ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ШИЗОФРЕНИИ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1997 года по МПК A61K31/155 A61K31/375 

Изобретение касается новых фармацевтических препаратов, включающих клозапин и акцептор радикалов, желательно, L-аскорбиновую кислоту и/или ее Na-соль.

Клозапин, имеющий химическое название 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5H-дибензо /b,e/ /1,4/ диазепин, является нейролептиком (1).

Клозапин эффективен в качестве антипсихопатического препарата при лечении больных, резистентных и/или у которых отмечается непереносимость к терапии с использованием классических антипсихопатических средств. Согласно полученным данным, соединение по всей антипсихопатической активности превосходит стандартные нейролептики, а у 30% больных, которые консервативно рассматриваются как резистентные к стандартным нейролептикам, лечение клозапином приводит к значительному улучшению состояния.

Несмотря на преимущества клозапина, и он может вызвать повышение риска развития гранулоцитопенин и агранулоцитоза. Риск гранулоцитопении возникает в результате терапии и использованием трициклических антипсихопатических препаратов, включая фенотиациновую группу. Гранулоцитопения характеризуется давлением количества гранулоцитов в крови ниже 1500 нм мм³; термин агранулоцитоз обычно используется в случае падения уровня гранулоцитов в крови ниже 500 нм мм³.

Первые 18 недель лечения клозапином считаются периодом наиболее высокого риска появления гранулоцитопении и агранулоцитоза. В том случае, если начало этого нарушения остается скрытым и лечение клозапином продолжается, гранулоцитопения развивается в заболевание повышенной тяжести. Если же прием препарата, обусловливающего гранулоцитопению, прекращают, то отмечается полное ее исчезновение.

Задачей настоящего изобретения является создание лекарственного средства для лечения шизофрении, позволяющего снизить риск развития гранулоцитопении и агранулоцитоза при превосходном антипсихопатическом эффекте, и способа его получения.

Поставленная задача достигается новым лекарственным средством, включающим в качестве активного начала 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5H-дибензо [b,e] [1,4]-диазепин и акцептор радикалов L аскорбиновую кислоту и/или ее Na-соль при массовом соотношении активное начало: акцептор радикалов, равном 1:3-40.

Лекарственное средство согласно настоящему изобретению может представлять собой дозовую форму для однократного введения, а также форму для орального введения, также таблетки. Предпочтительное содержание активного начала 25 мг, 100 мг. Лекарственное средство дополнительно может содержать целевые добавки.

Данное лекарственное средство получают путем смешения 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5H-дибензо [b,e] [1,4]-диазепина с акцептором радикалов L -аскорбиновой кислотой и/или ее Na-солью в соотношении 1:3-40.

Так, подобное комбинированное введение обеспечивает превосходный антипсихопатический эффект с значительно или заметно сниженной встречаемостью гранулоцитопении и агранулоцитоза или с полным их отсутствием, о чем можно судить по отсутствию образования реактивных метаболитов, например, свободных радикалов, и отсутствию ковалентного связывания с нуклеофилами, такими как глютатион и белок из очищенной миелопероксидазы и лейкоцитов человека, что видно из следующих тестов:
1. Метаболизм клозапина с участием пероксидаз продемонстрирован путем мониторинга исчезновения поглощения ультрафиолета при 290 нм в условиях инкубирования клозапина (100 мкМ) с 1 5 мкг/мл пероксидазы хрена (тип VI, Сигма, США) и 50 мкМ перекиси водорода в 0,05 М фосфатным буфере при pH 7,4. В этом случае, если к инкубационной смеси добавить физиологические концентрации аскорбата натрия (0,7 мМ), наблюдается реверсия метаболизма клозапина, на что указывает отсутствие изменений в характере ультрафиолетовой абсорбции.

2. Анализ обратного градиента высокоэффективно жидкостной хроматогрофии (ВЭЖХ) и одновременным определением радиоактивности в инкубационных смесях, содержащих сеченый тритием клозапин (100 мкМ; метка в положен 2, 3, 4 и 6), миелопероксидазу человека (20 единиц/мл, Сигма, США) или пероксидазу хрена (5 мкг/мл, тип VI, Сигма, США), и перекись водорода (400 мкМ) в фосфатном буфере (0,05 М, pH 2 7,4), показывали образование, по крайней мере, пяти пиков метаболитов с временем торможения: 3,3; 14,7; 18,7; 20,6 и 76 мин. Для ВЭЖХ использовали колонку обратной фазы (Supelco Inc. Bellefonte PA США LC-18- B, 5 мкм, 250х4,6 мм). Подвижная фаза включала (NH₄)₂CO₃ буфер pH 8,5 (растворитель A) и ацетонитрил (растворитель B). Пропорция растворителя B в течение 5 мин составляла 0% затем она увеличилась, достигая 20% к 10 мин, 24% к 60 мин и 80% к 100 мин. Ковалентное связывание клозапин производного материала с ферментом показано путем коэлюции радиоактивности с ферментным белком с колонки ВЭЖХ. Метаболизм клозапина и ковалентное связывание зависело от присутствия фермента и перекиси водорода. При добавлении физиологических концентраций аскорбата натрия (0,7 мМ) отмечалась полная реверсия метаболизма, т.е. при этом не было обнаружено метаболитов, а также радиоактивности, коэлюированной в этих условиях с ферментным белком. При добавлении к стандартной инкубационной смеси глютатиона (GSH, 10 мМ, pH 7,4) ковалентное связывание с ферментным белком и образование метаболитов также было снижено, однако в меньшей степени. Напротив, при использовании ВЭЖХ отмечено появление двух радиоактивных пиков, элюирующих на 28 и 53 минутах. Эти пики идентифицированы в качестве конъюгатов клозапина и клютатиона в положении 6 и 9 при помощи масс- и ЯМР-спектроскопии после выделения в ВЭЖХ.

3. Природу реактивных промежуточных продуктов, обусловливающих ковалентное связывание, исследовали путем мониторинга поглощения кислорода с использованием кислородного электрода Кларка в инкубационных смесях, включающих клозапин (100 мМ), пероксидазу хрена (5 мкг/мл) и глютатион (GSH) (10 мМ) в фосфатном буфере (0,05 М, pH 7,4). Поглощение кислорода также можно было наблюдать в случае замещения пероксидазы хрена миелопероксидазой человека (10 единиц) и глютатиона НАДФ-Н (10 мМ). Поглощение кислорода в данной инкубационной смеси указывает на первоначальное образование радикалов клозапина. Радикал клозапина способен к окислению глютатиона в тииловый радикал ("тииловый насос"), который, в конце концов, приводит к поглощению кислорода с образованием перекиси. Присутствие в инкубационной среде физиологических концентраций (0,7 мМ) аскорбата натрия препятствовало поглощению кислорода, т.е. первоначальному образованию радикала клозапина.

Образование свободных радикалов в отсутствие аскорбата натрия далее подтверждается данными спектроскопии с электронноспиновым резонансом (ЭСР). Глютатионилтииловые радикалы обнаруживаются путем захвата радикала 5,5-диметил-1-пирролин-N-оксидом (ДМРО, 100 мМ), на что указывает четырехлинейный ЭСР сигнал, соответствующий продукту присоединения глютатионил тиил радикала к ДМРО.

Дополнительным подтверждением снижения образования радикалов клозапина под влиянием аскорбата является более чем двухкратное повышение концентрации динамического равновесия аскорбиловых радикалов в пероксидазной системе, в которой присутствует клозапин. С помощью ЭСР спектроскопии аскорбиловый радикал был обнаружен в фосфатном буфере (pH 7,4, 50 мМ), содержащем 100 мкМ аскорбата натрия, 100 мкМ клозапина, пероксидазу хрена (8,3 мкг/мл) и перекись водорода (50 мкМ). Присутствие 1 мМ глютатиона только незначительно изменяло концентрацию аскорбилового радикала, однако, он почти полностью отсутствовал при наличии 1 мМ НАДФ-Н. В отсутствии клозепина отмечены очень низкие концентрации аскорбилового радикала. ЭСР сигнал нельзя было обнаружить в отсутствии перекиси водорода и аскорбата натрия.

4. В другом тесте, кровь из периферических сосудов, полученную от нормальных здоровых мужчин-добровольцев, обрабатывали гепарином и изолировали из нее фракции гранулоцитов/полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯ) в течение 1
2 ч, используя набор выделения (United Technologies Packard, hos Alamos, США). Готовили суспензию из ПМЯ в RPMI 1640 (Libco, Базель, Швейцария) среде и доводили концентрацию до 4•10⁶ клеток/мл перед добавлением в среду телячьей сыворотки (10% по объему). После инкубации радиоактивного меченого клозапина (100 мкМ, 37^oC, 72 ч) с выше указанными ПМЯ наблюдается связывание клозапина с ПМЯ, о чем свидетельствуют результаты вытяжной экстракции метанолом. В том случае, если радиоактивно меченый клозапин инкубируется вместе с аскорбатом натрия и ПМЯ, можно наблюдать уменьшение ковалентного связывания клозапина с ПМЯ.

Ковалентное связывание с ПМЯ (обнаружено путем вытяжной экстракции метанолом и ацетонитрилом) было также отмечено в результате инкубирования 50 мкМ клозапина при 37^oC в течение 30 мин в сбалансированном растворе Хэнкса, содержащем 2,5•10⁶ ПМЯ. Связывание значительно увеличивается в присутствии зимозана, подвергнутого действию опсонинов (обработка опсонинами выполняется путем инкубирования 5 мг в 1 мл свежей человеческой сыворотки в течение 30 мин при 37^oC и последующего трехкратного промывания в физиологическом растворе). Добавление 5 мМ аскорбата натрия к инкубационным смесям, содержащим обработанный опсонинами зимозан при выше описанных условиях приводит к снижению степени связывания клозапина с ПМЯ.

Путем использования выше упомянутых тестов для клозапина можно показать, что метаболиты клозапина, такие как 8-хлор-11-(1-пиперазинил)-5Н-дибензо/b, e/ /1,4-диазепин, 8-хлор-11-(4-метил-4-оксо-1-пиперазинил)-5Н-дибензо/b, e/-1,4-диазепин, 8-окси-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо-/1,4-диазепин, 8-окси-11-(1-пиперазинил)-5Н-бидензо/b, e-/1,4 диазепин, 8-метиотио-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо/b, e/ /1,4/-диазепин, 8-метиотио-11-(1-пиперазинил)-5Н-дибензо/b, e/ /1,4/-диазепин и 7-окси-8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5Н-дибензо/b,e/ /1,4/диазепин, образуют разновидности продуктов реакции, как, например, свободные радикалы. Их реактивные метаболиты также ковалентно связываются с нуклеофилами, например, глютатионом и белком из миелопероксилазы и лейкоцитов человека. Кроме того, можно продемонстрировать снижение образования реактивных метаболитов этих соединений под влиянием акцепторов радикалов, а также предотвращение ковалентного связывания в присутствии указанных акцепторов, как, например, аскорбиновой кислоты.

Представленные данные показывают, что клозапин и его метаболиты также ковалентно связываются с интактными человеческими клетками, причем добавление антиоксидантов, например аскорбиновой кислоты, препятствует этому связыванию.

При желании, аскорбиновую кислоту можно заменить эквивалентным количеством другого акцептора радикалов.

В клинических исследованиях также показано использованием клозапина в сочетании с акцептором радикалов для лечения шизофрении, причем эффект достигается при применении доз клозапина от 12,5 до 300 мг и аскорбиновой кислоты от 300 до 400 мг три раза в день. Использование этих дозировок дает хорошие результаты в лечении шизофрении при одновременном значительном снижении случаев появления гранулоцитопении и агранулоцитоза или полном их отсутствии у больных-шизофреников, в особенности у тех больных, которые резистентны к классическим антипсихопатическим препаратам, или страдают непереносимостью к ним из-за тяжелых побочных эффектов.

Альтернативным клиническим последствием является следующее.

В ходе проспективного, открытого, многоцентрового исследования в течение 26 недель обследуют 1500 больных с диагнозом резистентной к терапии шизофрении, которых никогда не лечили клозапином. Каждую неделю у больных проводили подсчет белых кровяных телец. Лечение начинают введением больным в 1-й 2-й дни, ежедневно, по 25 мг клозапина + 400 мг аскорбиновой кислоты. Обычно, эти дозы увеличивают следующим образом: 50 мг клозапина + 800 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в течение 3 4-го дней; 75 мг клозапина + 1200 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в 5 6-ой дни; 100 мг клозапина + 1600 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в 7-ой 8-ой дни; 150 мг клозапина + 1200 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в 9 10-й дни; 200 мг клозапина + 2000 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в 11 12-й дни: 250 мг клозапина + 1600 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в 13 14-й дни; и 300 мг клозапина + 1200 мг аскорбиновой кислоты, ежедневно, в 15 16-й дни. На основании клинического заключения поддерживающая доза составляет 200 600 мг клозапина + 1200 2400 мг аскорбиновой кислоты при ежедневном дробном введении.

Через 26 недель только 40% или менее, примерно, около 50 или 60% или менее из обследуемых лиц, склонных, согласно гистологическому анализу, к развитию гранулоцитопении или агранулоцитоза, проявляются относящиеся к этим нарушениям симптомы.

Совместное применение клозапина и акцептора радикалов, соответственно, рекомендуется для лечения шизофрении, что сопровождается значительным или довольно существенным снижением случаев гранулоцитопении или агранулоцитоза, или полным их отсутствием.

Лекарственное средство по изобретению используют для лечения шизофрении, обусловливающей значительное или довольно существенное снижение случаев гранулоцитопении или агранулоцитоза или полное их отсутствие у больных шизофренией, особенно у тех из них, которые или резистентны к терапии с использованием классических антипсихопатических препаратов, или которые характеризуются непереносимостью этих средств из-за тяжелых побочных эффектов. И заключается в одновременном введении указанным лицам терапевтически эффективных доз клозапина и акцептора радикалов.

Точные ежедневные дозы клозапина и акцептора радикалов, используемые в предложенном способе изобретения, зависят от типа акцептора, способа введения и характера заболевания.

Наиболее подходящие, рекомендуемые дозы клозапина для крупных млекопитающих, например, человека, находящегося в пределах от 12,5 до 1200 мг, желательно от 25 до 900 мг/ и более предпочтительно от 25 до 600 мг.

К акцепторам радикалов относятся анти-оксиданты, например, те из них, которые используются в пище.

Анти-оксиданты могут представлять собой восстановители, такие как:
I) L аскорбиновая кислота, соли L аскорбиновой кислоты, изоаскорбиновая кислота и ее производные, например, L аскорбиновая кислота 6-пальмитат или фосфатидил-L- аскорбиновая кислота. Анти-оксилантами могут быть, например,
II) (C_1-12)алкилфеноляты пирогаллола, такие как пропил, октил или додецил феноляты пирогаллола, бутилированный оксианизол, бутилированный окситолуол, α-, β-, γ- или δ -токоферол, a-, β-, γ- или δ -токотриенол, 3,4-дигидро-2,5,7,8-тетраметил-2-карбокси-2H-1-бензопиран-6-ол, 4,4'-/(1-метилэтилидин)бис(тио)-бис/2,6-бис-(1,1-диметилэтил)фенол/, нордигидрогваяретовая кислота, убигидрохиноп-10, ретинол и мочевая кислота.

Другие антиоксиданты включают:
III) (C_1-12)алкил оксибензоаты, например, метил, этил, пропил или бутил или их соли, например, соль натрия, или лазароиды.

Наиболее предпочтительными анти-оксидантами являются L- аскорбиновая кислота, L-аскорбиновая кислота 6-пальмитат, убигидрохинон-10 и L-токоферол, особенно L-аскорбиновая кислота.

Акцепторы радикалов используются в эффективных для них дозах, например, по данным литературы: от 1 мг до 2 мг.

В качестве акцептора радикалов, чаще всего используют аскорбиновую кислоту. При желании, может быть использована ее соль, например, соль натрия.

Подходящие рекомендуемые ежедневные дозы L-аскорбиновой кислоты колеблются от 0,5 г до, приблизительно, 20 г, предпочтительно, от 1 до 10 г, в особенности от 1 до 3 г или, например, от 3 до 8 г.

Рекомендуемое весовое отношение клозапина к L-аскорбиновой кислоте колеблется приблизительно от 1:3 до 1:40.

В качестве примеров предпочтительных количеств клозапина в дозовых формах для однократного введения можно назвать 12,5, 25, 50 и 100 мг. В качестве примеров предпочтительных количеств L-аскорбиновой кислоты в дозовых формах или однократного введения можно привести 500 и 1000 мг и особенно 300 мг или 400 мг. Удобнее всего вводить клозапин и акцептор радикалов от 1 до 3 раз в день.

Препараты изобретения включают любую соответствующую форму, удобную для внутреннего введения, желательно орального. Согласно изобретению, предпочитаемые препараты представляют собой формы, удобные для орального введения, такие как таблетки, особенно шипучие таблетки, а также капсулы.

Предпочтительнее, если препараты согласно изобретению состоят из дозовой формы для однократного введения, причем каждая дозовая единица включает предварительно определенное количество клозапина и акцептора радикалов. Препараты изобретения могут содержать клозапин и акцептор с добавлением подходящих фармацевтических разбавителей, носителей или других веществ, служащих в качестве нейтральной среды для лекарства, обычно используемых в фармацевтической практике. Например, таблетки, помимо активных агентов, могут содержать наполнители, вещества, обеспечивающие гранулированное состояние, дезинтегрирующие соединения, связывающие вещества, смазывающие вещества, стабилизаторы, красители, сахаристые и ароматизирующие вещества.

Соответственно, еще один аспект изобретения заключается в том, что оно обеспечивает процесс для производства фармацевтического препарата, включающего клозапин и акцептор радикалов; более детально, процесс изобретения обеспечивает получение однородной смеси клозапина радикалов с добавлением фармацевтически приемлемых разбавителя или носителя, а также создание, если требуется, дозовой формы для однократного введения.

Другой аспект изобретения заключается в том, что оно обеспечивает упаковку и специальный прибор для совместного введения клозапина и акцептора радикалов в том случае, когда клозапин и акцептор радикалов представлены порознь. Лучше, если клозапин и акцептор радикалов содержатся в упаковке или в соответствующем приспособлении в виде отдельных дозовых форм для однократного введения. Желательно, чтобы упаковка или соответствующее специальное устройство были снабжены инструкциями для одновременного введения предварительно определенных количеств клозапина и акцептора радикалов. Инструкции, например, могут быть отпечатаны непосредственно на упаковке или соответствующем устройстве.

Необходимо принять во внимание, что термин "клозапин", подразумевает использование указанного соединения в форме свободного основания и его фармацевтически приемлемых кислых примесных солей.

Следующие примеры иллюстрируют препараты данного изобретения и их получение.

Пример 1. Таблетки.

Таблетки, содержащие указанные ниже ингредиенты, можно получить при помощи традиционных методов и использовать для орального введения в дозе, например, 1 2 таблетки, 1 3 раза в день при лечении шизофрении (табл. 1).

Ингредиенты тщательно перемешиваются обычным способом и прессуются в отдельные таблетки. При желании, таблеткам можно придать форму, обеспечивающую легкое их разделение на две.

Пример 2. Шипучие таблетки.

Шипучие таблетки, содержащие ниже указанные ингредиенты, можно получать традиционными методами и вводить в дозе 1 таблетка 1 3 раза в день при лечении шизофрении (табл. 2).

Пример 3. Гранулы, упакованные в мешочки.

Гранулы, содержащие указанные ниже ингредиенты, можно получить обычными методами и вводить в дозе 1 2 мешочка 1 3 раза в день при лечении шизофрении (табл. 3).

Пример 4. Твердые желатиновые капсулы.

Твердые желатиновые капсулы, содержащие ниже указанные ингредиенты, можно получать традиционными методами и использовать для орального введения в дозах 1 2 капсулы а) или б), от 1 до 3 раз в день при лечении шизофрении (табл. 4).

Использование: в медицине для лечения шизофрении. Сущность изобретения: средство содержит клозапин и рецептор радикалов при их массовом соотношении 1: 30-40. Акцептор радикалов - L-аскорбиновая кислота и/или ее Na-соль. Средство может представлять собой дозовую форму для однократного введения, форму для орального введения, таблетки. Оно может содержать указанную смесь в количестве 25 мг или 100 мг, может содержать целевые добавки. Средство получают смешением компонентов. 2 с. и 6 з.п. ф-лы, 4 табл.

1. Лекарственное средство для лечения шизофрении, включающее в качестве активного начала 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазинил)-5H-дибензо[b, e][1, 4]-диазепин, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит акцептор радикалов L-аскорбиновую кислоту и/или ее Na-соль при массовом соотношении активное начало акцептор радикалов 1 3 40. 2. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой дозовую форму для однократного введения. 3. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой форму для орального введения. 4. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой таблетки. 5. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит активное начало в количестве 25 мг. 6. Средство по п.1, отличающееся тем, что оно содержит активное начало в количестве 100 мг. 7. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит целевые добавки. 8. Способ получения лекарственного средства для лечения шизофрении, отличающееся тем, что 8-хлор-11-(4-метил-1-пиперазил)-5H-дибензо[b, e][1, 4]-диазепин смешивают с акцептором радикалов L-аскорбиновой кислотой и/или ее Na-солью при массовом соотношении соответственно 1 3 40.

Приоритет по пунктам:
20.08.90 по пп.1 и 8 для соотношений компонентов 1 10 40.