СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ПОЛОСТИ НОСА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/487 

Изобретение относится к области медицины, в частности к оториноларингологии и может быть использовано для диагностики патологических изменений слизистой оболочки полости носа.

Известен способ диагностики патологического процесса в верхних дыхательных путях, в частности в полости носа, путем оценки интенсивности десквамации эпителия слизистой оболочки носа. С этой целью исследуют цитограммы носового секрета та, получаемые при непосредственном контакте стеклянной пластинки со слизистой оболочкой носа (мазки-отпечатки) или при переносе мазка со слизистой оболочки носа на предметное стекло [7, 5]
Считается, что для неизменной слизистой оболочки носа характерны цитограммы с отдельными клетками цилиндрического эпителия или небольшие группы клеток в редких полях зрения, небольшими пластами клеток поверхностного эпителия или небольшие группы клеток в редких полях зрения, небольшими пластами клеток поверхностного эпителия, а также нерезко выраженная эмиграция лейкоцитов. Патологические изменения слизистой оболочки носа сопровождаются увеличением в цитограммах количества клеток с признаками дистрофии, лейкоцитов. В зависимости от выраженности патологического процесса в верхних дыхательных путях, цитограмма носового секрета может характеризоваться наличием признаков деструкции эпителиального покрова носовой полости, увеличением количества нейтрофильных лейкоцитов с изменением формы клеток, лимфоцитов, плазматических клеток [8, 1, 3]
Недостатком данного способа диагностики патологического процесса в носовой полости является низкая достоверность результатов исследования, обусловленная неравномерным распределением клеточных элементов в мазках носового секрета, высокая вероятность повреждения клеток при приготовлении мазков и связанные с этим ошибки при интерпретации данных микроскопии, существенные временные затраты, связанные с необходимостью многоэтапной предварительной подготовки материала для исследования (высушивание, фиксация, окрашивание, микроскопия препаратов с подсчетом количества десквамированных клеток в полях зрения, качественной характеристикой клеточных элементов).

С целью уменьшения перечисленных недостатков предлагается использовать для забора материала для исследования специальную полимерную пленку, обладающую выраженными адгезивными свойствами, что способствует надежной фиксации на ней клеток эпителия слизистой оболочки носа [4] В дальнейшем полученный таким образом отпечаток окрашивается и микроскопируется по описанной выше методике. Подчеркивается, с помощью данной пленки достигается атравматичность манипуляции, а также, благодаря выраженным адгезивным свойствам пленки, возможность получения материала для исследования даже при отсутствии в носовой полости отделяемого. Однако в данном случае результаты исследования, в частности количество клеточных элементов в препарате, а следовательно, и в полях зрения, при микроскопии будут существенно зависеть от адгезивных свойств пленки, а не только от состояния слизистой оболочки носа, что, естественно, отрицательно сказывается на достоверности получаемых результатов.

Для повышения информативности исследования клеточного состава носового секрета используется метод последовательных смывов со слизистой оболочки носа с последующим подсчетом клеток в центрифуге в камере Ясиновского [2] Существенным недостатком данного способа является высокая вероятность попадания в промывную жидкость, а затем в центрифугат клеточных элементов из глотки и, с слюной, из полости рта, что не может не отражаться на достоверности результатов исследования.

Наиболее близким техническим решением является способ цитологического исследования носового секрета, при котором осуществляется гомогенизация носового секрета [6] При этом для цитологического исследования в центрифужную пробирку отбирается 0,5 мл носового секрета, который разводится в соотношении 1 1,2 5% раствором димексида.

Полученная смесь в течение 2-3 мин. встряхивается, а затем центрифугируется 15 мин при 3000 об/мин. Для исследования готовят 2 мазка из 0,1 мл клеточного осадка. Толщина клеточного слоя приготовленного мазка составляет 50 мкм. Полученный мазок высушивается, фиксируется метанолом, окрашивается по Романовскому-Гимза и микроскопируется.

Подсчет клеток производится с помощью квадратно-сетчатого окуляра при увеличении 200 (окуляр 10, объектив 20) или 280 (окуляр 7, объектив 40). Площадь поля зрения при таком увеличении составляет 4000 мкм², а количество клеток в одном поле зрения колеблется от 1 до 10. (n₁). Для обеспечения точности количественной оценки (процентного состава) клеток в препарате необходимо произвести подсчет не менее 200 клеток. Оптимальное количество полой зрения (m), в которых необходимо сосчитать клетки рассчитывается по формуле:
m≥200/n₁
Для нивелирования ошибок, обусловленных неравномерным распределением клеточных элементов на предметном стекле, поля зрения, необходимые для подсчета заданного числа клеток, рекомендуется выбирать по двум диагоналям предметного стекла. Количество полей зрения зависит от числа клеток в первом случайном поле зрения. Для определения количества клеток в 1 мм³ носового секрета (N) общее количество клеток в исследованных полях зрения (n) умножают на коэффициент (K):
N K • n
При расчете коэффициента (K) исходят из того, что площадь одного поля зрения при увеличении 200 составляет 40000 мкм², толщина мазка 50 мкм, а объем среды в одном поле зрения (V₁ 2000000 мкм³.

В соответствии с этим, в зависимости от количества полей зрения, рассчитывается объем исследований среды, то есть тот объем, в котором насчитывается N клеток (V mV₁). А количество клеток в 1 мм³ (N) определяют по формуле:
N K • n, где K 1/V
Значение числа N учитывают при подсчете процентного состава клеток мазка.

Несмотря на разностороннюю подготовку препарата для микроскопии следует отметить, что и при данном способе цитологического исследования носового секрета сохраняется возможность неравномерного распределения клеточных элементов по поверхности предметного стекла при приготовлении мазка, ошибок в выборе необходимого количества полей зрения, зависящего от числа клеток в первом случайном поле зрения. Все это отрицательно сказывается на достоверности результатов. Кроме того, данный способ не лишен и недостатков, традиционно присущих цитологическим исследованиям носового секрета - многоэтажность предварительной подготовки, длительный подсчет клеток в препарате, а также связан с необходимостью многоступенчатых вычислений с применением различных формул.

Таким образом, недостатками способа, взятого нами за прототип, являются: недостаточная точность, трудоемкость и значительные временные затраты.

Вместе с тем, сдвиги клеточного состава носового секрета, в частности увеличение числа клеток в носовой слизи лиц с патологическими изменениями слизистой оболочки носа, сопровождается разрушением клеток, усилением процессов дестабилизации клеточных мембран, накоплением в носовом секрете внутриклеточных ферментов, в частности флаво-бензосемихинонов. Все это оказывает существенное влияние на уровень свободных радикалов в носовом секрете, идентифицируемых методом электронного парамагнитного резонанса.

Целью предлагаемого способа является повышение точности исследования отделяемого слизистой оболочки носа, а также ускорение диагностики патологических изменений слизистой оболочки носовой полости.

Поставленная цель достигается путем исследования носового секрета. Новым в достижении поставленной цели является то, что в носовом секрете методом электронного парамагнитного резонанса определяют величину q фактора свободного радикала и при ее значениях в интервале 2,0030-2,0050 диагностируют наличие патологических изменений слизистой оболочки полости носа.

Значение этого показателя в данном случае определяется тем, что для каждого вида свободного радикала характерна определенная величина q фактора [9] Авторами установлено, что в носовом секрете лиц с неизменной слизистой оболочки носа, достоверно чаще (P < 0,001), по сравнению с обследованными с патологическими процессами в полости носа, регистрировались сигналы свободных радикалов с q фактором 2,0024-2,0028, что свидетельствует о статистически подтвержденном преобладании в носовом секрете здоровых людей свободных радикалов, представленных катионами и анионами полицилкических углеводородов. У лиц с патологическими изменениями слизистой оболочки носа в абсолютном большинстве случаев (80% наблюдений) значения q фактора сигнала свободных радикалов регистрировались в интервалах 2,0030-2,0040 и 2,0040-2,0050, что свидетельствует о наличии в носовом секрете данной категории обследованных свободных радикалов, представленных флавосемихинонами, бензосемихинонами, а также ионами арилокси- и феноксирадикалов.

Сравнительный анализ спектров электронного парамагнитного резонанса свободных радикалов позволяет констатировать различия значений q фактора свободного радикала у здоровых (фиг. 1) и обследованных с патологическими изменениями слизистой оболочки полости носа (фиг. 2).

Сопоставительный анализ предлагаемого решения и прототипа показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что в носовом секрете методом электронного парамагнитного резонанса определяют значение q фактора сигнала свободного радикала и при его величине в интервале 2,0030-2,0050 диагносцируют наличие патологического изменения слизистой оболочки полости носа, что соответствует критерию изобретения "новизна".

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение точности исследования, ускоряет диагностический процесс, а также обеспечивает использование способа в здравоохранении, что соответствует критерию "промышленная применимость".

При анализе известных способов было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков заявляемого способа на достижение поставленной цели, следовательно, изобретение отвечает требованию изобретательского уровня.

Способ осуществляется следующим образом:
Общепринятым методом (путем аспирации) производят забор 0,5-0,7 мл носового секрета, который вводят в тефлоновую трубку длиной 20,0 мм и диаметром 4,0 мм (пресс-форму) и замораживают в жидком азоте (747 K). Приготовленный таким образом препарат выдавливают с помощью пластмассового стержня из пресс-формы, помещают в кварцевый сосуд Дьюара, который устанавливают в резонаторе спектрометра и производят запись сигналов электронного парамагнитного резонанса. Затем определяют значение q фактора сигнала свободного радикала и при его величине в интервале 2,0030-2,0050 диагносцируют наличие патологических изменений в слизистой оболочке носа.

Пример 1. Больная Б. 49 лет предъявляет жалобы на затрудненное носовое дыхание, снижение обоняния, периодические сукровичные выделения из носа, постоянное ощущение сухости в носу и горле, охриплость. Часто, более 2-3 раз в год, болеет простудными заболеваниями (ОРЗ, грипп).

При осмотре носовой полости определяется нерезкая гиперемия слизистой оболочки носа диффузного характера, отчетливая инъекция сосудов на перегородке, наличие корок, скоплений подсыхающей слизи на поверхности носовых раковин. Другие ЛОРорганы без особенностей.

Диагноз: хронический субатрофический ринит.

В мазках-отпечатках определяются отдельные эпителиальные клетки в редких полях зрения. При исследовании носового секрета методом электронного парамагнитного резонанса установлено наличие сигнала свободного радикала с q - фактором 2,0037 (фиг. 3).

Пример 2. Больная Р. 47 лет предъявляет жалобы на периодическое закладывание носа, затруднение носового дыхания, обильные слизистые выделения из носа. Болеет в течение 3-4 лет. В последние 1-1,5 года перечисленные жалобы приобрели выраженный характер. Лечится самостоятельно. Отмечает положительный эффект от применения сосудосуживающих капель. При осмотре носовой полости определяется отечная гиперемированная слизистая оболочка, носовые раковины увеличены в размерах, носовые ходы сужены, отделяемое слизистое в большом количестве. Другие ЛОР органы не изменены.

Диагноз: вазомоторный ринит, нейро-вегетативная форма.

В мазках-отпечатках выявлены небольшие группы клеток эпителия в редких полях зрения. При исследовании носового секрета методом электронного парамагнитного резонанса констатировано наличие в отделяемом носа сигнала свободного радикала с q фактором 2,0049 (фиг. 4).

Таким образом, исследование носового секрета методом электронного парамагнитного резонанса позволило выявить в отделяемом слизистой оболочки носа данных больных сигналы свободных радикалов, относящихся к классу флаво- и бензосемихинонов. Указанное обстоятельство, как уже отмечалось, свидетельствует о нарушениях морфо-функционального состояния клеток эпителия носовой полости и, несмотря на отсутствие достоверных признаков усиления десквамации эпителия в мазках-отпечатках, является показателем наличия патологических изменений слизистой оболочки полости носа, что согласуется с результатами клинического обследования больных.

Следовательно, предлагаемый способ позволяют с высокой точностью выявить наличие патологических изменений в слизистой оболочке носа, является высокоинформативным, ускоряет диагностический процесс. Предлагаемый способ может быть использован в качестве дополнительного диагностического теста в сложных клинических случаях для уточнения состояния слизистой оболочки верхних дыхательных путей.

Предлагаемый способ не требует специальной подготовки больного, материала для исследования, получение которого осуществляется в реальных условиях ЛОРкабинета поликлиники, медицинского пункта промышленного предприятия с помощью обычной методики, которой владеет практически любой врач-оториноларинголог.

Список литературы
1. Абдулхамидов Х.Б. Функциональные и морфологические особенности слизистой оболочки верхних дыхательных путей у работающих на хлопкоочистительных заводах. Вестн. оториноларингологии, 1985, 4, с. 47-50.

2. Джафаров З.Р.-о. Сравнительная клинико-экспериментальная оценка изменений верхних дыхательных путей и обонятельного анализатора у работников нефтедобывающей, нефтеперерабатывающей и нефтехимической промышленности Азербайджана. Автореферат дисс. докт. Л. 1988, 29 с.

3. Карпова Л.Г. Цецарский Б.М. Кржечковская Г.К. и др. Опыт диспансеризации и эффективность целенаправленной профилактической работы оториноларинголов в условиях производства сложных химических удобрений. Вестн. оториноларингологии, 1985, 4, с. 66-70.

4. Накатис Я.А. Рязанцев С.В. Некоторые новые методы диагностики и лечения вазомоторных ринопатий. В кн. Материалы к региональной научн. практич. конф. по актуальн. вопр. оториноларингологии в зоне Байкало-Амурской магистрали. М. 1982, с. 77-79.

5. Панкова В.Б. Остапкович Е.Б. Клинико-эпидемиологические методы исследования ЛОРорганов у промышленных рабочих. Методические рекомендации, М. 1984, 15 с.

6. Плужников М.С. Лавренова Г.В. К методике цитологического исследования носового секрета. В кн. Материалы к зональной научн. практич. конф. оториноларингологов и выездной научной сессии МНИИ уха, горла и носа. М. 1987, с. 45-46.

7. Шантуров А.г. Дудкин С.В. Чернов А.Н. Методы исследования функционального состояния носа. Методические рекомендации. Иркутск, 1980, 20 с.

8. Штиль А. А. Аникин И.А. и др. Изменения слизистой оболочки полости носа у рабочих, находящихся в условиях промышленного производства. Вестн. оториноларингологии, 1984, 2, с. 37-40.

9. Борг Д. Применение электронного парамагнитного резонанса в биологии. В кн. Свободные радикалы в биологии. М. 1979, т. 1, с. 88-177.

Использование: медицина, оториноларингология, для диагностики патологических изменений слизистой оболочки полости носа. Сущность изобретения: в носовом секрете методом электронного парамагнитного резонанса определяют величину q - фактора свободного радикала и при значениях q - фактора в интервале 2,0030-2,0050 диагностируют наличие патологического изменения слизистой оболочки полости носа. 4 ил.

Способ диагностики патологических изменений слизистой оболочки полости носа путем исследования носового секрета, отличающийся тем, что в носовом секрете методом электронного парамагнитного резонанса определют величину q-фактора сигнала свободного радикала и при значениях q-фактора 2,003 2,005 диагностируют наличие патологического изменения слизистой оболочки полости носа.