ПРИМЕНЕНИЕ ЙОД-ЛАКТОНОВ ЭЙКОЗАПЕНТАЕНОВОЙ И ДОКОЗАГЕКСАЕНОВОЙ КИСЛОТ В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВООЖОГОВОГО СРЕДСТВА Российский патент 1997 года по МПК A61K33/18 A61K9/08 A61K33/18 A61K31/20 A61K31/70 

Изобретение относится к лекарственным препаратам липидной природы из ряда полиненасыщенных жирных кислот.

Известно противоожоговое средство линетол (представляющее собой смесь этиловых эфиров ненасыщенных жирных кислот: олеиновой, линолевой и линоленовой), полученное из льняного масла. Применяют линетол при лечении ожогов открытом способом, смазывая пораженную поверхность ровным слоем препарата один раз в день (М.Д. Машковский. Лекарственные средства. М. Медицина, 1987 г, изд.Х, т.2, с.92-94).

Наиболее близкими по достигаемому результату и по сущности является средство, проявляющее собой смесь полиеновых жирных кислот омега-3 серии (2). Смесь омега-3 кислот представляет собой маслянистую подвижную жидкость от светло-желтого до слегка коричневого цвета со специфическим рыбным запахом. Содержание в препарате эффективного начала эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот колеблется от 5 до 100%
При лечении ожогов смесь полиеновых жирных кислот омега-3 серии применяли открытым способом, смазывая пораженную поверхность два раза в день.

Задача, разрешаемая изобретением, создание новых высокоэффективных противоожоговых средств.

В изобретении предлагаем применение йод-лактонов эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот в качестве противожогового средства.

До настоящего времени не известно применение йод-лактонов омега-3 серии кислот в качестве противоожогового средства.

Применение йод-лактонов при ожоге значительно превосходит результаты от применения официального аптечного препарата линетол и, что явилось неожиданностью, даже превосходит результаты от лечения этиловыми эфирами омега-3 кислот.

Суммарные йод-лактоны эйкозапентаеновой и докозагексакновой кислот представляют собой маслянистую жидкость красно-бурого цвета, легко подвижную, не теряющую жидкой консистенции при охлаждении до -6^oС.

Содержание в препаратах йод-лактонов может колебаться от 0,5% до 100% При увеличении в препарате концентрации йод-лактонов противоожоговое действие возрастает.

Устойчивые суммарные йод-лактоны экозапентаеновой кислоты и докозагексаеновой кислоты получают как промежуточный продукт при получении докозагексаеновой, эйкозапентаеновой и арахидоновой кислот или их смеси [1] На смесь жирных кислот, полученных омылением рыбьего жира, действуют после перевода в калиевые соли 0,5-6,5 кратным избытком йода в присутствии йодида и гидрокарбоната калия с получением йод-лактонов. Полученные йод-лактоны после оттитрования избытка йода гипосульфитом натрия экстрагируют этилацетатом из щелочной среды. Растворитель отгоняют, добавляют гексан, полученный раствор промывают раствором карбоната натрия или калия в водном спирте и отделяют целевой продукт колоночной хроматографией.

Противоожоговое действие изучалось на крысах. В основе диагностических признаков эволюции ожоговой раны были нарушения кровообращения. Кожа крыс в основном сходна с человеческой и образована эпидермисом, дермой и подкожной жировой клетчаткой, наиболее выраженной в области спины. Под волосистой частью эпидермис у крыс построен менее сложно и состоит из трех слоев: базального, шиповатого и рогового. Вследствие этого у животных при ожоге II степени, в отличии от человека, не происходит образования пузырей. Кроме того, используемые в опытах крысы Вистар альбиносы, у которых специфическая функция меланоцитов в базальном слое эпидермиса нарушена и меланоцитовый пигмент не образуется.

Характерными нарушениями микроциркуляции крови при термическом ожоге являются: двухфазная сосудистая реакция (кратковременное сужение и длительное расширение) микрососудов в области поражения; значительное повышение проницаемости стенки посткапиллярных венул, замедление кровотока (вплоть до его полной остановки стаза). Сосудистый стаз является показателем глубокого поражения тканей.

От эритроцитов, вышедших из кровеносного русла в окружающую ткань, происходит отщепления гемоглобина, т.е. гемоз, который при ожогах типичен. В течение первых 24 ч гемоглобин распадается на гемосидерин, что придает тканям местами ржаво-бурую окраску. На поверхности кожи это проявляется как пятно.

Отчетливо выраженный стаз развивается лишь к концу первых суток после ожога. Наличие сосудистого стаза является показателем глубокого поражения тканей. Нередко стазы сочетаются с нарушением трофики тканей. В кожных покровах это приводит к местному некрозу, который определяется в виде некротического струпа. Эластичность струпа кожи крыс альбиносов, как и его цвет (от светло-коричневого до красно- и темно-коричневого), соответствует глубине поражения, той или иной стадии эволюции раневого процесса, а также, насколько мы можем экстраполировать, одной из степеней ожогов, принятых для человека на 27 Всесоюзном съезде хирургов в 1960 году.

На основании изложенного ежедневно выявляемые патологические признаки при ожоге сгруппированы в четыре основные группы ( по стадиям эволюции ожоговой раны):
1 кожа на всю толщину эластична, имеются пятна вследствие гемолиза и образования гемосидерина;
2 кожа на всю толщину эластична вместе с имеющимся на ее поверхности мягким светло-коричневым струпом;
3 кожа на всю толщину эластична вместе с имеющимся на ее поверхности мягким красно-коричневым струпом;
4 плотный, напоминающий монету, темно-коричневый струп,часто с различным рисунком расширенных кровеносных сосудов в состоянии стаза.

Ни в одном случае в опытах с применением вышеуказанных препаратов струп не спаивался с подлежащими мышцами, не расплавлялся, а при контрольных вскрытиях животных глубина патологического процесса не доходила дальше подкожной жировой клетчатки.

После измерения площади, занимаемой патологическим элементом, высчитывали процент этой площади ко всему участку кожной поверхности, который находился в контакте с нагретой частью металлического предмета.

На четыре группы распределяли крыс по стадиям эволюции ожоговой раны, описанным выше, раздельно по испытуемым препаратам. На каждый день строили гистограммы распределения животных. Статистическую обработку проводили в сравнении каждой опытной группы с контрольной (вазелин) по формуле
,
где X² критерий соответствия (критерий согласия);
f₁ и f₂ частоты классов первого и второго рядов;
n₁ и n₂ число особей в каждом из них.

Статистически достоверными считали различия при Р <0,05.

Пример. Применение йод-лактонов эйкозапентоеновой и докозагексаеновой кислот в качестве противоожегового средства при термическом ожоге.

В опыте было использовано 126 самок крыс Вистар весом 139-150 г из питомника АМН СССР "Столбовая", которых содержали по 7 особей в клетках на стандартной диете, принятой в питомнике, вода ab libitum. Животных разделили на 5 опытных групп по 21 крысе в каждой.

1 группа служила контролем, кожа крыс после ожога обрабатывалась вазелином;
2 группа обрабатывалась продажным аптечным противоожоговым препаратом линетол ( этиловые эфиры жирных кислот масла льна );
3 группа обрабатывалась препаратом омега-3 кислот ( этиловые эфиры полиеновых кислот из морского сырья с содержанием 35% эйкозапентаеновой кислоты и 23% докозагексаеновой кислоты, обладающих противоожоговым действием, 42% минорные компоненты );
4 группа обрабатывалась 0,5% -ным раствором суммарных йод-лактонов в этиловых эфирах (0,5% йод-лактоны эйкозапентаеновой кислоты и докозагексаеновой кислоты, 99,5% препарат, которым обрабатывалась 3 группа);
5 группа обрабатывалась 5%-ным раствором суммарных йод-лактонов в этиловых эфирах;
6 группа обрабатывалась чистыми йод-лактонами эйкозапентаеновой кислоты и докозагексаеновой кислоты.

Перед экспериментом перед эфирным наркозом у крыс выщипывали шерсть в области средней трети спины с участка кожи размером 25х25мм. Для получения поверхностной термической травмы непосредственно перед ожогом шприцом под обнаженную кожу вводили 3 см³ воздуха для образования в месте контакта равномерной воздушной подушки. Ожог вызывали в течение 3 с, прикладывая к коже массивный металлический предмет, имеющий в месте контакта круглую ровную поверхность диаметром 20 мм с температурой 80^oC. До полного высыхания препаратов крысы содержались раздельно друг от друга. Эксперимент проводили с 9 до 12 ч, повторно препараты наносили в 18-19 ч. Время обработки в опыте оставалось неизменным. Через сутки и далее ежедневно с 9 до 10 ч производили осмотр и замер отдельных патологических элементов, образующихся в процессе эволюции ожоговой раны, и описывали их согласно изложенному выше методу.

Результаты исследований приведены в таблице. Для наглядности эти результаты представлены в виде гистограмм ( см. фиг.1 и 2 ), где выделена четвертая стадия, как наиболее неблагоприятная, при которой раненая поверхность покрыта плотным темно-коричневым струпом.

На гистограммах видно, что через сутки после поверхностного термического ожога у половины животных, обработанных затем вазелином, отмечали ясно выраженную гиперпигментацию (результат распада гемосидерина) на коже, сохранявшей эластичность. У остальных выявлены патологические признаки поражения кожной поверхности от мягких светло-коричневых до плотных темных струпьев, заключавших в своей толще ярко выраженные тромбированные сосуды.

Обработка крыс линетолом сдержала у 80% крыс развитие патологических процессов в сторону образования струпьев (Р 0,61, см. таблицу).

Обработка препаратом омега-3 кислот стабилизировала в первые сутки патологию на стадии гиперпигментации у 95% животных ( P 0,03).

На вторые и третьи сутки в результате прогрессирующей кожной ишемии ожоговая рана в первых трех подгруппах продолжала эволюционировать, но после обработки препаратом омега-3 кислот отмечено статически достоверное замедление патологических элементов: соответственно, на вторые и третьи сутки по отношению к контролю P _1-30,0018 и P _1-3 =0,0031. Обработка линетолом дает при этом P _1-2 0,65 и P _1-2 0,36 (см. таблицу).

На пятые сутки у крыс, обработанных препаратом омега-3 кислот, лишь у двух особей появился твердый темно-коричневый струп, против половины таковых в контроле и почти трети при обработке линетолом. На этот же срок приходится начало отслоения струпьев во всех группах, причем при обработке омега-3 кислотами этот процесс происходит быстрее и, вероятно, не столь болезненно, т. к. большинство животных в этой группе имело мягкий и тонкий струп на эластичной во всю толщину коже в месте поражения, P _1-30,0029, у линетол P _1-2 по отношению к контролю (таблица).

На седьмые сутки статические достоверные различия в преимуществах обработки поражений омега-3 кислотами продолжает составлять P _1-3 0,65 (таблица).

На девятые сутки струпья во всех группах значительно отходят от поверхности кожи, соединяясь с ней на крайне ограниченном участке в центре, причем при обработке препаратом омега-3 кислот кожа под струпьями эластична и имеет бледно-розовый оттенок, слабо отличаясь от непораженной кожи, в то время как при обработке вазелином и линетолом она ярко-красная, местами с явлениями вторичного некроза, т.е. образования вторичных струпьев, на ощупь утолщена и слабо эластична, с явлениями сращения с подлежащими тканями, что указывает на углубление и незавершенность паталогических процессов.

Учитывая высокую противоожоговую активность полиеновых жирных кислот омега-3 серии из серии морского сырья, содержащих в качестве активных ингредиентов эйкозапентаеновую кислоту и докозагексаеновую кислоту, была предпринята попытка усилить эту активность путем добавления суммарных йод-лактонов и докозагексаеновой кислоты в этиловые эфиры этих же кислот (группы 4, 5, 6).

Через сутки после термической травмы отмечали в четвертой, пятой и шестой группах тенденцию к противоожоговому действию, в последующие двое трое суток и обработки ожоговых ран препаратами, содержащими йод-лактоны, констатировали резкое замедление эволюции ожоговых ран по сравнению с контрольной группой высокой степени достоверности. Так, на вторые сутки P _1-6 0,001; на третьи P _1-4 <0,0001: P _1-6 <0,0001, что превосходит эффект омега-3 кислот ( см.таблицу), причем на третьи сутки у половины животных в 4, 5, 6 группах начался процесс отслоения мягких как светло-коричневых, так и красно-коричневых струпьев (5 группа). На пятые и на седьмые сутки различие в картине ран, леченных препаратами лактонами, по отношению к контрольной группе продолжало оставаться значительным. При этом своим положительным эффектом выделялись препараты, содержащие 0,5% йод-лактонов (4 группа) и чистые йод-лактоны (6 группа), однако обработка чистыми йод-лактонами вызвала окрашивание кожи и шерсти вокруг в коричневый цвет. Подобного окрашивания не наблюдалось при применении йод-лактон в концентрации 0,5% и 5%
К девятым суткам полное отторжение струпьев в группах, обработанных препаратами с йод-лактонами, в целом происходило аналогично группе третьей с той лишь разницей, что процесс отторжения струпьев начинается уже на третьи сутки против пятых-седьмых суток при обработке омега-3 кислотами и поэтому протекает в более легкой форме.

Таким образом, описанные наблюдения, их группировка по стадиям эволюции ожоговой раны с последующим статистическим по критерию соответствия хи-квдрат (Х ²) позволяют заключить, что обработка препаратами, содержащими йод-лактоны эйкозапентаеновой и докозагексазагексаеновой кислот в этиловых эфирах этих же кислот непосредственно после термического поражения (далее ежедневно) кожи крыс, резко задерживает развитие патологических элементов в ожоговой ране при сохранения эластичности кожи, уменьшает некротические процессы, что, в конечном счете, менее травматично для пострадавших и обеспечивает более скорое и качественное заживление ожоговой раны, исключает вторичные некрозы и углубление ожогов. По выше приведенным параметрам препараты с йод-лактонами превосходят не только линетол, применяющийся в настоящее время при ожогах, но и омега-3 кислоты.

К достоинствам препаратов, содержащих йод-лактоны, следует отнести их доступность, т. к. способ получения йод-лактонов хорошо разработан. Способ включает ряд простых операций, не требующих сложного оборудования, не трудоемок. Имеется широкая сырьевая база для получения новых противоожоговых препаратов жиры рыб и морского зверя.

Изобретение относится к лекарственным препаратам липидной природы из полиненасыщенных жирных кислот. Ранее из биогенных стимуляторов для лечения ожогов применялись линимент алое, сок коланхоэ, винилин, линитол, линимент тезана, танин, смесь полиеновых жирных кислот омега-3 серии. Применение йодлактонов при лечении ожогов значительно превосходит результаты применения этих официально признанных аптечных препаратов. Ранее йод-лактоны как лекарственное средство не применялись. Известно их применение как химического вещества в химическом синтезе. 2 ил.,1 табл.

Применение йод-лактонов эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислот в качестве противоожогового средства.