

Пример N 4. К. 50 лет, контрольная группа. У обследуемого выявлены следующие маркеры: группа крови 0; MM; Льюис a^-b⁺; GmI (+); Hp 2-1; Tf cc; Gc 1-1; антитрипсин M₁M₂; рост высокий (180 см); нормостенический тип конституции; сухой тип ушной серы; секреторы по системе ABH; ACP aa; PGM 1-1; ДСМУ (-). Сумма ПК составила: ПК 0-1+0-1-1-1+0-1-2-2-2-6+0+0+1-4 -16 баллов. Заключение: у данного лица отсутствует риск развития ИМ, что подтверждается данными ВЭМ и клинического обследования в кардиологическом отделении, исключившем ИБС.

Пример N 5. Я. 26 лет, контрольная группа. У обследуемой выявлены следующие маркеры: группа крови AB; MN; Льюис a^-b^-; GmI (+); Hp 2-1; Tf cc+ Gc 1-1; антитрипсин M₂M₂; высокий рост (172 см); астенический тип конституции; влажный тип ушной серы; несекретор по системе ABH; ACP bb; PGM 2-2; ДСМУ (-). Сумма ПК составила: -2+0-1-1-1+0-1-2-2-4+1-2+1+1-4 -17 баллов. Заключение: так как ПК меньше -6 баллов, у данной женщины практически отсутствует риск развития ИМ.

Приведенные примеры показывают, что с помощью разработанной нами прогностической таблицы можно с использованием генетических маркеров выделять лиц, предрасположенных к развитию ИМ, на ранних стадиях развития и роводить своевременные лечебно-профилактические мероприятия.

Изобретение относится к медицине, в частности, к генетике и кардиологии. Сущность способа, основанного на определении генетических маркеров систем ABO и MN, дополнительно определяют маркеры системы Льюис GmI, ABH-секреции, Tf, Gc, антитрепсина, Hp, ACP, P6M, рост, тип конституции, тип ушной серы, диагональную складку мочки уха (ДСМУ) и по значению прогностического коэффициента ПК≥5 диагносцируют инфаркт миокарда.

Способ диагностики инфаркта миокарда путем определения в крови генетических маркеров систем АВО и МN, отличающийся тем, что дополнительно определяют маркеры системы Льюис, GmI, АВН секреции, Tf, Gc, антитрипсина, Hp, ACP, PGM, а также рост, тип конституции, тип ушной серы, диагональную складку мочки уха, рассчитывают прогностический коэффициент и при его значении 5 и более диагностируют инфаркт миокарда.